Search Thermo Fisher Scientific
MIGRATED CONTENT FOR REFERENCE BEGINS
残留宿主细胞 DNA 定量
在生物制药产品的纯化过程中，需要证明去除了宿主细胞和基于工艺的杂质，以便将这些杂质减少至 地低于全球监管机构所规定的水平。resDNASEQ 试剂盒是一种基于定量 PCR 的检测方法，经过专门的设计和开发，可以实现对残留宿主细胞 DNA 的高灵敏度和准确定量分析。当与 PrepSEQ 样品制备相结合时，我们提供了一个完整的解决方案，可以提取和定量生物制药纯化过程中典型的样品基质中的宿主细胞 DNA。PrepSEQ 提供的高百分比、一致的 DNA 回收率再结合该检测方法的高灵敏度和宽范围，可以设计和执行强有力的纯化过程验证研究，从而证明宿主细胞 DNA 的清除率达到了或者超过了最高的监管预期水平。
进一步了解残留质粒 DNA 定量分析
残留宿主细胞 DNA 检测的易用性解决方案
resDNASEQ 系统是一种完全集成的检测方法，利用实时 PCR 技术和合格的 DNA 标准物质对残留的宿主细胞 DNA 进行定量分析。在 Applied Biosystems QuantStudio 5 实时 PCR 系统或 Applied Biosystems 7500 快速实时 PCR 系统上运行的 resDNASEQ 解决方案可以提供完整的残留宿主细胞 DNA 检测工作流程，从样品制备到结果生产可以在不到 5 小时内完成。这现有的符合 GMP 的解决方案被全球主要生物制药公司广泛用于常规用途。
通用型多合一试剂盒，来源可靠
USP <509> 残留 DNA 测试详细地介绍了定量 PCR 在生物制药生产过程中用于测量残留宿主细胞 DNA 水平的应用。ResDNASEQ 与 PrepSEQ 样品制备相结合是一种完全集成的基于 qPCR 的解决方案，用于提取和定量宿主细胞 DNA，它是专门为生物制药开发和制造而生产和进行 QC 测试的。resDNASEQ 方法的整体性能，包括灵敏度、准确度、精密度、范围和线性度都达到或超过了 USP<>509 中描述的示例。实施一个完全集成的测试解决方案可以减少从多个供应商采购检测试剂盒组件的费用和精力，以及内部开发检测试剂盒所需的对关键试剂的鉴定工作。
图 1：resDNASEQ 系统提供了一个样品分析到结果生成的解决方案，包括专有基因组 DNA 标准，并且利用符合 21 CFR 第 11 部分的自动样品制备和报告软件。这些试剂盒经过精心设计旨在用于检测片段化和非片段化的 DNA，从而获得可靠的定量分析结果。
介绍最新的 resDNASEQ 定量 DNA 试剂盒
我们最新的试剂盒拥有同样的质量和性能，使 resDNASEQ 系统成为行业领先的解决方案，并被行业中主要的生物制药公司作为常规检测用途广泛应用。用于定量分析残留宿主细胞 DNA 的完全集成的实时 qPCR 系统有助于为从各种类型的样品中获得可靠的定量数据，样品包括拥有不同样品基质的过程中的样品、纯化后的最终产品等。
Applied Biosystems resDNASEQ Sf9 和杆状病毒 DNA 定量试剂盒
首个商业化的双重定量 qPCR 系统用于检测开发基因治疗、细胞疫苗和生物治疗仿制药所用的 Sf9 杆状病毒平台的残留 DNA。
Applied Biosystems resDNASEQ 定量 HEK293 DNA 试剂盒
这是一种基于 qPCR 的系统，适用于检测用于开发基因治疗、细胞疫苗和生物治疗仿制药的 HEK293 细胞株的宿主细胞 DNA。
Applied Biosystems resDNASEQ E1A DNA 片段长度定量分析试剂盒
通过 E1a 片段长度测定来准确定量残留 HEK293 片段。使用三种单重检测试剂盒定量不同长度的残留 DNA 片段，从而实现高灵敏度分析。该试剂盒可以完美补足 HEK293 DNA 试剂盒的弱点，适用于基因治疗客户和基于细胞的疫苗制造商或使用含有 E1A 的宿主细胞的研究人员。
旨在满足严格的监管指南
