Lumio™ Green 检测试剂盒
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Invitrogen™

Lumio™ Green 检测试剂盒

The Lumio™ Green Detection Kit is a sensitive and highly specific kit for labeling Lumio™ fusion proteins prior to electrophoresis.了解更多信息
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LC60901 kit
货号 LC6090
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The Lumio™ Green Detection Kit is a sensitive and highly specific kit for labeling Lumio™ fusion proteins prior to electrophoresis. The Lumio™ Green Kit enables immediate visualization of Lumio™ fusion protein bands directly in a polyacrylamide gel. Using the Lumio™ Green Detection Kit you'll:

• Label proteins fused to a Lumio™ sequence
• Visualize results immediately after electrophoresis—eliminate gel staining and western blotting
• Detect nanogram levels of protein with a UV transilluminator, equipped with a standard camera (Figure 1), or a laser-based scanner
The Lumio™ Green Detection Reagent, included in the Lumio™ Green Detection Kit, can also be used for real-time detection of protein synthesis during in vitro transcription-translation reactions.

Immediate and Effortless Detection
To detect using the Lumio™ Green Detection Kit simply:
1. Add the Lumio™ Green Detection Reagent and the optimized Lumio™ Sample Buffer to your protein sample and heat for 10 minutes at 70°C.
2. Add the Lumio™ In-Gel Detection Enhancer to your sample mix and incubate for 5 minutes at room temperature.
3. Load and electrophorese your protein gel.
4. Visualize your Lumio™ fusion protein bands with a UV transilluminator, equipped with a standard camera, or laser-based scanner.
5. After documenting your Lumio™ Green signal, total protein staining can be performed.
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
检测定位凝胶内检测
检测方法荧光
产品线Lumio™
产品类型预制凝胶融合蛋白标记试剂盒
数量1 kit
有效期每 6 个月
运输条件干冰
靶标分子蛋白质(带有 Lumio™ 标记)、蛋白质(带有 TC 标记)
标签或染料Lumio Green
Unit SizeEach
内容与储存
Lumio™ 绿色检测试剂盒包含一瓶 Lumio™ 绿色检测试剂、五瓶 Lumio™ 凝胶样品缓冲液,以及一瓶 Lumio™ 胶内检测增强剂。储存于 -20°C 下。如果适当储存,所有组分可保持稳定 6 个月。

常见问题解答 (FAQ)

Lumio试剂具有透膜能力么?

Lumio试剂具有疏水性,因此很容易穿过细胞膜。无需通过透化处理来帮助该试剂进入细胞内部。 

在使用Lumio标记哺乳动物细胞的过程中,BSA会有背景干扰吗?

哺乳动物细胞培养基中的血清蛋白(如BSA,66KD)可能会与Lumio试剂发生交叉反应,从而形成非特异性的条带。吸去细胞培养基并在收获细胞后使用PBS润洗哺乳动物细胞3-4遍,有助于减少BSA的非特异性结合。 

Lumio Red(红)与Green(绿)试剂对细胞有毒性吗?

我们尚未在细胞中发现用于蛋白检测浓度的Lumio试剂具有任何不良效应。我们也未在使用Lumio Green之后发现细胞形态出现任何不良改变。加入Lumio Red后,我们确实发现细胞发生了某些微小的形态改变,不过这一变化在加入试剂24小时之后恢复。 

Lumio染色与GeneBLAzer检测相比效果如何?GFP作为目的基因的检测手段效果如何?

Lumio染色技术的优势在于可同时兼容体内和体外的蛋白标记操作。在体内标记实验中,向细胞中加入Lumio试剂后即可在荧光显微镜下观察到细胞/蛋白。这一效果与GeneBLAzer检测步骤相似,只是GeneBLAzer是基于扩增报告基因信号的酶促反应。GFP的荧光信号只能在细胞(体内)中检测到,因为需要GFP蛋白的正确折叠。相比GeneBLAzer检测法中的bla蛋白(264个氨基酸,29 kDa)和GFP蛋白(27 kDa)而言,Lumio标签非常之小(6个氨基酸,585Da),因此在很大程度上不会对所融合蛋白的功能造成影响。GFP的劣势在于需要融合一个很大的标签蛋白,而且该检测法并非是基于酶法的报告系统。不同于GeneBLAzer检测法和GFP标签,Lumio-标签蛋白可在Lumio试剂处理细胞裂解液或蛋白之后通过凝胶电泳变得可视化。与Lumio和GFP相比,GeneBLAzer检测法在活体细胞的应用中更为灵敏。GeneBLAzer检测法也不同于Lumio和GFP,这一方法能够实现比率化的读数,因此有助于减少样本间的差异。

我在使用Lumio绿色检测试剂盒时,得到了较高的、不均匀的背景。你们有何建议?

以下是可能原因和解决方案:

•凝胶处理不恰当或成像平台不干净。处理凝胶或凝胶成像时,不要用手直接接触凝胶。为将所有背景荧光降至最低,每次进行凝胶成像前都应使用纸巾清洁成像系统。
•蛋白上样量过多。降低蛋白浓度或减少上样体积。
•非特异性结合。为将非特异性结合降至最低,应使用Lumio胶内检测增强剂。大肠杆菌裂解物中的某些蛋白(SlyD,21 kDa)和哺乳细胞培养基中的牛血清白蛋白(BSA,66 kDa),会与Lumio绿色试剂发生交叉反应,产生非特异性结合。移除细胞培养基,收获细胞后使用PBS洗涤哺乳细胞3-4次,从而使BSA的非特异性结合降至最低。