pYES2/CT 酵母菌表达载体

以下是用于培养Pichia pastoris和S. cerevisia的营养丰富型和基本培养基：

营养丰富型培养基：

适用于S. cerevisiae和Pichia pastoris
•YPD（YEPD）：酵母提取物、蛋白胨和葡聚糖
•YPDS：酵母提取物、蛋白胨、葡聚糖和山梨醇

仅适用于Pichia pastoris
•BMGY：缓冲型甘油复合培养基
•BMMY：缓冲型甲醇复合培养基

基本培养基（又名缺陷型培养基）：

适用于S. cerevisiae
•SC（SD）：完全合成培养基（YNB、葡聚糖（或棉籽糖或半乳糖）以及氨基酸）

适用于Pichia pastoris

•MGY：基本甘油培养基
•MD：基本葡聚糖培养基
•MM：基本甲醇培养基
•BMGH：缓冲型基本甘油培养基
•BMMH：缓冲型基本甲醇培养基

当α因子基因中的P因子被替换为α时，S. pombe不能生成P因子。但是，当P因子基因中的α因子被替换为P时，S. pombe能够生成α因子。有反面证据表明，S. pombe能够加工其自身的交配因子切割位点，但并不是S. cerevisiae α因子的所有切割位点。最好使用一个更通用的信号序列（而不是前导信号序列，如α）。如果必须走前导路线，最好使用S. pombe的P因子前导而不是S. cerevisiae的α前导。

在诱导期间，一些研究人员选择使酵母生长在以2%半乳糖作为唯一碳源的培养基中。但是，在含2%半乳糖和2%棉籽糖的诱导培养基中，酵母通常生长更快。棉籽糖是酵母的良好碳源，与葡萄糖不同，棉籽糖不会抑制GAL启动子的转录。棉籽糖是由半乳糖、葡萄糖和果糖依次连接而形成的三糖。大部分酵母可切割葡萄糖-果糖键，但不会切割半乳糖-葡萄糖键。果糖随后被用作碳源。

我们提供INVSc1酵母株。这是一种二倍体酵母株，仅作表达用途。该酵母株不能形成良好的孢子，因此不适用于酵母遗传研究。INVSc1酵母株的基因型和表型如下：

基因型：MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52
表型：His-, Leu-, Trp-, Ura-

注意：INVSc1缺乏组氨酸、亮氨酸、色氨酸和尿嘧啶。该酵母株在缺乏组氨酸、亮氨酸、色氨酸和尿嘧啶的SC基本培养基中不能生长。

TE、醋酸锂和PEG的储液可保存。但是，制备待转化细胞的混合溶液，必须每次现用现配。如果溶液不是新配制的，则可能损失转化效率。