为确保产品质量，药物最终剂型中残留 DNA 的含量必须符合美国食品药品监督管理局 (FDA)、欧洲药典、世界卫生组织 (WHO) 和其他监管机构制定的监管指南。每个监管机构都有具体的指南，根据产品和治疗方式的不同，每个治疗剂量的可接受限度在 10pg 到 10 ng DNA 之间。Applied Biosystems resDNASEQ 定量 DNA 解决方案旨在帮助满足这些监管指南。
相关网络讲座
定量聚合酶链式反应 (PCR) 测定技术具备高灵敏度，在使用其准确、快速地定量分析各种宿主细胞系统的残留 DNA，包括中国仓鼠卵巢 (CHO)、大肠杆菌、Vero 和人/人胚肾 293 (HEK293) 时，根据 ICH Q2(R1) 了解方法验证的各个部分。
专为实现目标而打造，在验证中确认，全球应用
生产生物制剂的生物制药公司必须验证通过纯化工艺过程和生物制剂的最终剂量中携带的宿主细胞 DNA 杂质的数量，从而确保满足或超过监管指导原则的要求。不同监管机构对残留宿主细胞 DNA 测定的验证要求可能有所不同，但监管机构一般期望是可以满足 ICH 协调的三方指导原则 Q2(R1) (ICHQ2R1) 分析方法验证中列出的验证要求。我们在此处将会分享一些 resDNASEQ 宿主细胞 DNA 定量试剂盒的相关验证数据，重点是一些最具挑战性的验证参数，包括定量限 (LOQ)、特异性和准确性。
灵敏度—定量限 (LOQ)
单个分析方法的定量限是指样品中能以适当的精度和准确度进行定量的分析物的最低含量。定量限是测定样品基质中低含量化合物的一个参数，而且特别是可以用于测定杂质和/或降解产物。就 resDNASEQ 试剂盒而言，哺乳动物 DNA 的定量限为 1.5 pg/mL，而细菌/酵母菌 DNA 的定量限为 15 pg/mL。
准确性—加标样本回收
检测的准确性是通过对已知浓度的重复样进行加标并且从标准曲线上计算出回收率来衡量的。检测的精度是通过变化系数百分比 (%CV) 来定义和测量的，它是通过标准偏差除以重复次数的平均 Ct 来计算得到的。通过用 PrepSEQ 和相应的 resDNASEQ 试剂盒在模拟样品基质中运行 100 pg 的加标对照 DNA 来评估 resDNASEQ 检测试剂盒的性能。下表列出了四种 resDNASEQ 检测试剂盒的结果。resDNASEQ 检测试剂盒的典型 %CV 在低个位数范围内，回收率在 78-92% 之间，具体数值取决于细胞株。此外，一致的高 DNA 回收率和准确的定量结果适用于所有测试的加标浓度，包括 10 pg 和 1 pg。
CHO 细胞株 DNA 的加标回收率
| 100 pg | 10 pg | 1 pg | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| CHO | 回收率% | CV% | 回收率% | CV% | 回收率% | CV% |
| 1 | 97.9 | 5.9 | 91 | 2.8 | 82.1 | 7.9 |
| 2 | 95.4 | 4.5 | 89.8 | 2.2 | 80.1 | 4.9 |
| 3 | 107.5 | 3.7 | 93.6 | 3.3 | 100.3 | 6.4 |
| 4 | 109.6 | 5.2 | 94.6 | 4.8 | 97.1 | 3.8 |
| 平均 | 102.6 | 92.3 | 89.9 | |||
| SD | 7 | 2.2 | 10.3 | |||
| CV% | 6.8 | 2.4 | 11.4 | |||
图 2：在一式三份的样品中加标了 100 微微克的标准 DNA。
特异性——特异性检测目标DNA
为了准确定量，试剂盒必须仅能检测样品中的目标 DNA 而非样品中的其他 DNA。下方展示了一个示例，其中 resDNASEQ 毕赤酵母试剂盒不受样品中其他 DNA 的影响。
| 刺突 | Ct | 样本起始量 |
|---|---|---|
| CHO | Und | 10 ng |
| Vero | Und | 10 ng |
| 仓鼠 | Und | 10 ng |
| 鸡 | Und | 10 ng |
| 猪 | Und | 10 ng |
| 酿酒酵母 | Und | 10 ng |
| 牛 | Und | 10 ng |
