Expressway™Lumio™ 表达和检测系统,不含载体
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Invitrogen™

Expressway™Lumio™ 表达和检测系统,不含载体

Expressway™ Lumio™ 表达和检测系统利用 Lumio™ 识别序列,即小型六氨基酸序列 (Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys)。Lumio™ 检测试剂结合了具有高特异性和亲和力的识别序列,可产生明亮的荧光信号,用于实时蛋白生成分析和即时胶内蛋白检测。此外,Expressway 的来源于了解更多信息
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货号 K990060
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Expressway™ Lumio™ 表达和检测系统利用 Lumio™ 识别序列,即小型六氨基酸序列 (Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys)。Lumio™ 检测试剂结合了具有高特异性和亲和力的识别序列,可产生明亮的荧光信号,用于实时蛋白生成分析和即时胶内蛋白检测。此外,Expressway 的来源于 slyD 突变体的专用大肠杆菌裂解物消除了 Lumio™ Green 检测试剂与内源性 SlyD 蛋白的非特异性结合,并为重组蛋白检测提供了极佳背景(图 1)。在系统中包括了 Lumio™ Green 检测试剂盒,用于实时检测蛋白合成以及简单胶内蛋白检测。Lumio™ 载体(图 2 和图 3)还具有:

用于与任何旁侧带有 attL 的 Gateway™ 入门载体高效重组的 attR 位点
用于纯化后高效去除 Lumio™ 序列的带 TEV 切割位点的 N 端 Lumio™ 标签(pEXP3-DEST 载体)
用于轻松、即时胶内检测的 C 端 Lumio™ 标签(pEXP4-DEST 载体)
T7 启动子、核糖体 结合位点与 T7 终止子有用于无细胞蛋白表达的极佳间隔
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
检测定位凝胶内检测
所表达蛋白质类型水溶性蛋白质
表达机制无细胞表达
表达系统无细胞
产品类型Lumio 表达和检测系统
数量1 kit
产品线Expressway, Lumio
Unit SizeEach
内容与储存
Expressway™ Lumio™ 表达和检测系统包括大肠杆菌 slyD- 提取物、2.5X IVPS 大肠杆菌反应缓冲液、T7 酶混合物、饲养缓冲液、19 氨基酸混合物、蛋氨酸、对照质粒、无 DNAse/RNAse 水以及一个 Lumio™ Green 检测试剂盒,用于 20 次实时反应或 100 次胶内应用。除了这些组成部分外,N 端 Expressway™ Lumio™ 试剂盒还包括 6 µg pEXP3-DEST 载体,C 端 Expressway™ Lumio™ 试剂盒包括 6 µg pEXP4-DEST 载体。在 -20°C 下储存载体和检测试剂。将所有其他组分储存在 -80°C 下。妥善储存时,可保证稳定储存 6 个月。

常见问题解答 (FAQ)

我不小心将我的大肠杆菌slyD-Extract,大肠杆菌反应缓冲液(E. coli Reaction Buffer)(-A.A.)和补料缓冲液(feed buffer)保存在室温下。我还能继续使用它么?

很抱歉,这样的操作会导致产品失活。

我的T7 RNA聚合酶已用完。你们建议在后续使用什么产品?

我们推荐您使用T7 RNA聚合酶(货号18033019,50 U/µL)。请在50 µL反应系统中使用1–1.5 µL本产品。

我的凝胶中的样品出现弥散的情况。这可能是由什么原因所导致的?

样品弥散情况可能由以下原因所导致:

•未使用丙酮来沉淀样本——使用丙酮来沉淀蛋白将帮助去除背景弥散情况。
•蛋白上样量过多——减少蛋白样品的用量。
•凝胶自身不够干净——在胶片曝光之前对凝胶进行简单的润洗。
•蛋白合成反应中包含乙醇——请确保在DNA纯化过程中去除了残留的乙醇。
•检查预制胶的保质期——请勿使用过期的凝胶产品。

使用Expressway系统反应后,在跑胶时我观察到小分子量产物形成了一条梯带。怎么会发生此种情况?

这种现象可能由多种原因所导致。最常见的原因包括:蛋白酶解,DNA和/或RNA模板的降解(截短型的模板将生成截短的蛋白产物),内部启始(如果基因内部含有多个甲硫氨酸和RBS类似序列,核糖体就有可能在错误的甲硫氨酸位点启始翻译过程),提前终止,翻译暂停,过于频繁地应用罕见密码子,复杂的二级RNA结构,等等。蛋白变性时间过长,或1X SDS-PAGE样品缓冲液中加入的SDS不足,也可能会发生这种现象。

我获得的蛋白得率不错,但其生物活性很低。我该如何处理?

•您的蛋白可能未正确折叠——请尝试在蛋白合成过程中将孵育温度降低至25°C。
•您可能需要对蛋白进行翻译后修饰———Expressway系统不会为重组蛋白进行翻译后修饰。
•您所合成的蛋白可能需要辅助因子才能发挥全部活力——因此请尝试在合成反应中加入所需的辅助因子。