用于血液肿瘤研究的核酸提取

血液肿瘤研究 旨在加深我们对这些疾病的基本遗传、分子和细胞机制的了解。通过利用创新的研究方法和治疗手段，研究人员旨在改善治疗效果，开发更有效的早期检测策略，并最终找到治疗这些复杂而具有挑战性的恶性肿瘤的方法。三种最常见的血液疾病是贫血，血小板减少症和白血病，而血友病则是一种罕见的血液疾病。

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分子图谱分析有助于提供分子水平的综合图谱，首先要分离 DNA 和 RNA。从血液样本中分离总核酸 (TNA) 有助于深入了解与血液肿瘤相关的基因改变。依次分离这些分析物有助于研究人员：

• 分离单独的 DNA 和 RNA 洗脱液—无需采取额外步骤，包括对最终 TNA 洗脱液进行手动 RNase 处理
• 提高生产率—自动化的 DNA 和 RNA 顺序分离提供了简化的工作流程，以更少的手动操作时间更快地完成任务
• 使工作流程具备可扩展性—实现高质量核酸分离，提供可扩展且灵活的样品输入和通量
• 高效样本利用率--在进行小体系样本提取时，可利用顺序工作流程节省血液或骨髓样本使用量

MagMAX DNA/RNA 顺序提取试剂盒可帮助最大限度地提高珍贵样品中 DNA 和 RNA 的产量，其独立、即用型洗脱液可用于广泛的分子应用，包括 qPCR 和测序。该试剂盒与 KingFisher 样品纯化系统 稳定器兼容，可扩展工作流程，在满足特定通量需求的同时实现快速达标。

可提供一套完整的试剂盒或独立组件，用于大批量样品处理。

MagMAX 顺序工作流程可在 KingFisher Duo Prime ， KingFisher Flex 或 KingFisher APEX 纯化系统上依次从全血或骨髓样品类型中分离 DNA 和 RNA。总周转时间为 ~2.5 小时，总实际操作时间 * 为 ~45 分钟。

* 手动操作时间可能因样品数量和用户将样品添加至样品板的方法而异。

• 步骤 1：设置 KingFisher 样品纯化系统，准备全血或骨髓样品，并用蛋白酶 K 进行机上消化。
• 步骤 2：准备 DNA 裂解 / 结合和磁珠混合物。将其添加到每份样品中。
• 步骤 3：在 KingFisher 样品纯化系统上继续执行 DNA 提取程序。获得纯化的 DNA。
• 步骤 4：现在，为了获得纯化 RNA ，制备 RNA 结合和磁珠混合物。将其加入含 RNA 的上清液 (DNA 样品板) 中。
• 步骤 5：设置 KingFisher 样品纯化系统并将孔板装载到该系统上。
• 步骤 6：在机上 DNAase 步骤后，添加 RNA 重结合溶液。获得纯化的 RNA。

图1.使用 MagMAX DNA/RNA 顺序提取试剂盒从全血或骨髓中进行 DNA 和 RNA 连续分离。使用 KingFisher Duo Prime， KingFisher Flex 或 KingFisher APEX 纯化系统实现工作流程自动化。

使用 Oncomine 髓系疾病研究试剂盒， Ion Chef系统和 Ion GeneStudio S5 系统完成工作流程。

图2.纯化的洗脱 液可用于 Oncomine 髓系疾病研究试剂盒， Ion Chef 系统 和 Ion GeneStudio S5 系统的下游分析。纯化后，可使用 Oncomine 髓系疾病研究试剂盒制备核酸文库，并可在 Ion Chef 系统上制备模板。完成后，在 Ion GeneStudio S5 系统上执行下一代测序 (NGS) 并使用报告基因软件进行分析。通过将 MagMAX DNA/RNA 顺序提取试剂盒与 KingFisher 样品纯化系统 和下游解决方案整合，您可以全面了解髓系恶性肿瘤的 DNA 突变和基因融合。

图3.不同样品起始量的多个样品的DNA平均值。使用 Invitrogen Qubit 1X dsDNA Broad Range Assay，在 Invitrogen Qubit Flex 荧光计上测得的 DNA。只需 100 µL全血或 50 µL骨髓就能获得 >200 ng DNA，同时还能通过可扩展的样本量获得高产、高质量的 DNA。请注意，可扩展性并不反映线性，捐献者与捐献者之间的差异是预料之中的，并取决于样本质量、年龄和投入量。

图4.不同样品起始量的多个样品的 RNA 平均值。使用 Invitrogen Qubit RNA 高灵敏度 (HS) 定量试剂盒，在 Invitrogen Qubit Flex 荧光计上测得的 DNA。请注意，不同捐献者的 RNA 产量不同，取决于样品质量，年龄和起始量。从 100 µL 全血或 50 µL 骨髓中获得 >100 ng RNA，同时通过扩展起始量获得高产，高质量的 RNA。请注意，可扩展性并不反映线性，捐献者与捐献者之间的差异是预料之中的，并取决于样本质量、年龄和投入量。

1.Leukemia & Lymphoma Society.Facts and Statistics Overview.[accessed 2024 Apr 8]