LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色试剂盒,用于 405 nm 激发
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LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色试剂盒,用于 405 nm 激发
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LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色试剂盒,用于 405 nm 激发

LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色试剂盒可用于在细胞内抗体染色中的固定和透化步骤前,或在用甲醛固定去除生物危害物质前,确定细胞的活力。该试剂盒经过优化和验证,可与紫色激光流式细胞仪配合使用。•稳定 — 染料在单独小瓶中冷冻干燥,以维持稳定性• 稳健 — 染色模式在固定前后相同• 低补偿了解更多信息
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LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色试剂盒可用于在细胞内抗体染色中的固定和透化步骤前,或在用甲醛固定去除生物危害物质前,确定细胞的活力。该试剂盒经过优化和验证,可与紫色激光流式细胞仪配合使用。

•稳定 — 染料在单独小瓶中冷冻干燥,以维持稳定性

• 稳健 — 染色模式在固定前后相同

• 低补偿 — 与其他荧光基团的光谱重叠极小

查看用于流式细胞分析的所有可固定活力染料的选择指南

稳定
与以溶液形式销售的产品不同,LIVE/DEAD™ 可固定紫色染色剂采用40个供试瓶的便利包装,可确保染料长时间保持稳定性和性能。溶液中的胺反应性染料在短时间内会失去其有效性,因此建议在再水化后将样品瓶全部用完。如果无法做到这一点,将样品瓶内容物等分为小体积,并在 -80°C 下储存,避免冻融循环。

稳健
死细胞鉴别染色剂可在固定剂(如细胞内磷酸化研究所需的甲醛或基于乙醇的固定方法)处理后失去敏感性。LIVE/DEAD™ 可固定紫色染色剂是一种胺反应性染料,可与细胞内和细胞外的胺共价结合,且染色图案在甲醛固定后依然可保留。

低补偿
LIVE/DEAD™ 可固定紫色染色剂因其荧光特性而被选中,以尽可能减少其他紫色染料与激发 488 nm 蓝色激光的染料之间的补偿。紫色荧光活性染料的最大激发波长为 ∼416 nm,使用 405 nm 紫色激光时可良好激发,并且其最大发射波长为 ∼451 nm,因此可在大多数紫色激光流式细胞仪的第一个通道中采集。

工作原理
对于细胞膜受损的细胞,染料可与细胞内部及细胞表面的游离胺相互作用而实现强烈的荧光染色。在活细胞中,染料的反应活性仅限于细胞表面的胺,从而导致更少的荧光强度。活细胞与死细胞之间的强度差异通常大于 50 倍,可轻松分辨。

提供多种颜色
LIVE/DEAD™ 可固定死细胞染色剂有多种颜色可供选择,以满足您的多色检测组合需求。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细胞渗透性不透过
细胞类型真核细胞
描述LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色剂试剂盒,用于 405 nm 激发
检测方法荧光
染料类型LIVE/DEAD™ 可固定紫色死细胞染色剂
形式实心
产品规格
数量200 次检测
运输条件室温
溶解度DMSO(二甲亚砜)
颜色紫激光
发射451 nm
Excitation Wavelength Range416 nm
适用于(应用)活力测定试剂盒
适用于(设备)流式细胞仪
产品线LIVE/DEAD
产品类型染色剂
Unit SizeEach
内容与储存
包含5小瓶 LIVE/DEAD™ 可固定死细胞染色剂以及 500 μL DMSO。

在 -20°C 下储存。

常见问题解答 (FAQ)

我如何为LIVE/DEAD细胞活力实验准备死细胞对照?

有两种简单的方法。一种是通过60°C放置20分钟热灭活细胞。第二种是将细胞放入70%乙醇。乙醇固定的细胞可以在冰箱中无限期储存直到使用,可达好几年。

1.离心细胞、使细胞沉淀并去除上清
2.固定细胞:在15mL含有细胞团的试管中加入10 mL70%冰乙醇,先开始逐滴加入后震荡,混合均匀。
3.在冰箱中储存直到使用。
4.快使用时,水洗两次且在选择的缓冲液中重悬。

哪一种细胞活力试剂盒兼容固定?

•用于流式细胞仪分析的LIVE/DEAD可固定试剂盒适用于固定。这些试剂盒使用胺基反应细胞-非渗透染料对活细胞细胞表面和死细胞胞质染色——活细胞暗淡死细胞明亮。因为染料共价结合到细胞,固定后保留。不幸的是,此方法对基于成像的实验效果不好,由于所有细胞都被染色,很难通过显微镜从暗淡的活细胞中分辨出明亮的死细胞。

•Image-IT DEAD绿色活性染料(货号I10291),用于成像和高通量扫描(HCS)分析的,是一种活细胞非透过型DNA结合染料,固定且透过后可保留长达48小时。

•我们同时推出用于成像分析的LIVE/DEAD Reduced Biohazard Cell Viability试剂盒(货号L7013),其含有两种DNA结合染料,SYTO 10和Dead Red,可以有效染色且通过4%戊二醛固定后快速分析。

注:总的来说,DNA结合的染料和钙黄绿素AM不适用于固定,由于这些染料不能共价地结合到细胞组分上,因此会在固定后缓慢扩散出细胞,逐渐地将所有细胞都染色。

为什么我要在实验中纳入活性染色?

