pBAD TOPO™ TA 表达试剂盒
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pBAD TOPO™ TA 表达试剂盒

pBAD TOPO™ TA 表达试剂盒专用于 Taq 扩增 PCR 产物的一步法克隆和调节原核表达。一旦 TOPO™了解更多信息
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货号蛋白标记数量
K430001His 标签 (6x)、V5 抗原决定簇标签, V5 Epitope Tag20 次反应
K430040V5 抗原决定簇标签40 次反应
货号 K430001
价格（CNY)
13,572.00
飞享价
Ends: 31-Dec-2026
15,873.00
共减 2,301.00 (14%)
Each
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蛋白标记:
His 标签 (6x)、V5 抗原决定簇标签, V5 Epitope Tag
数量:
20 次反应
价格（CNY)
13,572.00
飞享价
Ends: 31-Dec-2026
15,873.00
共减 2,301.00 (14%)
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pBAD TOPO™ TA 表达试剂盒专用于 Taq 扩增 PCR 产物的一步法克隆和调节原核表达。一旦 TOPO™ 克隆了您的 PCR 产物，您就可以直接进行蛋白表达。pBAD-TOPO™ 载体的一些便利特点包括：

•线性化、拓扑异构酶 I 活化载体，用于对 Taq 扩增 PCR 产物进行 5 分钟克隆
• araBAD 启动子，用于严格调控大肠杆菌 V5 抗原决定簇标签中的表达，以采用抗 V5 抗体进行检测
• C 端聚组氨酸 (6xHis) 标记，用于使用镍螯合树脂进行纯化，并采用抗 His（C 端）抗体进行检测
• 肠激酶切割位点，用于去除 N 端前导肽
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
耐抗生素细菌氨苄青霉素 (AmpR)
细菌或酵母菌株LMG194, TOP10
切割EK（肠激酶）识别位点
构成或诱导系统诱导
表达机制基于细胞的表达
表达系统大肠杆菌
诱导剂阿拉伯糖
产品类型TA 表达试剂盒
数量20 次反应
选择试剂（真核生物）无
载体pBAD
克隆方法TOPO™-TA
产品线TOPO
促进剂araBAD
蛋白标记His 标签 (6x)、V5 抗原决定簇标签, V5 Epitope Tag
Unit SizeEach
内容与储存
每个 pBAD TOPO™ TA 表达试剂盒含有两个盒以及 LMG194 大肠杆菌穿刺培养物。pBAD TOPO™ TA 盒含有 PCR 所需的所有试剂（Taq 聚合酶除外），包括 200 ng 拓扑异构酶 I 活化的 pBAD-TOPO™ 载体、无菌水、dNTP、10X PCR 缓冲液、盐溶液、对照模板和引物、20% L-阿拉伯糖、用于测序或 PCR 筛选的 pBAD 引物以及表达对照质粒。在 -20°C 下储存。One Shot™ 盒含有转化所需的所有试剂，包括单次使用的 50 µL One Shot™ TOP10 化学感受态大肠杆菌、S.O.C. 培养基以及超螺旋对照质粒等份试液。One Shot™ 细胞在 -80°C 下储存。LMG194 大肠杆菌穿刺培养物在 2 - 8°C 下储存。妥善储存时，所有试剂均可保证稳定储存 6 个月。

常见问题解答 (FAQ)

我可将感受态细胞存储在液氮中吗？

我们不建议将感受态细胞保存在液氮中，因为极端温度会损害细胞。另外，装感受态细胞的塑料管子可能承受不了如此低的温度，从而发生破裂。

我应该如何存储我的感受态E. Coli？

我们推荐将感受态细胞存储在-80摄氏度。高于这个温度，即使存储时间很短，也会显著降低其转化效率。

应使用多少L-阿拉伯糖诱导表达？

L-阿拉伯糖的用量取决于您的表达实验，我们建议在初试表达试验中采用多种不同用量的L-阿拉伯糖，范围为0.00002%至0.2%。

我应使用你们提供的TOP10细胞还是LMG194大肠杆菌菌株用于pBAD系统的表达呢？

TOP10
优点：
- 省时，可直接从克隆到表达。
- 甘油储液更稳定，因为这些菌株的基因型是endA-和recA-。
缺点：
-该菌株不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。

