Vitrobot Mark IV System 可实现生物样品的可重复玻璃化

Thermo Scientific Vitrobot Mark IV System 提供半自动化玻璃化,可实现快速、简便且可重复的用于冷冻电镜的样品制备。它在恒定的物理与机械条件下执行冷冻固定过程,例如温度、相对湿度、吸液条件和冻结速度。 这可确保获得高质量的冷冻固定结果,并在进行冷冻电镜观察之前实现高通量的样品制备。

 

Vitrobot 系统为细胞生物学和分子成像等高要求的科研领域提供重要价值。 同样适用于食品、工业、制药和纳米技术等应用——在这些领域中,分析物的真实胶体结构至关重要。


Vitrobot Mark IV 系统特性

玻璃化过程

具有封闭式处理腔的高度自动化玻璃化过程:

  • 自动快门控制可实现平稳、瞬时将样品网格注入冷却剂(液态乙烷或丙烷)。容器升降机构将冷却剂靠近快门,以确保最佳玻璃化效果。
  • 冷却剂容器与载网器同步下降,可保持网格浸没在冷却剂中,从而在将样品转移到存放盒或低温夹具前,最小化污染风险。
  • 带一体化防污染环的冷却剂容器。
  • 在液氮环境中,从冷却剂到网格盒的网格转移为半自动化。

样品上样

Vitrobot Mark IV 系统可对浸入式冷冻过程中的所有关键参数提供精确且灵活的控制:

  • 少量样品可通过气候腔左右两侧的小侧口用移液器手动加样。
  • 加样时间和等待时间(加样与吸去液之间)均由软件控制,可在用户界面中设置。
  • 对多次加样、吸去液和玻璃化过程进行精确定时控制,可实现对分别加样组分间相互作用的时间分辨分析。

Vitrobot Mark IV系统界面与仪器控制

简便且灵活的用户界面:

  • Linux 操作系统
  • 触摸屏控制与设置
  • 亦可选配鼠标和脚踏控制

Vitrobot 吸纸装置

  • 通过在旋转泡沫垫上的滤纸对样品网格进行(可重复)吸纸,从而去除多余液体。
  • 吸纸次数(单个网格最多 16 次)和吸纸持续时间由软件控制,可在用户界面中设置。
  • 纵向网格位置(“blot offset”)以及吸纸与玻璃化之间的等待时间(“drain time”)均可由用户自定义。

Vitrobot Mark IV 系统应用范围

Vitrobot Mark IV 系统兼容多种样品类型,例如蛋白质、细菌和细胞,可满足多种结构生物学的应用需求。

单颗粒分析

单颗粒冷冻电子显微镜(cryo-EM)分析可对纯化的蛋白质或蛋白复合体进行近原子分辨率的结构表征。

冷冻电子断层成像

冷冻电子断层成像是一种可在近天然状态下研究细胞和组织三维结构的技术。

整合结构生物学

整合结构生物学将质谱与冷冻电子显微镜 (cryo-EM) 相结合,用于解析大型动态复合体的结构。


Vitrobot Mark IV 系统操作教学视频

通过这些逐步教学视频学习如何使用 Vitrobot Mark IV系统,从系统准备到样品玻璃化。


Vitrobot System 的样品制备技巧


Vitrobot Mark IV 系统 技术规格

重量 31 kg
尺寸 L/W/H: 413/260/890 mm

电源

  • Voltage 110 – 230 V
  • 50 – 60 Hz
  • Fuse 4 AT (110 V USA)
  • Fuse 2 AT (230 V 欧洲)
  • 电源线 Power cable 90 – 250 V
工作参数
  • 工作温度4–60° C(环境温度范围: 18–25° C)
  • Peltier 控制的加热/制冷
  • 保持100%相对湿度
  • 超声波控制加湿

精选文献

Find relevant citations from peer-reviewed journals where specific research results were generated using the Vitrobot Mark IV System.

 

Cryo-EM grid optimization for membrane proteins

Kampjut D, Steiner J & Sazanov LA. Cryo-EM grid optimisation for membrane proteins. iScience : 102139 (2021).

https://doi.org/10.1016/j.isci.2021.102139

 

Structure deformation and curvature sensing of PIEZO1 in lipid membranes

Yang, X., Lin, C., Chen, X. et al. Structure deformation and curvature sensing of PIEZO1 in lipid membranes. Nature 604, 377–383 (2022).

https://doi.org/10.1038/s41586-022-04574-8 

 

Integrative structure of a 10-megadalton eukaryotic pyruvate dehydrogenase complex from native cell extracts.

Kyrilis FL, Semchonok DA, Skalidis I, et al. Integrative structure of a 10-megadalton eukaryotic pyruvate dehydrogenase complex from native cell extracts. Cell Reports 34 (2021).

https://doi.org/10.1016/j.celrep.2021.108727 

 

Dynamics of GLP-1R peptide agonist engagement are correlated with kinetics of G protein activation.

Deganutti, G., Liang, YL., Zhang, X. et al. Dynamics of GLP-1R peptide agonist engagement are correlated with kinetics of G protein activation. Nat Commun 13, 92 (2022).

https://doi.org/10.1038/s41467-021-27760-0 

 

Structural basis of actin filament assembly and aging

Oosterheert, W., Klink, B.U., Belyy, A. et al. Structural basis of actin filament assembly and aging. Nature 611, 374–379 (2022).

https://doi.org/10.1038/s41586-022-05241-8


冷冻电镜样品制备与分析的附加资源

冷冻电镜样品制备

成功的蛋白质制备是任何结构生物学技术成功的基础。 对于冷冻电镜(cryo-EM),在将样品冻结到电镜网格上之前,需要多种方案以获得最高的样品质量。探索涵盖蛋白表达、制备和玻璃态冷冻的解决方案。

冷冻电镜资源中心

本资源中心为探索冷冻电镜能力的新手与资深研究人员提供丰富且可靠的技术内容。

仅供研究使用。不得用于诊断用途。