CTS Rotea 逆流离心系统样品数据

性能和应用数据

 

CTS Rotea 系统能够很好地为多种不同细胞类型的细胞处理提供高纯度和细胞存活率。

T 细胞和 Leukopak 处理：高回收率和存活率

使用 Rotea 仪器洗涤和浓缩的细胞样品在小体积中表现出极好的存活率和回收率。在 Rotea 仪器处理后，保持了 T 细胞的质量和组成，并且可以在比高密度培养基实验方法短得多的时间内完成 PBMC细胞分离。 

图1.T 细胞洗涤和浓缩过程中的存活率和回收率。温和的处理能够实现>90%的细胞回收率，同时通过 T 细胞洗涤和浓缩保持细胞存活率。在10次运行中证明了其具有高重现性。

柱状图显示使用 Rotea 系统洗涤和浓缩的 T 细胞具有96%存活率和94%回收率

图2.200x T 细胞浓缩。 CTS Rotea 系统用于将起始体积为1,000 mL 的5亿个 T 细胞浓缩至5 mL，实现97%的细胞回收率，同时保持94%的存活率。

浓缩细胞的加入和存活率与产物和存活率的柱状图

图3.在 Leukopak 处理过程中 PBMC 回收率高。CTS Rotea 系统可在多个供体（n=7）中从与红细胞裂解缓冲液搭配使用的 Leukopak 袋中获得约90%的 PBMC 回收率。

箱形图显示 Leukopak 袋的 PBMC 回收率为88.9%

来自 CTS Rotea 系统的有效洗涤和浓缩的细胞体积较低，可直接转移到 CTS Xenon 电转染系统 用于转染步骤。使用这两种高度兼容的细胞疗法系统可以节省时间并降低工作流程的复杂性。

 

要了解更多有关使用 CTS Rotea 系统进行自动化 PBMC细胞分离、T 细胞洗涤和浓缩以及 CAR T 细胞生产的信息，以及 Rotea 和 Xenon 系统如何协同工作以支持高效和有效的细胞疗法工作流程，请使用以下链接查看所有 CTS Rotea 系统应用说明。

T 细胞处理和 Leukopak PBMC 分离的有效时间

即使在高投料体积的情况下，Rotea 系统也能实现快速细胞处理和高细胞回收率。在不到四个小时的时间内，用户可以有效地洗涤和浓缩大量 T 细胞或从 Leukopak 袋中分离 PBMC。

投料体积（L）
 处理时间（分钟）
 细胞回收率
T 细胞洗液和浓缩（1 x 106 个细胞/mL）
0.511>90%
1.018
3.038
5.058
10.0114
20.0226
投料体积（L）
 处理时间（分钟）
 细胞回收率
PBMC 分离
约 0.25（¼ Leucopak 袋）25
 >90%
约 0.5（½ Leucopak 袋）45
约 1.0（一整袋 Leucopak 袋）85
5116
10230

与 Ficoll 培养基相比，使用 Rotea 系统分离 Leukopak PBMC 可节省时间

流式细胞分析数据显示，使用 CTS Rotea 仪器在不到30分钟分离 PBMC 细胞，与耗时2小时的 Ficoll 培养基分离结果类似。
 

图4.来自 CTS Rotea 系统的 PBMC 组成对比手动 Ficoll 聚合物。将单个供体的 Leukopak 一分为二，并使用 CTS Rotea 系统或手动 Ficoll 培养基实验方法分离 PBMC。使用连续设门评估 PBMC，以识别单核细胞、B 细胞、NK 细胞和 T 细胞。使用 CTS Rotea 系统（A）的处理时间不到30分钟，产生的结果与两小时 Ficoll 分离（B）的结果高度相似。

显示 Ficoll 分离或 CTSRotea 系统分离 PBMC 结果的流式细胞分析图

维持 T 细胞质量和组成

图5.洗涤和浓缩后，T 细胞质量和组成不受影响。使用 CTS Rotea 系统从健康供体中分离 PBMC 后，在培养物中扩增 T 细胞，并使用流式细胞分析评估 CD4 和 CD8 标志物。然后使用 CTS Rotea 系统对其进行洗涤和浓缩，并再次评估。比较表明 CD4 和 CD8 细胞群在两次分析之间保持一致的，证明相对比例不受 Rotea 系统处理的影响。

NK 细胞处理：高回收率、存活率和维持细胞毒性

CTS Rotea 系统还可在最高 80 mL/min 的流速下成功处理 NK 细胞，包括自动洗涤和浓缩在 Gibco CTS NK-Xpander 培养基 中扩增的人 NK 细胞。除 NK 细胞的高存活率和回收率外，这些细胞在处理后也可保持其细胞毒性。 