LMG194
优点：
- 可在最低限培养基中生长良好，M9除外。
- 为了表达质粒必须转化到细胞中。
-含葡萄糖的RM培养基，保证了蛋白质的低基础表达水平。
缺点：
- 不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。
-甘油储液可能不稳定，因为这些菌株的基因型不是recA-或endA-。

你们建议选择哪种感受态细胞株用于pBAD表达系统的表达？

我们建议使用基因型为araBADC-和araEFGH+的感受态细胞株，这种细胞可转运L-阿拉伯糖，而不会将其代谢。这对于表达研究很重要，因为在细胞内的L-阿拉伯糖水平是恒定不变的，不会随时间降低。我们可提供我们的TOP10感受态细胞或LMG194大肠杆菌菌株。

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引用和文献 (13)

引用和文献
Abstract
LuxS is required for persistent pneumococcal carriage and expression of virulence and biosynthesis genes.
Authors:Joyce EA, Kawale A, Censini S, Kim CC, Covacci A, Falkow S,
Journal:Infect Immun
PubMed ID:15102809
'Streptococcus pneumoniae causes several diseases, including otitis media, pneumonia, and meningitis. Although little is known about the regulation of or how individual pneumococcal factors contribute to these disease states, there is evidence suggesting that some factors are regulated by a cell-density-dependent mechanism (quorum sensing). Quorum sensing allows bacteria to couple ... More
Identification of a novel maturation mechanism and restricted substrate specificity for the SspB cysteine protease of Staphylococcus aureus.
Authors:Massimi I, Park E, Rice K, Muller-Esterl W, Sauder D, McGavin MJ,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12207024
'The SspB cysteine protease of Staphylococcus aureus is expressed in an operon, flanked by the sspA serine protease, and sspC, encoding a 12.9-kDa protein of unknown function. SspB was expressed as a 40-kDa prepropeptide pSspB, which did not undergo autocatalytic maturation. Activity of pSspB was reduced compared with 22-kDa mature ... More
A dual-specificity aminoacyl-tRNA synthetase in the deep-rooted eukaryote giardia lamblia.
Authors:Bunjun S, Stathopoulos C, Graham D, Min B, Kitabatake M, Wang AL, Wang CC, Vivares CP, Weiss LM, Soll D
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:11078517
'Cysteinyl-tRNA (Cys-tRNA) is essential for protein synthesis. In most organisms the enzyme responsible for the formation of Cys-tRNA is cysteinyl-tRNA synthetase (CysRS). The only known exceptions are the euryarchaea Methanococcus jannaschii and Methanobacterium thermoautotrophicum, which do not encode a CysRS. Deviating from the accepted concept of one aminoacyl-tRNA synthetase per ... More
RNA stem-loop enhanced expression of previously non-expressible genes.
Authors:Paulus M, Haslbeck M, Watzele M,
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:15163763
The key step in bacterial translation is formation of the pre-initiation complex. This requires initial contacts between mRNA, fMet-tRNA and the 30S subunit of the ribosome, steps that limit the initiation of translation. Here we report a method for improving translational initiation, which allows expression of several previously non-expressible genes. ... More
Shielding of the A1 Domain by the D'D3 Domains of von Willebrand Factor Modulates Its Interaction with Platelet Glycoprotein Ib-IX-V.
Authors:Ulrichts H, Udvardy M, Lenting PJ, Pareyn I, Vandeputte N, Vanhoorelbeke K, Deckmyn H,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16373331
Soluble von Willebrand factor (VWF) has a low affinity for platelet glycoprotein (GP) Ibalpha and needs immobilization and/or high shear stress to enable binding of its A1 domain to the receptor. The previously described anti-VWF monoclonal antibody 1C1E7 enhances VWF/GPIbalpha binding and recognizes an epitope in the amino acids 764-1035 ... More
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