iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统 | Thermo Fisher Scientific

灵活的规格，只需更少的一抗用量，重复性更好的结果

Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统采用灵活的印迹处理方法，可助您显著缩短操作时间，检测不同规格的印迹膜，并轻松优化抗体用量。该系统利用顺序侧流技术, （毛细管作用的一种简单形式），可自动化完成Western Blot实验中所有的抗体孵育和洗涤步骤，您只需将一抗、二抗溶液和洗涤缓冲液加入到设备中，设备即可自动进行相关操作。在3小时内，就能得到可立即用于最终检测的印迹膜。iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统在带来灵活的解决方案的同时，也兼顾了自动化的便捷性。

灵活性—可处理1张中型印迹膜、2张微型印迹膜或6张垂直剪切膜条，并可在一次实验的不同膜上采用不同的抗体
兼容性—可使用硝酸纤维素膜或PVDF膜，可用直接标记的一抗或二抗进行检测（AP、HRP或荧光标记）
节约成本—用于蛋白质免疫印迹时，比传统孵育方式最多可节省80%的一抗

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灵活的规格

iBind Flex系统具有可自行更换的加液插槽，能够处理多种规格的膜，甚至可在一台设备中同时孵育不同的一抗和二抗。

中型印迹膜

使用相同的抗体条件

微型印迹膜

使用相同或不同的抗体条件

垂直剪切膜条

使用相同或不同的抗体条件

与手动处理的蛋白质免疫印迹相比，能获得同样甚至更好的结果

对比手动处理和iBind Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Invitrogen™ NuPAGE™ 4-12%、20孔凝胶在MOPS SDS电泳缓冲液中分离含有GST标签重组蛋白的样本，随后，使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。使用相同浓度的同一个一抗和二抗对印迹膜进行检测。一抗为兔抗GST抗体，按1:500稀释（用于iBind系统时，将8 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液；用于手动孵育盒操作时，将40 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液）。二抗为山羊抗兔HRP抗体，按1:600稀释（用于iBind系统时，将6.7 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液；用于手动孵育盒操作时，将33.3 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液）。最终检测时，将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟，并使用成像系统拍照。

泳道 1-5: IKK beta (80 ng, 40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng)
泳道 6-10: DDR2 (120 ng, 60 ng, 30 ng, 15 ng, 7.5 ng)
泳道 11-15: FLT1 (40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng)
泳道 16-20: HCK (360 ng, 180 ng, 90 ng, 45 ng, 22.5 ng)

只需更少的一抗，就能获得更好的蛋白质免疫印迹结果。对比手动处理（在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤）和Invitrogen™ iBind™ Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本，随后，使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。每块凝胶具有10个泳道，样本为2倍梯度稀释的293细胞提取物（30 µg-0.06 µg）。使用下述条件进行抗体孵育和洗涤后，将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟，并使用成像系统显色。

MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗体，按1:1000 稀释（用于iBind系统：将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中，用于手动孵育盒操作时，将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中）。
Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗体，按1:1000 稀释（用于iBind系统：将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中，用于手动孵育盒操作时，将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中）。
二抗：山羊抗兔IgG，使用iBind系统，按1:600稀释（3.33 µL抗体溶于2mL iBind溶液中），用于手动孵育盒操作时，按1:1800稀释（将5.55 µL抗体溶于10mL iBind溶液中）。

使用垂直剪切膜条和荧光检测都获得了出众的蛋白质免疫印迹结果。 对比手动处理（在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤）和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统处理的印迹膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本，随后，使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上，将每张印迹膜剪切成3泳道膜条。最后，使用Odyssey™ CLx仪器 (LI-COR™ Inc)进行成像。

样本和泳道如下所示：

泳道 1: Thermo Scientific™ PageRuler™预染NIR蛋白分子量标记(3 µL)
膜条 1: 磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）和Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
膜条 2: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
膜条 3: 磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）
膜条 4: Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
膜条 5: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
膜条 6: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）

