pTrcHis2 A、B & C 细菌表达载体

TOP10、DH5α、其他克隆菌株
优点：
- 省时，可直接从克隆到表达。
-甘油储液更稳定，因为这些菌株的基因型是endA-和recA-。
缺点：
-如果目的基因具有毒性，则克隆步骤会变得困难。
-这些克隆菌株不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。

BL21 Sta（DE3）或BL21（DE3）
优点：
-这些表达菌株是蛋白酶缺陷型的。
缺点：
-您需要将质粒转化到表达菌株中。
-甘油储液可能不稳定，因为这些表达菌株的基因型不是endA-和recA-。
-（DE3）部分是多余的，因为启动子不需要T7 RNA聚合酶。

pTrc启动子可被大肠杆菌RNA聚合酶识别，而不是T7聚合酶，因此，pTrc启动子可在任何大肠杆菌菌株中表达，而不仅仅是BL21菌株。所以，您可使用Top10、DH5α等进行表达。但是，如果您的目的基因具有毒性，则会因表达渗漏而出现克隆困难。

一种被称为CAP（代谢产物活化蛋白）的转录激活蛋白，通常可结合到trc启动子的上游并激活转录。该蛋白需要cAMP才能与DNA结合。在培养基中加入葡萄糖可降低细胞内cAMP水平。在LB培养基和琼脂板中补充葡萄糖，会抑制trc启动子的基础水平转录。为确保插入片段的稳定性，我们建议您在选择培养基中加入25 mM或0.5%葡萄糖。

pTrc系统中的pTrc启动子是一种强杂合启动子，由trp启动子的-35区域和lacUV5启动子/操纵子的-10区域构成。pTrc表达受Lacl蛋白抑制，受IPTG诱导。

ATG通常对于高效的翻译启始是足够的，尽管翻译效率要视目的基因而定。最佳的建议应是保持cDNA中天然起始位点，除非确定这一位点的功能性不理想。如果从表达的角度来考虑，推荐构建并测试两种载体，一个具有天然的起始位点，另一个具有保守的Kozak序列。通常情况下，所有N-端融合型表达载体都已包含了一个RBS或翻译起始位点。