Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒,不含感受态细胞
Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒,不含感受态细胞
Invitrogen™

Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒,不含感受态细胞

Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒提供了一种简单的方法,可高效 (>80%) 克隆使用校正读码耐热 DNA 聚合酶扩增的平末端 PCR 产物了解更多信息
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货号数量
K27502020 次反应
K27504040 次反应
货号 K275020
价格(CNY)
2,100.00
飞享价
Ends: 31-Dec-2025
4,197.00
共减 2,097.00 (50%)
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数量:
20 次反应
价格(CNY)
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Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒提供了一种简单的方法,可高效 (>80%) 克隆使用校正读码耐热 DNA 聚合酶扩增的平末端 PCR 产物。Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒使用多用途 pCR™-Blunt 克隆载体和 ExpressLink™ T4 DNA 连接酶,在五分钟室温连接步骤中生成一个连接产物。

含 pCR™-Blunt 载体的 Zero Blunt™ 克隆™试剂盒的特点:
快速便捷—5分钟室温连接
高效—用于阳性选择的 ccdB 基因可产生 >80% 的具有正确插入片段的克隆
灵活—可选择卡那霉素或 Zeocin™ 抗性,实现灵活的抗生素选择

pCR™-Blunt 载体提供:
•位于 PCR 产物插入位点侧翼的 EcoR I 位点,可切除插入片段
• T7 启动子/引物位点,用于体外 RNA 转录和测序
• 用于测序或 PCR 筛选的 M13 正向和反向引物位点

Zero Blunt™ PCR 克隆如何工作
Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒设计用于在非重组的低背景下克隆平末端 PCR 片段(或任何平末端 DNA 片段)。pCR™-Blunt 载体含有与 LacZα 的 C 端融合的致死性大肠杆菌 ccdB 基因(Bernard 等人,1994)。连接平末端 PCR 片段可破坏 lacZα-ccdB 基因融合的表达,从而在转化时仅允许阳性重组体生长。当对转化混合物进行平板接种时,杀死含有非重组载体的细胞。

试剂盒配置
Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒有多种配置可供选择:含 One Shot™ TOPO10 化学感受态大肠杆菌(K2700-20 和 K2700-40)以及不含感受态细胞(K2750-20 和 K2750-40),有 20 次和 40 次反应试剂盒规格。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株不包括在内
克隆方法Blunt PCR
产品线TOPO™, Zero Blunt™
产品类型PCR 克隆试剂盒
促进剂T7
数量20 次反应
载体Blunt DNA 克隆载体
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
Zero Blunt™ PCR 克隆试剂盒包含线性化 pCR™-Blunt 载体、ExpressLink™ T4 DNA 连接酶、5X ExpressLink™ T4 DNA 连接酶缓冲液、对照模板、dNTP、无菌水以及 M13 正向和反向引物。

将所有组成部分储存在 -20°C 下。正确存放时,所有试剂均可保证 6 个月的稳定。

常见问题解答 (FAQ)

对TOPO TA克隆来说最佳的插入片段:载体比例是多少?是否有公式来计算用量?

我们建议起始摩尔比为1:1(插入片段:载体),范围为0.5:1到2:1(插入片段:载体)。对TOPO克隆来说,2kb大小的 PCR产物的ng值应在5- 10ng之间。

计算公式:< br / > 插入片段长度(bp)/ 载体长度(bp)x 载体用量(ng)= 插入片段:载体比为1:1时所需的插入片段的用量(ng)。

插入片段:载体的最佳比例是多少?是否有公式可以进行计算?

您可能需要尝试不同的插入片段:载体比例,范围从1:1至15:1。

公式:
length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio (插入片段长度 (bp) X 载体重量(ng) ) / 载体长度 (bp) = 插入片段:载体比例为1:1时所需的插入片段重量(ng)

当我仅使用载体(无插入片段)进行TOPO反应作为阴性对照时,我得到了很多仅包含载体的克隆。这是否说明我的TOPO载体发生重新连接了?

仅使用载体进行转化不是推荐的阴性对照实验。拓扑异构酶改构过程不是一个效率100%的过程,因此,在您的混合物中将会存在“不含插入片段的载体”,因此会产生克隆。

我正试图将我的磷酸化的PCR产物克隆进一个TOPO载体,而我没有获得任何克隆。但是,当我将同样的产物克隆进一个TA载体时,克隆进行的非常顺利。这是为什么?

磷酸化的产物可以进行TA克隆但不能进行TOPO克隆。这是因为所需的磷酸基团已经包含在载体DNA和拓扑异构酶形成的中间体复合物中。TOPO载体含有一个与拓扑异构酶共价结合的3' 磷酸基团和一个5'磷酸基团。非TOPO载体的线性载体(TA和Blunt)含有一个3' OH基团和一个5'磷酸基团。磷酸化产物在进行TOPO-克隆之前应该用磷酸酶(CIP)处理。

我获得了很多克隆,但是没有一个含有我的目的插入片段。我应该如何解决这一问题?

你可能克隆了一段假阳性序列。TA和TOPO克隆对于存在于某些PCR反应中的小片段(< 100 bp)非常高效。使用硅基DNA纯化系统对插入片段进行凝胶纯化或者电洗脱。确保所有溶液均不含核酸酶(例如避免共用溴化乙锭染色器皿)。