许多抗体和染色剂会标记死细胞。如果您不把死细胞从分析中排除,相关数据将受到干扰。当然,如果你标记的是固定细胞,由于其本身已经死亡,就不再需要添加活性染色剂。但是,如果你们在固定前标记细胞,就需要使用LIVE/DEAD 固定死细胞染色剂。

我能用Attune NxT声波聚焦流式细胞仪检测的大小下限是多少?

Attune NxT声波聚焦流式细胞仪检测的下限是0.5 µm。

Attune NxT自动进样器有何作用?

Attune NxT自动进样器是Attune NxT声波聚焦流式细胞仪的可选附件,能够快速分析至多384份样品。对于不同形式平板——无论96孔还是384孔板——它都具有广泛的兼容性。内置智能探针,最大限度避免堵塞和截留(<0.5%),防止损坏仪器。该仪器通过通气而不是振荡混合,确保样品的均质性,同时维持细胞的活性。它还可作为Attune NxT流式细胞仪关机程序的一个步骤来执行自动清洗。无论采用何种取样方法(试管或平板)和数据采集速率,它都能提供一致的数据。

引用和文献 (12)

引用和文献
Abstract
Techniques to improve the direct ex vivo detection of low frequency antigen-specific CD8+ T cells with peptide-major histocompatibility complex class I tetramers.
Authors:Chattopadhyay PK, Melenhorst JJ, Ladell K, Gostick E, Scheinberg P, Barrett AJ, Wooldridge L, Roederer M, Sewell AK, Price DA,
Journal:Cytometry A
PubMed ID:18836993
'The ability to quantify and characterize antigen-specific CD8+ T cells irrespective of functional readouts using fluorochrome-conjugated peptide-major histocompatibility complex class I (pMHCI) tetramers in conjunction with flow cytometry has transformed our understanding of cellular immune responses over the past decade. In the case of prevalent CD8+ T cell populations that ... More
Cell type specific applicability of 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) for dynamic proliferation assessment in flow cytometry.
Authors:Diermeier-Daucher S, Clarke ST, Hill D, Vollmann-Zwerenz A, Bradford JA, Brockhoff G,
Journal:Cytometry A
PubMed ID:19235202
'Using the nucleoside analogue EdU (5-ethynyl-2''-deoxyuridine) for thymidine substitution instead of BrdU (5-bromo-2''-deoxyuridine) in cell proliferation assays has recently been proposed. However, the effect of EdU on cell viability, DNA synthesis, and cell cycle progression and consequently its usability for dynamic cell proliferation analysis in vitro has not been explored. ... More
Immune attributes of cardiac-derived adherent proliferating (CAP) cells in cardiac therapy.
Authors:Haag M, Stolk M, Ringe J, Linthout SV, Tschöpe C, Sittinger M, Seifert M
Journal:J Tissue Eng Regen Med
PubMed ID:22389069
'Cardiac-directed cell therapies show potential to reduce mortality and morbidity in heart disease. However, high functional efficacy should be complimented with low immunogenicity, in particular if allogeneic cell sources are applied. Therefore, we aimed to examine cardiac-derived adherent proliferating (CAP) cells with respect to their immunogenicity and immune modulatory features ... More
Regulatory B cell (B10 Cell) expansion during Listeria infection governs innate and cellular immune responses in mice.
Authors:Horikawa M, Weimer ET, DiLillo DJ, Venturi GM, Spolski R, Leonard WJ, Heise MT, Tedder TF
Journal:J Immunol
PubMed ID:23275601
'Pathogens use numerous methods to subvert host immune responses, including the modulation of host IL-10 production by diverse cell types. However, the B cell sources of IL-10 and their overall influence on innate and cellular immune responses have not been well characterized during infections. Using Listeria as a model pathogen, ... More
Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry.
Authors:Perfetto SP, Chattopadhyay PK, Lamoreaux L, Nguyen R, Ambrozak D, Koup RA, Roederer M,
Journal:J Immunol Methods
PubMed ID:16756987
'Membrane-damaged cells caused by either mechanical trauma or through normal biological processes can produce artifacts in immunophenotyping analysis by flow cytometry. Dead cells can nonspecifically bind monoclonal antibody conjugates, potentially leading to erroneous conclusions, particularly when cell frequencies are low. To date, DNA intercalating dyes (Ethidium monoazaide (EMA), Propidium Iodide, ... More