pDisplay™ 哺乳动物表达载体
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Invitrogen™

pDisplay™ 哺乳动物表达载体

pDisplay™ 是一种哺乳动物表达载体,设计用于重组蛋白在哺乳动物细胞表面的靶向表达。展示的蛋白可用于分析其与已知或推定配体相互作用的能力。通过将目的基因克隆到载体上的血小板源生长因子受体 (PDGFR) 的独特 N 端分泌信号和 C 端跨膜锚定结构域的同一阅读框中,将目的蛋白靶向并锚定于细胞表面了解更多信息
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V6602020 μg
货号 V66020
价格(CNY)
11,561.00
20 µg
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pDisplay™ 是一种哺乳动物表达载体,设计用于重组蛋白在哺乳动物细胞表面的靶向表达。展示的蛋白可用于分析其与已知或推定配体相互作用的能力。通过将目的基因克隆到载体上的血小板源生长因子受体 (PDGFR) 的独特 N 端分泌信号和 C 端跨膜锚定结构域的同一阅读框中,将目的蛋白靶向并锚定于细胞表面。与仅在原核细胞中操作的噬菌体展示载体相比,pDisplay™ 载体提供了能在哺乳动物细胞中加工表面展示的目的蛋白的优势。因此,从 pDisplay™ 中表达的真核来源的重组蛋白更类似于其天然形式。这可能有利于更准确的配体结合相互作用。除 N 端细胞表面靶向信号和 C 端跨膜锚定结构域外,pDisplay™ 载体包含以下主要特点:

•T7 启动子/启动位点,用于体外转录正义 RNA 和对插入片段进行测序
•含有新霉素抗性标记以便使用 Geneticin™ 在哺乳动物细胞中进行稳定筛选
•SV40 起始点以便在表达大 T 抗原的细胞系(例如 COS-1 和 COS-7)中进行复制和简单的载体挽救
•氨苄青霉素抗性基因用于在大肠杆菌中进行筛选
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
输送类型转染
产品类型哺乳动物表达载体
数量20 μg
选择试剂(真核生物)Geneticin™ (G-418)
载体pDisplay
克隆方法限制性内切酶/MCS
产品线pDISPLAY
促进剂CMV
蛋白标记IgK 前导序列、PDGFR 跨膜结构域、c-Myc 抗原决定簇标签、HA 标签, PDGFR Transmembrane Domain, c-Myc Epitope Tag, HA Tag
Unit Size20 µg
内容与储存
20 µg pDisplay 超螺旋载体,以溶于 TE 缓冲液中的 0.5 µg/mL 溶液形式提供,pH 值为8.0。储存在 -20°C 下。妥善储存时,可保证稳定储存 6 个月。

常见问题解答 (FAQ)

我使用你们的pDisplay载体在细胞表面表达我们的蛋白。使用anti-HA抗体进行Western杂交成功检测到该蛋白的表达,但使用anti-myc抗体的免疫荧光检测未能发现其在膜表面的表达。你们能提供一些帮助么?

我们建议您对载体序列进行检测,以确保目的基因和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)跨膜域在同一个读码框中。

我能否使用FACS细胞分选或基于磁珠的方法来分离我转染了pDisplay载体的细胞?

当我们尝试使用FACS技术和anti-myc抗体来分选pDisplay转染的细胞时,分选效果并不是非常好。不过,pDisplay转染的细胞可通过磁珠来进行分离:首先将细胞与anti-myc抗体进行孵育,之后再将细胞-抗体复合物与抗小鼠IgG1偶联的磁珠进行孵育。最后就可通过磁力架将细胞分离出来了。

我使用pDisplay载体来表达一条细胞膜表面的受体蛋白。使用胰酶处理细胞时是否需要考虑该蛋白所受的消化作用?

胰酶会消化任何蛋白中的精氨酸和赖氨酸残基,这是业界存在的广泛共识:胰酶处理细胞时膜蛋白的胞外域会被消化。不过在常规情况下,一旦胰酶被移除,这些蛋白便会迅速被重新置换。作为胰酶的替代品,您可使用Versene(货号 15040066)来解离绝大多数的贴壁细胞,这是一种含0.5 mM EDTA的PBS溶液,也/或可刮取细胞。EDTA能够螯合任何游离的Mg2+或Ca2+离子,而这些离子对于许多贴壁细胞维持粘附状态都是必需的。基于Hank's溶液的(货号 13150016)或基于PBS溶液的(货号 13151014)无酶细胞解离缓冲液均为螯合剂混合物,也能够胜任这类应用,可能比单用EDTA更为有效,而且不会对受体蛋白造成不良影响。

如需向哺乳动物细胞中转染pDisplay空载体,是否会形成一条靶向定位在细胞膜上的多肽?