| 小鼠 | Und | 10 ng |
| 大鼠 | Und | 10 ng |
| 狗 | Und | 10 ng |
| 人 | Und | 10 ng |
| 大肠杆菌 | Und | 10 ng |
| 毕赤酵母菌菌株 (KM71) | 31.7 | 10 pg |
图 3：只有毕赤酵母进行了扩增，并且清楚地标识了目的DNA 的特异性
无论分子量片段尺寸如何，结果均准确可靠
为了对残留宿主细胞 DNA 进行最准确的定量分析，检测结果必须不受检测样品中 DNA 分子大小的影响。下面显示的是在代表典型单克隆抗体纯化情况的几种不同基质中，对高分子量和片段化的 CHO 标准 DNA 稀释系列的分析结果。resDNASEQ 测定在整个分析的浓度范围内，即使有片段化的 DNA 也能保持一致的性能。
| 已添加 DNA | M1 | M2 | M3 | M4 | M5 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 未切割 | Sau961 | 未切割 | Sau961 | 未切割 | Sau961 | 未切割 | Sau961 | 未切割 | Sau961 | |
| 1 ng | 122% | 91% | 122% | 100% | 95% | 88% | 103% | 93% | 85% | 105% |
| 0.1 ng | 95% | 94% | 95% | 108% | 109% | 86% | 99% | 107% | 82% | 110% |
| 10 ng | 91% | 84% | 91% | 98% | 96% | 89% | 84% | 98% | 86% | 101% |
| 1 ng | 88% | 82% | 88% | 87% | 91% | 79% | 85% | 82% | 66% | 101% |
| 0.1 ng | 91% | 87% | 91% | 80% | 100% | 87% | 82% | 86% | 76% | 115% |
图 4：加标 CHO-resDNASEQ 在 5 个浓度水平下回收，显示高分子量 DNA（未切割）和低分子量 DNA (Sau961)。基质为 M1：离子交换，pH 7.5；M2：疏水作用；M3：离子交换，pH 6；M4：蛋白 A 洗脱液；M5：纯化后原液。
简化的工作流程可在 5 小时内获得结果
点击图片放大
Applied Biosystems 产品提供了一个完整的残留宿主细胞定量工作流程，包括自动制备样品（也可手动制备样品）、残留宿主细胞分析试剂盒、qPCR 检测和分析软件。简化的工作流程能够进行验证，最大限度地减少手动操作时间，并提高整体产量。
无论样品基质是否复杂，都能获得一致的表现
我们提供的 Applied Biosystems PrepSEQ 试剂盒可用于制备残留宿主细胞 DNA 样品，这是一种基于磁珠的核酸提取和纯化工作流程，具有同类最佳的回收率，适用于需要一致的绝对定量和最高灵敏度检测的应用。根据您的工艺需求，可提供简单的手动操作和自动化工作流程方案。
通过自动化样品制备提高样品通量
KingFisher Flex 磁珠纯化仪提供了一个简单的工作流程，通量高，因此您可以使用 PrepSEQ 样品制备试剂盒处理多达 96 个样品，总计操作时间为 1 小时。
- 在各种各样的样品类型中实施一致、高质量的核酸回收
- 经过验证的核酸纯化方法适用于 resDNASEQ 工作流程，可以获得一致、可重复的结果
- 通过磁珠传输技术控制交叉污染
使用集成仪器和分析软件简化数据分析
点击图片放大
图 5：CHO resDNASEQ 的标准曲线表示 6 个数量级的线性和使用 AccuSEQ 软件的曲线拟合参数。
Applied Biosystems AccuSEQ 实时 PCR 检测软件可满足生物制药生产过程中残留宿主细胞 DNA 分析测试的，也适用于常规 qPCR 检测。该软件适用于配有 0.1 mL、96 孔板的 Applied Biosystems QuantStudio 5 (QS5) 实时 PCR 仪，可用于快速或标准循环模式和 Applied Biosystems 7500 FAST 实时 PCR 仪。下一代算法为 resDNASEQ 残留宿主细胞 DNA 分析提供准确的定量数据，并且可通过相关统计数字轻松确定样品浓度。