检测和抗体使用浓度如下：

膜条编号	一抗	一抗用量手动处理	一抗用量 iBind Flex	二抗	二抗用量手动处理	二抗用量 iBind Flex
1	磷酸化Akt（红）磷酸化Elk-1（绿）	1:2000 1:1000	1:400 1:200	IRDye 680LT IRDye 800CW	1:20,000 1:15,000	1:4000 1:3000
2	SRC（红） β-Catenin（绿）	1:250 1:1000	1:50 1:200	IRDye 680LT IRDye 800CW	1:20,000 1:15,000	1:4000 1:3000
3	磷酸化Akt	1:2000	1:400	IRDye 680LT	1:20,000	1:4000
4	磷酸化Elk-1	1:1000	1:200	IRDye 800CW	1:15,000	1:3000
5	SRC	1:250	1:50	IRDye 680LT	1:20,000	1:4000
6	beta Catenin	1:250	1:200	IRDye 800CW	1:15,000	1:3000

蛋白质免疫印迹处理完毕后，使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。

中型印迹膜结果

微型印迹膜结果

MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗体，按1:1000 稀释（用于iBind系统：将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中，用于手动孵育盒操作时，将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中）。
Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗体，按1:1000 稀释（用于iBind系统：将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中，用于手动孵育盒操作时，将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中）。
二抗：山羊抗兔IgG，使用iBind系统，按1:600稀释（3.33 µL抗体溶于2mL iBind溶液中），用于手动孵育盒操作时，按1:1800稀释（将5.55 µL抗体溶于10mL iBind溶液中）。

垂直剪切膜条

样本和泳道如下所示：

泳道 1: Thermo Scientific™ PageRuler™预染NIR蛋白分子量标记(3 µL)
膜条 1: 磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）和Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
膜条 2: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
膜条 3: 磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）
膜条 4: Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
膜条 5: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
膜条 6: HeLa细胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）

检测和抗体使用浓度如下：

膜条编号	一抗	一抗用量手动处理	一抗用量 iBind Flex	二抗	二抗用量手动处理	二抗用量 iBind Flex
1	磷酸化Akt（红）磷酸化Elk-1（绿）	1:2000 1:1000	1:400 1:200	IRDye 680LT IRDye 800CW	1:20,000 1:15,000	1:4000 1:3000
2	SRC（红） β-Catenin（绿）	1:250 1:1000	1:50 1:200	IRDye 680LT IRDye 800CW	1:20,000 1:15,000	1:4000 1:3000
3	磷酸化Akt	1:2000	1:400	IRDye 680LT	1:20,000	1:4000
4	磷酸化Elk-1	1:1000	1:200	IRDye 800CW	1:15,000	1:3000
5	SRC	1:250	1:50	IRDye 680LT	1:20,000	1:4000
6	beta Catenin	1:250	1:200	IRDye 800CW	1:15,000	1:3000

蛋白质免疫印迹处理完毕后，使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。

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开始使用更简单、更优雅的蛋白质免疫印迹处理。iBind™ Flex起始套装包括iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统、iBind™ Flex卡片和溶液试剂盒，方便您立即开始您的实验：

iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统
iBind™ Flex卡片（1盒10张）
iBind™ Flex溶液试剂盒（备注：荧光检测需要荧光检测(FD) 溶液试剂盒）

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二抗样品

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货号 #	名称	单位规格
A16104	山羊抗兔 IgG (H+L) 抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记，交叉吸附处理处理	1 mg
A16072	山羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体，辣根过氧化物酶 (HRP) 标记，交叉吸附处理 1 mg	1 mg
A16110	山羊抗兔 IgG (H+L) 抗体，辣根过氧化物酶 (HRP) 标记，高度交叉吸附处理1 mg	1 mg
A16078	山羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体，辣根过氧化物酶 (HRP) 标记，高度交叉吸附处理 1 mg	1 mg
A11357	Alexa Fluor 790 山羊抗小鼠 IgG (H+L)，高度交叉吸附处理 0.5 mL	0.5 mL
A21058	Alexa Fluor 680 山羊抗小鼠 IgG (H+L)，高度交叉吸附处理 0.5 mL	0.5 mL
A11369	Alexa Fluor 790 山羊抗兔 IgG (H+L)，高度交叉吸附处理 0.5 mL	0.5 mL
A21109	Alexa Fluor 680 山羊抗兔 IgG (H+L)，高度交叉吸附处理 0.5 mL	0.5 mL

仅供科研使用，不可用于诊断目的。