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RNA FISH 检测
超灵敏 RNA FISH
RNA FISH（RNA 荧光原位杂交）检测是一种强大的技术，可对固定细胞中的 RNA 和蛋白靶标进行可视化和定位。使用 Invitrogen ViewRNA 和 PrimeFlow RNA 检测试剂盒的超灵敏 RNA FISH 结合了专有的探针集设计和分支 DNA（bDNA）信号放大技术，该技术直接从样品源测量 RNA ，无需 RNA 纯化或酶促操作。使用 bDNA 技术的 RNA FISH 具有更高的特异性、更低的背景和更高的信噪比。
RNA FISH 检测如何使用分支 DNA（bDNA）技术进行工作
靶标杂交
传统 FISH 检测技术使用经一至五个荧光基团标记的大寡核苷酸序列，由于非特异性结合和信号放大不足而受到高背景和低灵敏度的限制。采用 bDNA 技术，一个约 20 个短寡核苷酸对的靶标特异性探针组能够与目标 RNA 序列中的特定区域杂交。后续信号放大步骤要求每个寡核苷酸对在相邻位置与靶标 RNA 结合，为靶标提供特异性，并提供其他寡核苷酸杂交的对接位点。其他杂交步骤最终会产生荧光标记的 "杂交树" ，该树可通过成像或流式细胞术提供单个 RNA 分子检测。目前有四种类型的荧光探针组可用于 ViewRNA 细胞或 PrimeFlow RNA 检测，并使用具有不同发射光谱的多种 Alexa Fluor 染料。当在单一样本中检测到超过一种 RNA 靶标时，每种探针集必须为独特类型，以便将其信号与其他信号进行区分。仅有两种类型的探针组可用于 ViewRNA ISH 组织测定，这两种探针组采用 Fast 红色或 Fast 蓝色底物经荧光或化学发光法进行检测。
信号放大
采用 bDNA 技术进行的信号放大通过一系列顺序杂交步骤完成，从而形成树状结构。前置放大器分子与各自的结合寡核苷酸探针成对杂交，形成该树状结构的 " 树干 "。多个放大器分子与各自的前置放大器杂交以形成“分支”。最后，多个标记探针与放大器杂交，形成树状结构的“叶片”。完全组合的信号放大树含 400 个标记探针结合位点。如果 20 寡核苷酸对探针组中的所有靶标特异性寡核苷酸与靶 RNA 转录物结合，可实现 8000 倍放大。
bDNA 的形成。描述 bDNA 技术如何实现信号放大的示意图。
为您的研究选择合适的FISH检测方法
| ViewRNA ISH 细胞检测 | ViewRNA Cell Plus 检测 | ViewRNA 组织检测 | ViewRNA 组织荧光检测 | PrimeFlow RNA检测试剂盒 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| mRNA ISH | 高内涵 ISH | |||||
| 细胞样品 | 培养细胞（贴壁或悬浮） | 培养细胞（贴壁或悬浮） | 培养细胞（贴壁或悬浮） | FFPE 组织切片 | FFPE 组织切片 冷冻保存的组织切片 细胞培养细胞（贴壁） | 单细胞悬液（原代或培养物） |
| 多色标记 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标（包括 miRNA） 和一个或多个蛋白靶标或上述任意组合 | 可同时检测多达 2 个 RNA 靶标（包括 miRNA） | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标，包括 microRNA | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标（包括 miRNA） |
| 抗体兼容性 | 否 | 否 | 是 | 否 | 否 | 是 |
| 检测信号 | 荧光
| 荧光
| 荧光
| 荧光或比色分析
| 荧光 Invitrogen Alexa Fluor 488，546，594，647 和 750 染料 | 荧光
|
| 仪器 | 荧光显微镜或高内涵成像系统 | 高容量成像系统 | 荧光显微镜或高内涵成像系统 | 荧光显微镜或宽场显微镜 | 荧光显微镜、高内涵成像系统或玻片扫描仪 | 流式细胞仪 |
| 检测规格 | 盖玻片安放在载玻片、腔式载玻片或 96 孔板上 | 96孔或384孔板 | 盖玻片安放在载玻片、腔式载玻片或 96 孔板上 | 安放于显微镜载玻片上的组织切片 | 安放于显微镜载玻片上的组织切片
| 管或 96 孔 V 形底板 |
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。