高分辨率熔解曲线 (HRM) 分析是一种相对较新的PCR后分析方法，可用于鉴别核酸序列的差异。 这种方法的核心是检测PCR熔解 (解离) 曲线上的微小差异。 这是借助高亮度的dsDNA结合染料和实时荧光定量PCR仪实现的，后者可精确控制温度变化，且具备高级数据采集功能。 数据用专为HRM设计的软件进行分析和操作。

HRM优点

  • 低试剂消耗量，低废物率： HRM仅需 (20 µL) PCR反应体积即可分析单个样本，无需使用HPLC溶剂或DGGE凝胶
  • 简单、快速的工作流程： PCR扩增后无需额外的仪器设备 在扩增结束时可添加高分辨率熔解曲线，并在完成后立即分析
  • 快速优化： 与DHPLC技术不同，其不需要热优化
  • 低样本消耗： HRM后续分析中，PCR扩增物可直接用于Sanger测序反应
 

HRM

Read how Dr. Birgit Ebner identifies variants by HRM in difficult samples.

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甲基化分析

HRM分析还可用于检测基因之间的甲基化差异；这称为甲基化特异性高分辨率熔解 (MS-HRM) 分析。

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突变筛查

高分辨率熔解分析可用于筛查靶基因突变，在测序分析前鉴别变异样本。

快速，准确地找出更多的新变种

高分辨率熔解曲线 (HRM) 分析可替代新基因变体的 dHPLC 测序筛查。 HRM软件现已用于Applied Biosystems ViiA™ 7、7900HT 快速、7500快速、StepOnePlus™和StepOne™实时荧光定量PCR系统。 StepOne™ (48孔) 和StepOnePlus™ (96孔) 实时荧光定量PCR系统操作极其简单，它采用了易于使用但功能强大的用户界面设计，无论新手还是经验丰富的研究人员均适合使用。 7500 快速实时荧光定量PCR系统可在标准的96孔规格中进行快速热循环，并提供精确的结果。 采用384孔ViiA™ 7和7900HT——采用384孔ViiA™ 7和7900HT高通量系统，实现高通量HRM分析。 
图1： 在另外一张平板上生成的不同点，基于实时HRM系统。

能很容易地鉴别出新的变异体是成功应用HRM技术的关键。

By eliminating the temperature shift step, the Applied Biosystems HRM solution (Fig 2) was able to clearly distinguish homozygous variant samples from homozygous wild type samples in 97.5% of the population.

 

通过各软件包自动检出所有基因型，且不会因操作人员而变动。 第1类SNP（A / G的），9种DNA样品多种技术的复制品，代表3种基因型： 纯野生型 (G/G), 纯变异型 (A/A) 和杂合型 (A/G).

监管状态： 仅供研究使用。 这些产品不用于诊断。