向哺乳动物细胞中转染pDisplay空载不会向细胞膜呈递多肽,因为Ig kappa信号肽和PDGFR跨膜域并不处于同一读码框中,包含kappa信号肽的ORF在PDGFR跨膜域起始位点前的5bp处。 

我听说你们提供一种有助于蛋白分泌的载体,能够靶向定位至细胞膜。这是哪一种载体?

我们提供pDisplay载体(货号 V66020),本品用于将重组蛋白靶向定位至哺乳动物细胞膜表面。本载体包含了N端的小鼠Ig kappa-链分泌信号和C端源自血小板来源生长因子受体(PDGFR)的跨膜锚定域,能够帮助目的基因靶向定位并锚定于细胞膜表面。

引用和文献 (6)

引用和文献
Abstract
Delta/notch-like epidermal growth factor (EGF)-related receptor, a novel EGF-like repeat-containing protein targeted to dendrites of developing and adult central nervous system neurons.
Authors: Eiraku Mototsugu; Hirata Yutaka; Takeshima Hiroshi; Hirano Tomoo; Kengaku Mineko;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11950833
'We have identified a novel epidermal growth factor (EGF)-like repeat-containing single-pass transmembrane protein that is specifically expressed in the developing and mature central nervous system. Sequence analysis revealed that the 10 EGF-like repeats in the extracellular domain are closely related to those of the developmentally important receptor Notch and its ... More
Molecular mechanisms of pre-T cell receptor-induced survival.
Authors:Murga C, Barber DF
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12114514
'En route to maturing as T cell receptor (TCR) alphabeta-expressing cells, the development of thymocytes is contingent on expression of a pre-TCR complex comprising a TCRbeta chain paired with a surrogate TCRalpha chain, pre-Talpha (pTalpha). The pre-TCR has been proposed to promote cell survival, proliferation, differentiation, and lineage commitment. However, ... More
Myelin-associated glycoprotein interacts with the Nogo66 receptor to inhibit neurite outgrowth.
Authors: Domeniconi Marco; Cao Zixuan; Spencer Timothy; Sivasankaran Rajeev; Wang Kevin; Nikulina Elena; Kimura Noriko; Cai Hong; Deng Kangwen; Gao Ying; He Zhigang; Filbin Marie;
Journal:Neuron
PubMed ID:12160746
Myelin inhibitors of axonal regeneration, like Nogo and MAG, block regrowth after injury to the adult CNS. While a GPI-linked receptor for Nogo (NgR) has been identified, MAG's receptor is unknown. We show that MAG inhibits regeneration by interaction with NgR. Binding of and inhibition by MAG are lost if ... More
DNA immunization of mice and macaques with plasmids encoding hepatitis C virus envelope E2protein expressed intracellularly and on the cell surface.
Authors:Forns X, Emerson SU, Tobin GJ, Mushahwar IK, Purcell RH, Bukh J
Journal:Vaccine
PubMed ID:10217599
We analyzed the humoral immune response elicited by hepatitis C virus (HCV) E2 protein expressed in vivo after injection of plasmid DNA into mice and rhesus macaques. Three plasmids were used for immunization: a plasmid containing the entire sequence of the E2 and p7 genes (pE2); a plasmid encoding a ... More
Distinct kinetics for binding of the CD46 and SLAM receptors to overlapping sites in the measles virus hemagglutinin protein.
Authors: Santiago Cesar; Björling Ewa; Stehle Thilo; Casasnovas José M;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12065582
Measles virus (MV) is a human pathogen using two distinct cell surface receptors for entry into host cells. We present here a comparative analysis for binding of the MV receptors CD46 and SLAM to the measles virus hemagglutinin protein (MVH, Edmonston strain). Soluble monomeric and dimeric MVH variants were prepared ... More