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Invitrogen™

pLenti6.3/V5™-TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒

Invitrogen™ pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ 克隆试剂盒是我们 ViraPower™ HiPerform™ 慢病毒表达系统(目录号 K5310-00)的一部分。pLenti6.3⁄V5™-TOPO™了解更多信息
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货号数量
K531520
又称 K5315-20
1 kit
货号 K531520
又称 K5315-20
价格(CNY)
42,232.00
飞享价
Ends: 31-Dec-2026
49,391.00
共减 7,159.00 (14%)
Each
数量:
1 kit
价格(CNY)
42,232.00
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49,391.00
共减 7,159.00 (14%)
Each
Invitrogen™ pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ 克隆试剂盒是我们 ViraPower™ HiPerform™ 慢病毒表达系统(目录号 K5310-00)的一部分。

pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ -TA Cloning 试剂盒含有经 TOPO™ 调整的 ViraPower™ HiPerform™ 慢病毒表达载体 pLenti6.3⁄V5™-TOPO™,用于在分裂和非分裂哺乳动物细胞中靶基因的基于快速 PCR 的克隆和高水平表达。pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ 载体配备两个关键遗传元件,使其成为 HiPerform™ 载体:来自 HIV-1 整合酶基因的土拨鼠转录后调控元件 (WPRE) 和中心多嘌呤管道 (cPPT) 序列,用于产生至少 4 倍蛋白表达增加(相较于缺乏这些元件的载体)。

优势
• 稳定表达
• 长期实验
• 功能性病毒的准确滴度
• 5 分钟高效 TOPO™ PCR 克隆,仅需简单三步

主要特点
• HiPerform™ WPRE 和 cPPT 元件
• CMV 启动子
• V5 抗原决定簇标签(C 末端)
• 杀稻瘟菌素选择

试剂盒包括
• lacZ 载体作为阳性对照,pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™
• Stbl3™ 感受态细胞

仅供研究使用。不得用于治疗或诊断用途。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细胞类型感受态细胞
克隆方法TOPO-TA
构成或诱导系统组成型
输送类型慢病毒
表达系统ViraPower™ HiPerform™ 慢病毒表达系统
适用于(应用)蛋白表达
关键功能病毒表达
产品线HiPerform、TOPO、ViraPower
产品类型克隆试剂盒
促进剂CMV
蛋白标记V5 抗原决定簇标签
数量1 kit
选择试剂(真核生物)杀稻瘟菌素
选择标记物促进剂SV40 启动子
载体pLenti、TOPO-TA 载体
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
TOPO™ TA Cloning 试剂(盒 1)
pLenti6.3?V5™-TOPO™ (5-10 ng⁄µL):20 µL,-20°C
pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™ 对照载体 (0.5 µg⁄µL):20 µL,-20°C
10X PCR 缓冲液:100 µL,-20°C
dNTP 混合物:10 µL,-20°C
盐溶液:50 µL,-20°C
CMV 正向引物 (100 ng⁄µL):20 µL,-20°C
V5(C 末端)反向引物 (100 ng⁄µL):20 µL,-20°C
对照 PCR 模板 (50 ng⁄µL):10 µL,-20°C
对照 PCR 引物 (100 ng⁄µL):10 µL,各 -20°C
无菌水:1 mL

One Shot™ Stbl3™ 化学感受态大肠杆菌(盒 2)
Stbl3™ 细胞:21 x 50 µL,-80°C
pUC19 对照 DNA (10 pg⁄µL):50 µL,-80°C
S.O.C.培养基:6 mL,-80°C

常见问题解答 (FAQ)

我可将感受态细胞存储在液氮中吗?

我们不建议将感受态细胞保存在液氮中,因为极端温度会损害细胞。另外,装感受态细胞的塑料管子可能承受不了如此低的温度,从而发生破裂。

我应该如何存储我的感受态E. Coli?

我们推荐将感受态细胞存储在-80摄氏度。高于这个温度,即使存储时间很短,也会显著降低其转化效率。

对TOPO TA克隆来说最佳的插入片段:载体比例是多少?是否有公式来计算用量?

我们建议起始摩尔比为1:1(插入片段:载体),范围为0.5:1到2:1(插入片段:载体)。对TOPO克隆来说,2kb大小的 PCR产物的ng值应在5- 10ng之间。

计算公式:< br / > 插入片段长度(bp)/ 载体长度(bp)x 载体用量(ng)= 插入片段:载体比为1:1时所需的插入片段的用量(ng)。

插入片段:载体的最佳比例是多少?是否有公式可以进行计算?

您可能需要尝试不同的插入片段:载体比例,范围从1:1至15:1。

公式:
length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio (插入片段长度 (bp) X 载体重量(ng) ) / 载体长度 (bp) = 插入片段:载体比例为1:1时所需的插入片段重量(ng)

Platinum Taq DNA高保真聚合酶混合物是否会在PCR产物中留下3′ A尾,从而可用于之后的TOPO TA 或普通TA 载体克隆?

是的,该酶混合物会使一部分PCR产物留下3′端 A尾。然而相对于单独采用Taq聚合酶,克隆效率会大幅度下降。建议在PCR产物添加3′端 A尾后再进行TA克隆。