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使用 Dynabeads 在15分钟内磁性分离 mRNA
如何使用 Dynabeads mRNA Direct 试剂盒在15分钟内分离 mRNA 转录组
15分钟 mRNA 分离方案是通过磁性 Dynabeads 与 Oligo(dT)25 偶联来实现的。Dynabeads mRNA 分离磁珠几乎能够从任何粗裂解物中特异性捕获 mRNA 分子。 磁珠处理和一致的结果使得 Dynabeads mRNA Direct 试剂盒成为自动化 mRNA 分离的理想选择
当目标分子是 mRNA 时，无需分离总 RNA
实际上，mRNA 含量仅占细胞总 RNA 的 1%-5%。Dynabeads mRNA 纯化试剂盒和技术仅靶向 mRNA 分子，可将其直接从溶液中提取出来。然而，在采用总 RNA 纯化方法获得的 RNA 产物中，核糖体 RNA 占比高达 80%。 Dynabeads mRNA 纯化试剂盒可分离所需的 mRNA 转录组，并且不含污染性核糖体 RNA、tRNA、miRNA、siRNA、非 Poly-A RNA 和预处理 RNA。
超过5,000份文献引用过 Dynabeads 磁性 mRNA 分离
经证明，Dynabeads mRNA 纯化方法具有非常高的通用性、灵敏度和一致的可靠性。Dynabeads mRNA Direct 试剂盒仅捕获转录组，在依赖于稳定且灵敏的高纯度 mRNA 分离的所有应用上游，该试剂盒是较为理想的选择。
无论您是要分离用于下一代测序的 mRNA 转录组，还是仅关注用于 cDNA 合成和克隆的 mRNA 分离，Dynabeads mRNA Direct 试剂盒都能让您的 mRNA 转录组达到具有代表性、超高纯度和重现性高的区间范围。
较高的转录组回收率
- 单细胞转录组分析
- 纯净、完整和全长基因转录本
- 稳定且无偏倚地分离所有 poly-A 转录本
- 利用单个细胞或整个组织创建 cDNA 文库
- 直接捕获 mRNA 可实现更高的得率和方案可扩展性
Dynabeads 与众不同
- 无柱系统
- 用移动磁珠物理捕获 mRNA
- 快速且温和的磁性处理程序
- 在高离心力离心期间不会损失 mRNA
- 在洗脱期间 mRNA 不会被捕获到柱膜上
多种洗脱选项
- 任何容量（低至 5 uL）的洗脱
- mRNA 转录组洗脱可选：
- Dynabeads 的存在不会抑制下游程序中的酶促反应
- 可以直接在磁珠上合成 cDNA以创建可重复使用的固相 cDNA 文库
- 可以直接对磁珠结合的 cDNA 进行 qRT-PCR，从而对低至单个分离细胞水平的整个转录组进行灵敏的定量分析
mRNA 转录组分离来源：
- 酵母菌
- 培养细胞
- 粪便
- 植物、动物和昆虫组织
- 单个分离细胞
- 血清、血浆、血液
- BAL - 支气管肺泡灌洗液
- CSF - 脑脊液
- 储存在 Trizol 中的样本
- 任何真核总 RNA 制备物
- 含病毒性 poly A+ RNA 的血清（例如 HIV）
- FFPE 组织
- FFPE 切片及其他
兼容的下游应用：
- 微阵列
- SAGE、RACE
- cDNA 合成
- RNA 测序
- 下一代测序
- cDNA 文库构建
- 单细胞 cDNA 文库
- 固相 cDNA 文库构建
- 消减杂交
- 引物延伸
- RPA - 核糖核酸酶保护分析
- RT-PCR
- qRT-PCR 及其他
使用 Dynabeads 直接磁性分离 mRNA 的原理
此方法依赖于 A-T 碱基配对。oligo-dT 的短序列共价结合到 Dynabeads 表面，并与 mRNA 的多聚腺苷酸尾杂交，从而实现简单快速的磁性分离（15分钟）。RNase 抑制以及严格的杂交和洗涤步骤共同确保从粗样本中分离出纯净完整的 mRNA，无需使用强离液剂。
该方案灵敏、灵活并且可根据特定样本量轻松扩大或缩小规模，甚至适用于单个细胞。因此，可以通过 RT-PCR 检测来自高度特化细胞的 mRNA。分离的 mRNA 可用很少量的溶液进行洗脱，适用于所有分子生物学应用。无需从磁珠上洗脱靶标，因为磁珠不会干扰下游的酶促反应。磁珠结合的 oligo-dT 可以作为逆转录和第一链 cDNA 合成的引物，从而直接用于 RT-PCR 和固相 cDNA 文库构建。
磁性处理的固有优势简化了磁珠结合材料的洗涤、分离和浓缩步骤，无需离心或过柱洗脱。无剩磁加上出色的分散能力，也满足自动化系统和微流体的要求。
这些 Dynabeads 可作为 独立的磁珠和 包含缓冲液和溶液的用于轻松分离 mRNA 转录组的mRNA 分离试剂盒的一部分提供。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。