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| 应用 | 建议纯化方法（保证最小纯度） |
|---|---|
常规PCR/RT-PCR | 脱盐 |
测序 | 脱盐 |
RT-PCR的第一条链cDNA合成 | 脱盐 |
PCR,引物的关键在于5'序列 (如限制性酶切位点) | 高亲和纯化/TON纯化 |
指定位点突变 | 高亲和纯化/TON纯化 |
合成文库时的第一条链cDNA合成 | 高亲和纯化/TON纯化 |
克隆接头的产生 | 高亲和纯化/TON纯化 |
凝胶迁移分析 | 高亲和纯化/TON纯化 |
GeneTrapper筛选 | PAGE |
PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等 | PAGE |
全基因合成 | 建议用PAGE,熟悉后再考虑试用其他纯化方式 |
| 纯化方法 | 描述优点 |
|---|---|
脱盐(DSL) | 通过在高纯氨气水蒸汽混合物的气相氨解环境下将连接在CPG上的引物切割洗脱下来， 能有效地去除盐分，但不能有效去除比目的片段短的小片段 。毛细管电泳（Capillary Electrophoresis）纯度大于45%。 |
高亲和纯化/TON纯化 | 基于特异和反相层析法，从合成好的产物中去除失败序列，提供最终的目标序列。适于35个碱基以下的引物。毛细管电泳（Capillary Electrophoresis）纯度大于75%。 |
聚丙烯酰胺电泳(PAGE) | 利用不同长度序列DNA在凝胶中迁移率不同来分离目标序列和失败序列，从而提供高纯度的目标引物。 对长链Oligo DNA (大于40 mer)的纯化特别有效。 毛细管电泳（Capillary Electrophoresis）纯度大于85%。 |
高效液相(HPLC) | 高效液相（HPLC）利用DNA片段大小和带电电荷的不同来分离纯化引物，是一种广泛使用且非常有效的纯化方式，能达到很高的纯度和灵敏度，特别适合40个碱基以下的引物，毛细管电泳（Capillary Electrophoresis）纯度大于85%。 |