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数十年来，Invitrogen SuperScript 反转录酶（RT）一直为诸多 RNA 研究应用提供可靠的 cDNA 合成支持。历代 SuperScript 反转录酶的性能不断得到提升，在热稳定性、持续合成能力、抑制剂耐受性和反应速度方面持续改进，助力研究人员轻松应对要求日益严苛的 RNA 样本和实验流程。
Invitrogen SuperScript V 反转录酶在 SuperScript IV 反转录酶久经验证的性能基础上，进一步提升了反转录性能，并提供更为灵活的实验流程。SuperScript V 系列提供单酶和即用型 VILO 预混液两种形式，将稳健的 cDNA 合成与增强的试剂稳定性、灵活的产品形式及室温操作融为一体。
SuperScript 系列反转录酶对比
表 1. SuperScript 历代反转录酶的主要特性。
| SuperScript V 反转录酶 | SuperScript IV 反转录酶 | SuperScript III 反转录酶 | SuperScript II 反转录酶 | |
|---|---|---|---|---|
| 性能 | ||||
| 灵敏度 | 0.1 pg | 1–10 pg | 10 pg | 1 ng |
| 最长 cDNA 长度 | 长达 20 kb | 长达 13 kb | 长达 12.3 kb | 长达 12.3 kb |
| 最佳 RT 温度 | 50–55°C | 50–55°C | 50°C | 42°C |
| 热稳定性 | 最高65°C | 最高65°C | 最高55°C | 最高50°C |
| 挑战性 RNA 样本处理能力 | 高 | 高 | 中 | 低 |
| 抑制剂耐受能力 | 高 | 高 | 中 | 低 |
| 操作 | ||||
| 反应时间 | 1–10 分钟 | 10 分钟 | 30–50 分钟 | 50 分钟 |
| 反应体系配制 | 室温 | 冰浴 | 冰浴 | 冰浴 |
| 已配制反应体系的稳定性 | 长达 24 小时* | 否 | 否 | 否 |
| 是否需要 DTT | 否 | 是 | 是 | 是 |
| 稳定性 | ||||
| 运输条件 | 常温 干冰 / 湿冰 |
干冰 | 干冰 | 湿冰 |
| 室温储存 | 是* | 否 | 否 | 否 |
| Animal-origin free | 是 | 否 | 是 | 是 |
*SuperScript V 单酶在室温下可稳定保存长达 6 个月；SuperScript V VILO 预混液在室温下可稳定保存 1 个月。
为什么选择 SuperScript V 反转录酶？
- 选择 SuperScript V 反转录酶，不管对于常规 RNA 样本还是挑战性 RNA 样本均能获得卓越性能，同时还能享受便捷的反应体系配制和出色的稳定性。
- 对于 SuperScript II 或 III 反转录酶用户，SuperScript V 反转录酶可助力提升性能并简化实验流程。
- 对于 SuperScript IV 反转录酶用户，SuperScript V 反转录酶除性能优势外，还可带来在实验流程和稳定性方面的好处。
如何选择产品形式
 SuperScript V 反转录酶 |
 SuperScript V VILO 预混液 |
 SuperScript V VILO 预混液（不含引物） |
|---|---|---|
用于灵活定制 cDNA 合成体系的反转录单酶
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即用型预混液，含经优化的 oligo(dT) 引物和随机引物
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不含引物的即用型预混液
适用场景：
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SuperScript V 反转录酶的优势
卓越性能
适用于广泛的 RNA 样本起始量和样本类型（包括高难度 RNA），实现可靠的 cDNA 合成。
- 灵敏度
- 合成效率
- 稳健性
- 长片段 cDNA
- 热稳定性
灵敏度——更宽广的 RNA 起始量范围（图 1）。
图 1. 在 qPCR 检测中表现出超宽动态范围和高灵敏度。清晰分离的扩增曲线表明，在跨越多个数量级的范围内均可保持稳定性能。
高效——与其他 RT 相比，RT-qPCR 中的 Ct 值更低（图 2 和图 3）。
图 2. 与市售同类 RT 试剂盒或预混液相比具有更早的Ct值。SuperScript V 始终可获得更早的 Ct 值（红线），反映出其具有更高的 cDNA 产量和更强的检测灵敏度。所有产品均按照制造商提供的方案进行评估。
图 3. 其他 RT 预混液相比与SuperScript V均表现出明显的 Ct 延迟。柱状图表示同类 RT 预混液相对于 SuperScript V VILO 预混液的 Ct 延迟；对于所测试的基因，SuperScript V VILO 预混液的 Ct 值最多可提前 8 个循环。
稳健——即使对于低起始量、降解、高度结构化及含抑制剂的 RNA 样本，也均有出色表现（图 4 和图 5）。
图 4. 在常见 RT 抑制剂存在时仍保持稳健性能。在所有测试条件下，SuperScript V 反转录酶均持续获得最早的 Ct 值，显示出较强的抗抑制能力。
图 5. 对降解 RNA 样本仍保持可靠性能。使用降解的 REN RNA（RIN=3），比较 SuperScript V VILO 预混液与同类 RT 试剂盒的 Ct 值。SuperScript V VILO 预混液始终可获得最早的 Ct 值，表明即使 RNA 模板质量受损，也能高效合成 cDNA。
长片段 cDNA 合成——可转录合成长达 20 kb 的cDNA（图 6）。
图 6. 可合成长达 20 kb 的 cDNA。对小鼠心脏 RNA 生成的 RT-PCR 产物进行琼脂糖凝胶分析。SuperScript V 产品可高效合成并扩增接近 20 kb 的全长 cDNA。
热稳定性——在 37°C - 65°C 的温度范围内，使用 Millennium RNA Markers 作为模板可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。
图 7. SuperScript V 反转录酶可在较宽温度范围内合成长靶标片段。
便捷操作
