Novex™ WedgeWell™ 10 至 20%，Tris-甘氨酸，1.0 mm，小型蛋白凝胶，12 孔

电流异常升高的最常见原因是转膜缓冲液。如果转膜缓冲液浓度太高，会导致电导率增加和电流升高。如果不小心用Tris-HCl代替了转膜缓冲液所需的Tris base，也会导致高电流。Tris-HCl可使缓冲液pH降低，引起电导率和电流升高，从而导致过热。我们建议检查转膜缓冲液及其试剂成分，然后重新稀释或重新配制缓冲液。

NuPAGE凝胶比Invitrogen Tris-甘氨酸凝胶具有以下优势：

•稳定性更高，保质期更长：
- NuPAGE Bis-Tris凝胶和NuPAGE Tris-Acetate凝胶的操作pH（NuPAGE Bis-Tris凝胶为pH 7，NuPAGE Tris-Acetate凝胶为pH 8.1）比Invitrogen Tris-甘氨酸凝胶（pH 9.5）更低。在碱性pH下，聚丙烯酰胺水解为聚丙烯酸和氨，而中性pH可减少这种水解的发生。因此，NuPAGE凝胶比Invitrogen Tris-甘氨酸凝胶的稳定性更高，保质期更长（NuPAGE Bis-Tris凝胶可在4-25℃保存12个月，NuPAGE Tris-Acetate凝胶可在4℃保存8个月，而Tris-甘氨酸凝胶在4℃只能保存4-8周）。

•蛋白质分辨率更高，因为：
- 意外的化学修饰减少：在碱性pH（8.5-9.0）下，游离的丙烯酰胺可使蛋白质烷基化。其靶点是位于N端和赖氨酸上的氨基和半胱氨酸上的巯基。当pH低于8时，不会发生这种修饰。因此，与Tris-甘氨酸凝胶电泳相比，蛋白质在NuPAGE凝胶上电泳将更少发生这类意外的化学修饰。
- 蛋白质水解减少：加热Tris-甘氨酸样品缓冲液（pH 6.8），可使pH大幅降低，导致蛋白质的Asp-Pro断裂。高温和长时间加热/煮沸会增加这种断裂的发生率，导致出现多条较弱的带。在100℃时，pH降低至4.3。与其不同，NuPAGE LDS样品缓冲液（pH 8.5）加热至70℃时，pH降低至8.1，可避免发生这种断裂。

•电泳时间更短（NuPAGE Bis-Tris凝胶仅需35–50分钟，NuPAGE Tris-Acetate凝胶仅需1小时，而Tris甘氨酸凝胶则需90分钟）

Tris-甘氨酸凝胶的操作pH为9.5；NuPAGE Bis-Tris凝胶的操作pH为7，NuPAGE Tris-Acetate凝胶的操作pH为8.1。 < / p >

使用Bolt小型凝胶电泳槽跑10 cm凝胶塑料卡的小型凝胶（不将电泳槽的10.5 cm凝胶凸轮型夹更换为10 cm凝胶凸轮型夹），请参见使用手册(https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/mini_gel_tank_man.pdf)第22页的使用说明。

注意：为得到最佳结果，使用Bolt小型凝胶电泳槽跑10 cm凝胶塑料卡的小型凝胶时，应将Bolt小型凝胶电泳槽上的黑色10.5 cm凝胶凸轮型夹更换为灰色10 cm凝胶凸轮型夹（货号A26732）。凝胶凸轮型夹更换说明见使用手册(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/protein-expression-and-analysis/protein-gel-electrophoresis/electrophoresis-chambers/mini-gel-tank/bolt-mini-gel-tank-resources.html)第20页或视频(https://www.youtube.com/watch?v=1FtiX8Skllw)。

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中型凝胶可使用以下方法转印：

•iBlot干转系统，结合使用Transfer Stacks转印膜组
•Invitrogen半干转仪，最多同时转印2块中型凝胶
•Thermo Scientific Power Blotter，最多同时转印2块中型凝胶
•Thermo Scientific G2Fast Blotter（将于当前库存售尽后停止供应）