图6.NK 细胞存活率和回收率。对4次清洗和浓缩运行的存活率和回收率取平均值。

图7.洗涤和浓缩后维持 NK 细胞的细胞毒性。使用 Rotea 系统洗涤和浓缩的 NK 细胞保持细胞溶解能力，并能以剂量依赖性方式杀死 K562 靶细胞。

使用 Rotea 系统处理后存活率染色的图示结果

从细胞工厂系统高效收获 MSC

MSC 已经作为一种有前途的细胞类型出现，用于旨在治疗多种疾病的细胞疗法。封闭且自动化的细胞处理系统，例如 Rotea 系统，可以通过促进可扩展性、法规遵从性和质量控制来支持基于 MSC 的细胞疗法产品的生产。
 

这包括使用定制的 StemPro SFM XF 培养基在基于单层和微载体悬液的培养物中扩增间充质干细胞（MSC），以及使用 Rotea 系统从多层培养瓶中进行封闭系统传代和收获 MSC。

 

已证明使用 Rotea 系统从 Cell Factory 系统 收获的 MSC 可以保持较高的细胞存活率和已知 MSC 标志物的表达。

图8.MSC 浓缩。在 Rotea 系统上将 MSC 进行10倍浓缩，从450 mL 的投料体积浓缩至45 mL 的产物体积。

显示使用 Rotea 系统从450 mL 至45 mL 进行 MSC 浓缩的柱状图。

图9.MSC 存活率。使用 Rotea 系统处理后，MSC 存活率维持在接近98%。

显示使用 Rotea 系统处理前后 MSC 高存活率的柱状图

图10.MSC 总细胞回收率。使用 Rotea 系统处理后，在10层培养物（Cell Factory 系统）中观察到细胞的 MSC 回收率为97.3%。

显示 10 层培养物在使用 Rotea 处理前后的 MSC 高回收率的柱状图。

图11.保留典型 MSC 标志物。流式细胞分析显示，使用 ROTEA 系统处理后，所有细胞都保留了典型 MSC 标志物 CD73、CD90 和 CD105 的高表达。

显示 MSC 标志物 CD73、CD90 和 CD105 的高表达水平（>90%）的柱状图。阴性 MSC 标志物（CD34 和 CD45）几乎不表达。

除本文提供的数据外，研究人员还设计了一种半自动化处理过程，使用逆流离心从多层烧瓶中传代和收获 MSC。

慢病毒澄清过程中浊度降低

使用 Rotea 系统的温和逆流离心可在慢病毒澄清过程中将浊度水平降低至与手动离心相当的水平，但全程处于封闭的低剪切环境中。Rotea 系统使得处理时间更快，处理速度介于25-75 mL/min 之间，适合更大规模应用，此外，使用 Rotea 系统处理导致感染滴度损失极小。 

图12.慢病毒澄清后浊度澄清相当。使用 Rotea 系统进行慢病毒澄清导致浊度显著降低；使用标准手动离心观察到类似结果。

显示使用 Rotea 系统进行慢病毒澄清后浊度（NTU）显著降低的柱状图。

图13.慢病毒澄清后的感染滴度。CTS Rotea 系统在澄清后保持感染滴度高于2 x 108。

显示使用 Rotea 系统进行慢病毒澄清后的感染滴度水平（TU/mL）的柱状图。

PSC 球状体的快速有效解离

CTS Rotea 系统为悬浮培养物中生长的多能干细胞（PSC）球状体解离提供了高效且有效的封闭系统。与水浴法相比，利用这种封闭系统环境可显著降低污染风险。

图14.使用 CTS Rotea 系统和水浴从3 L 悬浮培养容器中解离球状体的比较。生长5天并使用 CTS Rotea 系统和水浴解离的球状体在（A）总细胞产率和（B）细胞存活率方面表现出相似的性能。从解离球状体收获单细胞产物后立即进行细胞计数，获得最终细胞产率和细胞存活率。值得注意的是，Rotea 系统可以比水浴方法显著更快地解离球状体。（C）重新接种到新的悬浮培养容器时，从 Rotea 系统收获的所有单细胞能够重新成核形成球状体。（D）生长5天后，重新接种的球状体的最终细胞产率也表现出相似，表明 Rotea 系统可以温和地将球状体解离成能够用于下游应用的单个细胞。

有效冲洗残留物

在用于细胞疗法之前，可将细胞解冻、选择、扩增、遗传改变、分化和/或冷冻保存。这些步骤中的每个步骤都可能需要不同的培养基或缓冲液，其中可能含有对细胞有害的物质。CTS Rotea 系统可有效去除残留物质，使细胞损失极小。

图15.CTS Rotea 系统的洗涤效率。显示了各洗涤体积从 T 细胞培养基中去除的（A）葡萄糖、（B）IL-2 或（C）HSA 的百分比。 

显示 CTS Rotea 中用于去除残留物质的不同洗涤体积的散点图和表格。

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