主要特点：
- 可连接 7500 和 QS5 Fast 实时 PCR 仪
- 直观化的界面可以设置样品运行并且可以阐释杂质数据
- 具有安全、审计和电子签名功能，有助于符合 21 CFR part 11（美国联邦法规第 21 章第 11 款）的要求
- 兼容 Windows 10
CHO 样品的 AccuSEQ 检测结果报告
图 6：表中所示的是两个水平的加标 CHO 样品的定量分析结果，每个样品都重复进行了三次同样的测试。
一个拥有监管经验的强大平台
Applied Biosystems QuantStudio 5 (QS5) 系统经过精心设计，是一款适合新老用户使用的实时定量 PCR 系统，简单、经济且性能和品质极佳。QuantStudio 5 实时 PCR 系统在单次反应中可检测到低至 1.5 倍的靶标数量差异，并且线性动态范围为 10 的对数。
Applied Biosystems 7500 实时 PCR 系统 是一个强大的平台，适用于同时需要优异性能和较大限度染料多功能性的实验室。该系统是一个复杂的平台，适用于需要扩展功能和较大限度多功能性的用户。第三代平台采用了创新的光学系统，提高了灵敏度。
按细胞株采购 resDNASEQ 定量分析试剂盒
Applied Biosystems ResDNASEQ 宿主细胞残留 DNA 定量分析系统提供了一系列试剂盒，可以测量生物制药产品生产中常用宿主细胞株的残留 DNA 水平。
resDNASEQ 定量
CHO DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
大肠杆菌 DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
HEK293 DNA 试剂盒*
人 DNA 试剂盒*
E1A DNA 片段长度试剂盒
Sf9 和杆状病毒 DNA 试剂盒
Sf9 和杆状病毒
DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
Vero DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
毕赤酵母 DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
MDCK DNA 试剂盒
resDNASEQ 定量
NS0 DNA 试剂盒
*在基因治疗或细胞疫苗生产中使用 HEK293 细胞株的客户可能要考虑使用Applied Biosystems resDNASEQ E1A DNA 片段长度定量分析试剂盒从而准确地定量残留的 HEK293 片段。这种 E1A 片段长度测定法也适用于使用由 E1A 基因转化而来的其他宿主细胞的生产过程。
定制解决方案
过程中和批放行测试的定制服务
如果找不到适用于特定细胞株的 resDNASEQ 检测方法，赛默飞可以提供帮助。赛默飞的定制服务团队可以与客户合作，开发一个定制的 TaqMan 检测方法，以满足客户的过程中和批放行测试的需求。 赛默飞还可以支持开发和验证新开发的定制 resDNASEQ 测定过程。
全球性的服务和支持
验证&实施指导原则
验证咨询服务提供技术上的项目管理，可以帮助验证检测是否是按照要求的参数所进行测试的。
合规服务
监管合规专家管理及时、具有成本效益、可进行审核的文件，以便您的仪器按照制造商的技术规范进行安装、运行，且维持最佳性能。
培训服务
赛默飞遍布在世界各地的培训中心、您的实验室或通过网络教学，我们都可以提供应用和仪器培训计划。
服务计划
预定的计划维护和保证的响应时间，可以帮助客户避免不必要的停机，减少实验室工作人员的压力，并且可以延长仪器的使用寿命。
生物工艺资源
点击以下链接获取产品手册、培训视频、手机App和更多资源。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。