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由于死细胞通常可与实验中使用的多种荧光试剂发生非特异性的结合，从死细胞中获得的数据常常会导致假阳性结果。 因此，将死细胞从流式细胞数据中去除是确保获得准确的结果和分析的关键步骤。 Life Technologies provides a unique set of violet laser-compatible Molecular Probes fluorescent dyes designed to easily and accurately define live and dead cell populations.
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LIVE/DEAD可固定死细胞染料
可固定死细胞染料可与表面抗原共价结合，它不会进入健康细胞内部。 而染料可以标记死细胞细胞质内的蛋白质，使死细胞内的荧光强度较活细胞高至少50倍。 由于此标记是共价连接，因此染色细胞可使用甲醛固定并透化，且不会影响其活性区分，它是那些想要先固定样本再进行分析的研究人员的理想选择。 ArC™胺基反应性微珠试剂盒是设置可固定死细胞染料的补偿要求的极佳工具。
- 固定后细胞活性测量
- 准确的细胞内染色测定
- 可靠的活性测定
使用可固定死细胞染料。 使用LIVE/DEAD 可固定死细胞染料试剂盒中的试剂分别对活Jurkat细胞 (左侧峰) 和经过热处理的Jurkat细胞 (右侧峰) 进行染色。 (A) 中的细胞未经固定；(B) 中的细胞在染色反应后，经3.7%甲醛固定。 在流式细胞仪上用405 nm激发光和~525 nm发射光对样本进行分析。
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SYTOX Blue核酸染料
SYTOX Blue死细胞染料是一种高亲和核酸染料，它只能通过死细胞受损的细胞膜，而不能进入健康细胞内。 使用SYTOX Blue死细胞染料进行短暂的孵育后，利用405 nm紫色激光激发，死细胞的核酸可发出蓝色荧光。 上述特性使SYTOX Blue死细胞染料成为一种简单的一步法死细胞定量指示剂，适用于配备有紫色激光的流式细胞仪。
- 核酸染色的其他激光激发
- 利用紫色激光替代碘化丙啶 (PI)
- 快速且易用的DNA染色实验方案
SYTOX Blue死细胞染料与Vybrant DyeCycle™ Green染料配合使用。 将Jurkat细胞用Vybrant DyeCycle™ Green染料染色，然后用可渗入DNA染料——SYTOX Blue死细胞染料染色，利用流式细胞仪在405 nm和488 nm激发光下进行分析，设置SYTOX Blue阴性细胞门限，去除死细胞。 Cell cycle was then evaluated using a histogram of Vybrant DyeCycle™ Green staining.
CellTrace™ Calcein Violet AM是利用紫色激光进行细胞内酯酶活性检测的最佳染料。 它既可作为独立试剂提供，亦可包括在LIVE/DEAD Violet存活/活力试剂盒中，该试剂盒结合了CellTrace™ Calcein Violet荧光和死细胞aqua荧光反应性染料。 这种独特的试剂盒可利用紫色激光同时实现活细胞和死细胞的分析。
- 利用紫色激光的活细胞染料
- 生理活性测定 (与膜状态无关)
- 几乎无非特异性本底染色
酯酶底物与死细胞染料在经热处理和未经处理的细胞混合物中的共同使用。 按照LIVE/DEAD Violet存活/活力试剂盒 (CellTrace™ Calcein Violet, AM 和fixable violet死细胞染料) 中的实验方案，对中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞进行染色。 Cells were analyzed by flow cytometry using 405 nm excitation.
CountBright™绝对计数微珠是经校准的微球悬液，能够在各种激发和发射波长下发出亮荧光 (紫外光至635 nm激发和385nm发射波长)。 将CountBright™绝对计数微珠与细胞样本混合，利用流式细胞仪进行分析。 通过比较微珠与细胞数量的比值，计算样本中的绝对细胞数。 由于是将CountBright™微珠加入检测样品，因此利用单平台法进行绝对细胞计数较多平台检测更简单且更准确。 CountBright™绝对计数微珠可用于多种细胞类型，包括未洗涤的裂解全血样品。
活细胞、死细胞和绝对细胞数量测定
采用530/30 nm带通滤光片采集的钙黄绿素荧光值与采用610/20 nm带通滤光片采集的乙啶同型二聚体-1荧光值的图上可以清楚地分辩出活细胞和死细胞以及计数微珠 (C36950)。 A mixture of live and heat-killed Jurkat cells (human T-cell leukemia) was treated with the reagents in the LIVE/DEAD Viability /Cytotoxicity Kit, counting beads were added, and the sample was analyzed by flow cytometry using 488 nm excitation.