Expressway™ Mini 无细胞表达系统
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Invitrogen™

Expressway™ Mini 无细胞表达系统

Expressway™ Mini 无细胞表达系统利用高效偶联转录和转译反应来生产活性重组蛋白。该系统省去基于细胞的蛋白生产过程中的耗时步骤,包括转化、细胞培养和表达优化。在短短两小时内即可生产出适用于一系列下游应用和功能研究的蛋白。Expressway™ Mini 无细胞表达系统为实验设计提供灵活性,让您可以• 从圆形质粒和线性模板了解更多信息
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Expressway™ Mini 无细胞表达系统利用高效偶联转录和转译反应来生产活性重组蛋白。该系统省去基于细胞的蛋白生产过程中的耗时步骤,包括转化、细胞培养和表达优化。在短短两小时内即可生产出适用于一系列下游应用和功能研究的蛋白。Expressway™ Mini 无细胞表达系统为实验设计提供灵活性,让您可以
• 从圆形质粒和线性模板(例如,PCR 产物)合成蛋白
• 进行蛋白的高通量合成
• 表达对体内系统有毒性的基因

工作原理:
Expressway™ Mini 无细胞表达系统可提供实现较优无细胞蛋白生产所需的所有组分。该试剂盒包括一种大肠杆菌提取物,内含驱动转录和转译所需的细胞机器。试剂盒中还包含了 IVPS(体外蛋白合成)反应缓冲液和氨基酸模块,以提供所需氨基酸和 ATP 再生系统。只需将反应缓冲液、氨基酸混合物、蛋氨酸(标记或未标记)、T7 酶混合物以及您的 DNA 模板(含 T7 启动子)与大肠杆菌提取物混合。当 DNA 模板转录时,mRNA 的 5’ 末端被核糖体结合,并且在模板的 3’ 末端仍在转录时进行转译(图 1)。


轻松生产功能性蛋白:

Expressway™ Mini 无细胞表达系统已经过优化,可从大肠杆菌细胞裂解物中生产出高产量的全长功能性蛋白(图 2)。该系统提供专有的饲养缓冲液配方以增加蛋白产量。


内容物和储存:
Expressway™ Mini 无细胞表达系统可用于进行二十次 50-μl 反应或一次 1-ml 反应。该系统包括 IVPS 大肠杆菌提取物、IVPS 反应缓冲液、饲养缓冲液、19 氨基酸混合物、蛋氨酸、无 DNase/RNase 水、RNase A、T7 酶混合物、2-ml 反应管和阳性表达对照载体。建议用于 Expressway™ Mini 无细胞表达系统的载体如下所示。将载体储存于 -20°C 条件下。将其他试剂盒组分储存于 -80°C 条件下。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
所表达蛋白质类型水溶性蛋白质
表达机制无细胞表达
表达系统无细胞
产品类型无细胞表达系统
数量1 Kit
产品线Expressway
促进剂T7
Unit SizeEach

常见问题解答 (FAQ)

我不小心将我的大肠杆菌slyD-Extract,大肠杆菌反应缓冲液(E. coli Reaction Buffer)(-A.A.)和补料缓冲液(feed buffer)保存在室温下。我还能继续使用它么?

很抱歉,这样的操作会导致产品失活。

我的T7 RNA聚合酶已用完。你们建议在后续使用什么产品?

我们推荐您使用T7 RNA聚合酶(货号18033019,50 U/µL)。请在50 µL反应系统中使用1–1.5 µL本产品。

我的凝胶中的样品出现弥散的情况。这可能是由什么原因所导致的?

样品弥散情况可能由以下原因所导致:

•未使用丙酮来沉淀样本——使用丙酮来沉淀蛋白将帮助去除背景弥散情况。
•蛋白上样量过多——减少蛋白样品的用量。
•凝胶自身不够干净——在胶片曝光之前对凝胶进行简单的润洗。
•蛋白合成反应中包含乙醇——请确保在DNA纯化过程中去除了残留的乙醇。
•检查预制胶的保质期——请勿使用过期的凝胶产品。

使用Expressway系统反应后,在跑胶时我观察到小分子量产物形成了一条梯带。怎么会发生此种情况?

这种现象可能由多种原因所导致。最常见的原因包括:蛋白酶解,DNA和/或RNA模板的降解(截短型的模板将生成截短的蛋白产物),内部启始(如果基因内部含有多个甲硫氨酸和RBS类似序列,核糖体就有可能在错误的甲硫氨酸位点启始翻译过程),提前终止,翻译暂停,过于频繁地应用罕见密码子,复杂的二级RNA结构,等等。蛋白变性时间过长,或1X SDS-PAGE样品缓冲液中加入的SDS不足,也可能会发生这种现象。

我获得的蛋白得率不错,但其生物活性很低。我该如何处理?

•您的蛋白可能未正确折叠——请尝试在蛋白合成过程中将孵育温度降低至25°C。
•您可能需要对蛋白进行翻译后修饰———Expressway系统不会为重组蛋白进行翻译后修饰。
•您所合成的蛋白可能需要辅助因子才能发挥全部活力——因此请尝试在合成反应中加入所需的辅助因子。

引用和文献 (2)

引用和文献
Abstract
Fox-2 splicing factor binds to a conserved intron motif to promote inclusion of protein 4.1R alternative exon 16.
Authors:Ponthier JL, Schluepen C, Chen W, Lersch RA, Gee SL, Hou VC, Lo AJ, Short SA, Chasis JA, Winkelmann JC, Conboy JG,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16537540
'Activation of protein 4.1R exon 16 (E16) inclusion during erythropoiesis represents a physiologically important splicing switch that increases 4.1R affinity for spectrin and actin. Previous studies showed that negative regulation of E16 splicing is mediated by the binding of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein (hnRNP) A/B proteins to silencer elements in the ... More
P-Rex1 links mammalian target of rapamycin signaling to Rac activation and cell migration.
Authors:Hernández-Negrete I, Carretero-Ortega J, Rosenfeldt H, Hernández-García R, Calderón-Salinas JV, Reyes-Cruz G, Gutkind JS, Vázquez-Prado J,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17565979
'Polarized cell migration results from the transduction of extra-cellular cues promoting the activation of Rho GTPases with the intervention of multidomain proteins, including guanine exchange factors. P-Rex1 and P-Rex2 are Rac GEFs connecting Gbetagamma and phosphatidylinositol 3-kinase signaling to Rac activation. Their complex architecture suggests their regulation by protein-protein interactions. ... More