pBAD202 定向 TOPO™ 表达试剂盒
Product Image
Invitrogen™

pBAD202 定向 TOPO™ 表达试剂盒

使用限制性内切酶将您的基因克隆到表达载体通常会迫使您破坏您的插入片段的最终序列（图 1A），特别是当在您的编码序列的基因附近没有有用的限制性位点时。这可能导致表达元件的次优间距或非天然氨基酸残基的掺入，这可能降低您的表达水平和/或导致非功能蛋白的产生。TOPO™ 克隆除了是一种更有效的克隆方法外，还消除了这些潜在的表达问题。TOPO™ 表达载体能够通过使用适当设计的引物进行 PCR了解更多信息
Have Questions?
货号数量
K42020120 reactions
货号 K420201
价格（CNY)
16,151.00
Each
添加至购物车
数量:
20 reactions
价格（CNY)
16,151.00
Each
添加至购物车
使用限制性内切酶将您的基因克隆到表达载体通常会迫使您破坏您的插入片段的最终序列（图 1A），特别是当在您的编码序列的基因附近没有有用的限制性位点时。这可能导致表达元件的次优间距或非天然氨基酸残基的掺入，这可能降低您的表达水平和/或导致非功能蛋白的产生。

TOPO™ 克隆除了是一种更有效的克隆方法外，还消除了这些潜在的表达问题。TOPO™ 表达载体能够通过使用适当设计的引物进行 PCR 插入您所需的精确 DNA 序列您的 PCR 产物仅需 5 分钟即可高效克隆到拓扑异构酶 I 活化表达载体中。得到的重组表达载体包含无任何非编码区的精确 DNA 序列（图 1B）。

许多 Invitrogen 强大表达载体可用于一步 TOPO™ 克隆和 PCR 产物的表达。此外，几种表达载体现在适用于定向 TOPO™ 克隆，使您能够使用校正聚合酶并以特定定向克隆 PCR 产物。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
耐抗生素细菌卡那霉素 (KanR)
细菌或酵母菌株LMG194, TOP10
切割EK（肠激酶）识别位点
构成或诱导系统诱导
表达机制基于细胞的表达
表达系统大肠杆菌
诱导剂阿拉伯糖
产品类型TOPO 表达试剂盒
数量20 reactions
选择试剂（真核生物）无
载体pBAD
克隆方法定向 TOPO™
产品线TOPO
促进剂araBAD
蛋白标记His 标签 (6x)、V5 抗原决定簇标签、硫氧还蛋白, V5 Epitope Tag, Thioredoxin
Unit SizeEach

常见问题解答 (FAQ)

应使用多少L-阿拉伯糖诱导表达？

L-阿拉伯糖的用量取决于您的表达实验，我们建议在初试表达试验中采用多种不同用量的L-阿拉伯糖，范围为0.00002%至0.2%。

我应使用你们提供的TOP10细胞还是LMG194大肠杆菌菌株用于pBAD系统的表达呢？

TOP10
优点：
- 省时，可直接从克隆到表达。
- 甘油储液更稳定，因为这些菌株的基因型是endA-和recA-。
缺点：
-该菌株不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。

LMG194
优点：
- 可在最低限培养基中生长良好，M9除外。
- 为了表达质粒必须转化到细胞中。
-含葡萄糖的RM培养基，保证了蛋白质的低基础表达水平。
缺点：
- 不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。
-甘油储液可能不稳定，因为这些菌株的基因型不是recA-或endA-。

你们建议选择哪种感受态细胞株用于pBAD表达系统的表达？

我们建议使用基因型为araBADC-和araEFGH+的感受态细胞株，这种细胞可转运L-阿拉伯糖，而不会将其代谢。这对于表达研究很重要，因为在细胞内的L-阿拉伯糖水平是恒定不变的，不会随时间降低。我们可提供我们的TOP10感受态细胞或LMG194大肠杆菌菌株。

你们能否提供可用于pBAD载体中对目的基因进行测序的引物序列？

pBAD载体含有正向和反向pBAD引物，位于目的基因上下游。这些序列如下：

pBAD正向引物：5’-ATGCCATAGCATTTTTATCC-3’
pBAD反向引物：5’-GATTTAATCTGTATCAGG-3’

你们是否有pBAD载体管盖颜色列表？

pBAD/His A 红色
pBAD/His B 橙色
pBAD/His C 黄色
pBAD/His LacZ 绿色
pBad/gIII A 黄色
pBad/gIII B 绿色
pBad/gIII C 蓝色
pBAD/gIII/calmodulin 紫色

View all pBAD202 定向 TOPO™ 表达试剂盒 FAQs