Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒，含 One Shot™ TOP10 Electrocomp™ 大肠杆菌
Zero Blunt&trade; TOPO&trade; PCR 克隆试剂盒，含 One Shot&trade; TOP10 Electrocomp&trade; <i>大肠杆菌</i>
引用和文献 (2)
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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒，含 One Shot™ TOP10 Electrocomp™ 大肠杆菌

Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒提供了较快速且较简单的方法，可高效克隆使用校正性耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物。试剂盒包括线性化和拓扑异构酶 I 活化了解更多信息
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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒提供了较快速且较简单的方法，可高效克隆使用校正性耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物。试剂盒包括线性化和拓扑异构酶 I 活化 pCR™-Blunt II-TOPO™ 载体，用于无需使用连接酶 (1) 的 5 分钟台式连接。pCR™-Blunt II-TOPO™ 载体还具有以下特点：

•ccdB 基因用于阳性选择 (2)
• 位于 PCR 产物插入位点旁侧的 EcoR I 位点，可方便地切除插入片段
• 有卡那霉素和 Zeocin™ 抗性基因供您在大肠杆菌中进行选择
• SP6 启动子/引物位点用于体外 RNA 转录和测序
• M13 正向和反向引物位点用于测序或 PCR 筛选

选定 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可通过与 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒（50 次制备）结合的套装试剂盒提供，用于对您的 TOPO™-克隆插入片段进行快速质粒纯化以进行下游分析。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株TOP10
克隆方法Blunt TOPO™
产品线One Shot
产品类型PCR 克隆试剂盒
促进剂SP6
数量25 次反应
载体Blunt DNA 克隆载体
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
盒 1：
• 线性化和拓扑异构酶 I 活化 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体
• 盐溶液
• dNTP
• 对照模板
• M13 正向和反向引物
• 无菌水

在 -5 至 -30°C 下储存。
妥善储存时，所有试剂均可稳定储存 6 个月。

盒 2：
• One Shot™ 化学感受态或 Electrocomp™ 大肠杆菌
• S.O.C. 培养基
• 超螺旋 pUC19 对照质粒

在 -68 至 -85°C 下储存。

常见问题解答 (FAQ)

pCR2.1-TOPO和pCR4-TOPO载体有什么区别？

两个载体的骨架非常相似。主要的不同在于pCR4-TOPO载体测序引物位点距离PCR产物插入位点仅33 bp。这使得对插入序列进行测序时需要读取的载体序列能最小化，从而使pCR4-TOPO载体非常适合进行测序应用。

pCR2.1-TOPO 和pCRII-TOPO载体的区别是什么？

两个载体的骨架非常相似。主要的不同在于pCRII-TOPO 载体是一个双启动子载体，包含SP6和T7启动子用于体外转录/测序，而 pCR2.1-TOPO仅包含T7启动子用于体外转录/测序。两个载体均含有M13 正向和反向引物位点用于测序或PCR检测。

你们的TOPO克隆试剂盒包含一个对照模板和一个对照引物。我可以获得对照模板的序列吗？

对照模板的序列是受专利保护的。

对TOPO TA克隆来说最佳的插入片段：载体比例是多少？是否有公式来计算用量？

我们建议起始摩尔比为1:1(插入片段：载体)，范围为0.5：1到2：1(插入片段：载体)。对TOPO克隆来说，2kb大小的 PCR产物的ng值应在5- 10ng之间。

计算公式：< br / > 插入片段长度（bp）/ 载体长度（bp）x 载体用量（ng）= 插入片段：载体比为1：1时所需的插入片段的用量（ng）。

插入片段：载体的最佳比例是多少？是否有公式可以进行计算？

您可能需要尝试不同的插入片段:载体比例，范围从1:1至15:1。

公式：
length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio (插入片段长度 (bp) X 载体重量(ng) ) / 载体长度 (bp) = 插入片段:载体比例为1:1时所需的插入片段重量(ng)

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引用和文献 (2)

引用和文献
Abstract
Telomere maintenance in telomerase-deficient mouse embryonic stem cells: characterization of an amplified telomeric DNA.
Authors:Niida H, Shinkai Y, Hande MP, Matsumoto T, Takehara S, Tachibana M, Oshimura M, Lansdorp PM, Furuichi Y
Journal:Mol Cell Biol
PubMed ID:10805753
'Telomere dynamics, chromosomal instability, and cellular viability were studied in serial passages of mouse embryonic stem (ES) cells in which the telomerase RNA (mTER) gene was deleted. These cells lack detectable telomerase activity, and their growth rate was reduced after more than 300 divisions and almost zero after 450 cell ... More
Computer assisted cloning of human neutral alpha-glucosidase C (GANC): a new paralog in the glycosyl hydrolase gene family 31.
Authors: Hirschhorn R; Huie M L; Kasper J S;
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:12370436
The exponential expansion of the publicly available human DNA sequence database has increasingly facilitated cloning by homology of genes for biochemically defined, functionally similar proteins. We hypothesized that an as-yet uncloned human alpha-glucosidase (human neutral alpha-glucosidase C or GANC) is a previously uncharacterized member of a paralogous human glycosyl hydrolase ... More