简化的 cDNA 合成流程，反应快速，支持在室温下配制反应体系；同时提供更灵活的实验流程，包括减少操作步骤，并提升已配制反应体系的稳定性。
- 流程简短
- 反应快速
- 室温配制
- 灵活安排实验时间
11 分钟即可完成 cDNA 合成（图 8）。
图 8. 精简的实验流程缩短了反转录时间并简化了操作。包含 gDNA 去除步骤的 cDNA 合成流程仅需 13 分钟。
孵育时间可根据转录本长度灵活调整。较短的孵育时间可简化操作流程：无需进行引物退火，热灭活时间也可缩短至 1 分钟。（图 9 和图 10）。
图 9. 快速 cDNA 合成，仅需 30 秒即可检测到靶标。在所有时间点均观察到高效 cDNA 合成；即使反转录仅进行 30 秒，也能清晰检测到 0.5 kb 片段。
图 10. 缩短反应时间仍可实现可靠的靶标检测。使用 10 ng 总 RNA 对低丰度靶标 FZD6 进行 RT-qPCR 分析，结果表明，在较宽温度范围（37–65°C）及较短反转录孵育时间（1–10 分钟）下，均可实现稳定一致的 cDNA 合成。
反应体系可在室温下进行配制，无需冰浴或冷却架（图 11）。
图 11. 在室温与冷却架上进行反应体系配制的结果对比（适用于自动化流程）。将含有靶向 MYC 的 TaqMan Gene Expression Assay 的 SuperScript V VILO 预混液反应体系分别在室温下或冷却架上进行配制，并在配制过程中放置长达 45 分钟。后续 RT-qPCR 分析显示，两种配制条件下的 Ct 值相近。
已配制的反应体系在室温下可稳定放置 24 小时。
图 12. 在较宽的 RNA 起始量范围内，无论反应体系立即进行反转录，还是在反转录前于室温放置，RT-PCR 产物产量均保持稳定。
出色稳定性
在室温下具有更高稳定性，使运输和储存更加灵活，同时降低对冷链条件的依赖。
- 常温运输——适合常温运输，可简化物流并减少对冷链运输的依赖（图 13 和图 14）。
- 室温储存——SuperScript V 反转录酶可在室温下保存长达 6 个月；SuperScript V VILO 预混液可在室温下保存长达 1 个月。
图 13. SuperScript V VILO 预混液在室温下保存至少一个月后，仍可保持稳定的 RT-qPCR 性能。与冷冻保存的对照组相比，高、中、低丰度靶标的 Ct 值均保持稳定。
图 14. SuperScript V 反转录酶在室温下储存 6 个月后，活性仍保持稳定。
订购信息
- 单酶
- 即用型预混液
- 即用型预混液（不含引物）
SuperScript V 反转录酶常见问题
SuperScript V Reverse Transcriptase products support first-strand cDNA synthesis workflows, including RT-qPCR, RT-PCR, gene expression analysis, RNA sequencing library preparation, and analysis of low-input or challenging RNA samples.
Yes. SuperScript V Reverse Transcriptase products are designed to generate high-quality cDNA suitable for sensitive and reproducible qPCR analysis.
For maximal convenience, we recommend SuperScript V VILO Master mix format (Cat. No. 11800001) which provides reverse transcriptase, RNase inhibitor, buffer, MgCl₂, dNTPs, and an optimized blend of oligo (dT) and random primers in a single formulation, optimized for two-step RT-qPCR applications.
cDNA prepared using SuperScript V Reverse Transcriptase products is compatible with most commercially available qPCR master mixes. However, for optimal performance the following reagents are recommended:
- TaqMan system: TaqMan Fast Advanced qPCR Master Mix.
- SYBR Green system: PowerTrack SYBR Green qPCR Master Mix
SuperScript V Reverse Transcriptase products support reverse transcription in as little as 1–10 min depending on the workflow and target abundance. For most applications, we recommend a 10 min reverse transcription incubation step.
SuperScript V Reverse Transcriptase products include a room-temperature reaction control feature that helps suppress reverse transcription activity during reaction setup. This feature allows assembled reactions to remain stable at room temperature before incubation.
Yes. SuperScript V Reverse Transcriptase products are designed to support ambient shipping conditions, which may reduce reliance on dry ice or other cold-chain shipping methods.
资源
仅限科研用途。不得用于诊断程序。