April 11, 2013

By Molika Ashford

Cynvenio Biosystems本周表示，预计该公司的循环系统肿瘤细胞（CTC）技术将在未来几周内获得CLIA认证。该公司随后计划对其CTC测序服务开展临床验证，以及为针对分离CTC的一系列定向PCR分析assays开展临床验证，该公司已经为科研机构提供这些分析试剂。

Cynvenio在去年年底宣布推出供科研使用的测序和PCR服务，这包含从血液中分离出CTC，并利用Life Technologies的Ion Torrent AmpliSeq Cancer Panel进行定向测序，或针对三个基因（EGFR、KRAS和BRAF）中45个突变的TaqMan PCR分析。该公司首席科学官Paul Dempsey告诉《PCR Insider》的记者，其分离技术有望在未来几周内获得CLIA认证。在那之后，公司将会验证其分子分析方法在临床上的应用。

“我们预计在未来四周左右获得认证，”Dempsey谈道。“起初只覆盖[CTC的]回收步骤和计数……我们现在也在开展测序步骤的验证。”

对于PCR，Dempsey补充道，“我们所用的每一套探针必须经过实验室的验证。但主要的门槛在于要为我们的模板开发一个标准的PCR流程。之后每个引物组的验证将是比较轻松的工作。”

“我们肯定会根据Cynvenio关注的模型，来选择[在临床上]提供的目标。由于我们对乳腺癌感兴趣，所以PI3激酶将是一个比EGFR更为紧迫的目标。”他补充道。

据Dempsey介绍，Cynvenio参与了Life Technologies castPCR试剂的早期测试，并受益于castPCR能够在细胞系实验中扩增极其微弱的信号，用于其CTC平台的开发。他表示，既然目前的技术能够分离出高纯的CTC样品，那么公司也在使用非等位基因特异的TaqMan试剂。

“既然我们能通过回收高纯度的细胞而获得很高的特异性，那就没有必要专门使用如此特异的试剂。我们正在验证[灵敏度]低至1%的测序步骤，那也是TaqMan试剂的相对标准目标，”他谈道。

Cynvenio表示，在内部研究中，其系统已经能直接从全血中回收90%以上的CTC，而非定向捕获血液中每毫升低于80个的细胞。这产生了足够纯度的样品，可直接测序，而无需额外的测序前扩增。

据Cynvenio介绍，该公司的CTC分离技术依赖自动化平台，能在三小时内处理多个7.5 mL血液样品，得到分离的CTC细胞沉淀。Dempsey表示，分离主要是基于EPCAM抗体，但他也强调，公司增加了其他靶定策略，以增强目标细胞的选择。他表示，这可以根据特定客户的兴趣而改变。

Dempsey说：“主要是基于EPCAM，但也可以详细定制。如果人们感兴趣，我们确实有我们满意的其他[抗体]，并有能力在我们的实验室中开展工作。我们也提供一种定量服务，来定量我们库中没有的标志物，因此如果有人前来提供针对另一种类细胞的特异抗体，那么我们也能够在比较短的周转时间内胜任。”

尽管该公司到目前为止主要开发测序服务，但Dempsey 表示，Cynvenio相信为有意测定单个标志物或突变的研究小组提供临床PCR检测服务，会比较容易推进。

“从我们的角度来看，如果我们通过测序发现突变，PCR是条验证之路，那么朝那个方向走应该比其他方向更为容易，”Dempsey谈道。

“通过测序获得的图谱越大，就拥有更多的发现能力和监控能力。但如果你正在寻找药物和具体疗法，始终是少数类型的突变需要精确研究以便于作出决定，”Dempsey谈道。

“我们最初主要关注测序，因为我们从一开始就清楚，对CTC的分子生物学其知之甚少。我们要广撒网，以便了解这个群体是什么，”他解释道。

“也就是说，虽然其方式是我们每天运行5,000次检测来寻找一个特定的潜在药物目标存在与否，以便为此后的临床决策提供信息，”Dempsey谈道。“但不需要为此进行测序，所以我们已通过PCR读取来开展，因为它们更快更廉价，对于不同类型的突变也更准确，包括点突变。”

此外，对于有意开展自己的分子分析的研究小组，Cynvenio也提供CTC的回收和计数。或者，它与客户共同创建定制的PCR分析或测序策略。

Cynvenio并不是唯一一家为血液中CTC的分离而开发技术的公司，但Dempsey表示，公司相信它是第一个提供整套分离和分子分析的公司。

“所有[平台]都有长处和短处，”他说。“但一开始我们就很清楚，[细胞分离]平台本身是不够的。一方面，我们必须在稳定的血液样品中操作，因此我们现在有个操作能稳定血液达72个小时，而其他许多平台都必须在两小时内处理。这[对临床应用而言]是非常重要的。”

“一旦你得到细胞，这仍然是个混合群体，数量非常小……据我所知，我们是唯一一家能在七天周转时间内从患者到分子分析产出的公司……。”