用于免疫沉淀的 Dynabeads™ 蛋白 A
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用于免疫沉淀的 Dynabeads™ 蛋白 A
引用和文献 (10)
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用于免疫沉淀的 Dynabeads™ 蛋白 A

Dynabeads 蛋白 A 为表面共价偶联有重组蛋白 A （∼45 kDa）的 2.8了解更多信息
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Dynabeads 蛋白 A 为表面共价偶联有重组蛋白 A （∼45 kDa）的 2.8 µm 均匀超顺磁性微珠。Dynabeads 蛋白 A 为免疫沉淀（IP）提供了可替代 Sepharose 树脂或琼脂糖树脂的出色替代产品，手动和自动方案均可用。

•在不到40分钟内完成 IP
• 高靶蛋白得率和低抗体消耗
• 极低非特异性结合及高信噪比
• 无需色谱柱、离心步骤或耗时的预清洗步骤
•高重现性和高通量与 KingFisher 仪器兼容

可快速且简便的进行手动 Dynabeads 分离
手动方案简单且可在40分钟内完成。首先，将靶蛋白的抗体与 Dynabeads 蛋白 A 在试管中孵育 10 分钟。通过将试管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液，洗去过量抗体。然后，抗体包被磁珠可用于多种下游应用，包括 IP、Co-IP、染色质 IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小规模 IgG 纯化和蛋白纯化。由于 Dynabeads 的独特磁性，使用 DynaMag 磁力架可轻松收集结合材料。微珠上的重组蛋白 A 不含白蛋白结合位点，因此在程序中不会共纯化白蛋白。IP 速度快，并且具有高得率、高重现性且非特异性结合极少，因此无需预清洗步骤。

自动 Dynabeads 分离有助于提高通量并缩短手动操作时间
如果您并行处理多份样品，洗涤步骤数量和手动操作时间会与样品数量成比例地增加。一次处理多个样品时，移液管及其他手动操作获得的结果往往不如自动化。为了更好地处理中等至高通量的样品，减少手动操作时间并确保可重现性较高，我们开发了适用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 仪器的 IP 方案。自动化方案复制人工方案，从而获得同样高的靶蛋白产率以及相同的低非特异性结合和高可重现性。无论您要处理 10 个还是 96 个样品，IP 方案可在 40 分钟内完成。’只需将试剂加载到孔板上，按下“开始”按钮，到您准备好下游分析时，IP 即可完成。根据抗体和靶蛋白的丰度和/或特异性，可能需要进行一些优化（例如，孵育时间）。

•KingFisher Duo 仪器适用于低至中通量（1-12 份样品/运行）
•KingFisher Flex 仪器适用于高通量（12-96 份样品/运行）
参见自动方案
观看有关 KingFisher Flex 的视频

温和分离可尽可能减小对蛋白的物理应力
用于 Dynabeads 蛋白 A 的磁性分离技术快速且温和，可尽可能减小对靶蛋白的物理应力。这允许分离和浓缩不稳定的复合物，否则在长时间孵育期间可能会被蛋白酶解离或被其破坏。保存天然蛋白构象和大蛋白复合物。

结合强度和结合能力
Dynabeads 蛋白质 A 可以分离大多数哺乳动物的免疫球蛋白（Ig）。捕获的 Ig 量取决于起始样品中 Ig 的浓度以及 Ig 的类型和来源。100µL Dynabeads 蛋白 A 将从每毫升含有 20–200µg IgG 的样品中分离出约 25–30 µg 人 IgG。绝大部分位点与 Fc 结合，实现优化的 Ig 取向。抗体与微珠的光滑外表面结合，因而不会像与基于 Sepharose/琼脂糖的微珠结合时一样吸附在大孔中。所有抗体都可用于蛋白结合，因此，仅需加入少量抗体，靶蛋白得率依旧很高。光滑磁珠表面也实现了 Dynabeads 出色的低非特异性结合能力。

了解有关 Dynabeads 的更多信息
• Dynabeads 蛋白 A 也可用于内含缓冲液的“即用型”试剂盒
• 请参阅免疫沉淀选择指南、数据和参考文献
• 请参阅用于 Dynabeads 分离的磁力架
• 查找适用于其它应用的 Dynabeads 产品

OEM 采购
如需以 OEM 形式采购 Dynabeads 蛋白 A 和蛋白 G 产品，请联系我们对外授权的销售部门和 OEM 销售部门。

*Sepharose 是 GE Healthcare Bio-Sciences AB 公司的商标。

仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
认证/合规ISO9001 和 ISO13485
最大浓度30 mg/mL
描述Recombinant Protein A covalently bound to Dynabeads
直径（公制）2.8 μm
适用于（应用）免疫沉淀
适用于（设备）KingFisher™ Duo Prime、KingFisher™ Flex
产品规格悬浮磁珠
高通量能力兼容高通量应用
配基类型蛋白 A
材料Polystyrene
纯度或质量等级For Research Use Only
数量1 mL
有效期自生产之日起 24 个月
运输条件室温
足够用于20 Tests
表面功能基团Protein A
靶标Antibodies
均一性Monosized 2.8 mm (CV <5%)
产品线Dynabeads
类型蛋白 A 超顺磁性微珠
Unit SizeEach
内容与储存
包含：1 mL Dynabeads™ 蛋白 A
储存：2°C 至 8°C。

常见问题解答 (FAQ)

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上，对此你们有什么建议吗？

请查看以下可能原因：

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议：
•延长分离时间（将管子留在磁力架上2-5分钟）。
•向裂解液中加入DNase I（约0.01 mg/mL）。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

我想要分离较长的双链DNA片段，你们有什么产品可以推荐？

对于小于1 kb的生物素标记DNA，我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子，我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液，可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html)，查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。

我能否使用Dynabeads磁珠分离单链DNA模板？

可以，Dynabeads磁珠可用于分离单链DNA。链霉亲和素Dynabeads磁珠能够以生物素化的DNA片段为靶标，通过使双链DNA变性，从而去除非生物素化链。链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠不会抑制任何酶活性。因此，可以在固相上直接对磁珠结合的DNA进行下一步处理。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/preparing-single-stranded-dna-templates.html)，查看关于单链DNA捕获的更多信息。

什么是磁化率？

磁化率能够衡量磁珠向磁力架迁移的速度，其大小取决于铁含量和氧化铁的特性。Dynabeads磁珠的磁化率是指质量磁化率，单位可以是cgs单位/g或m^3/kg（国际单位制）。对于亚铁磁性和铁磁性物质，质量磁化率取决于磁场强度（H），这些物质的磁化强度与H不是线性关系，而是随着场强增加而趋于饱和。因此， Dynabeads磁珠的质量磁化率是在固定条件下由标准操作程序而测定的。我们产品目录中给出的质量磁化率是国际单位制。磁化率由从高斯（cgs、emu）单位向国际单位的转换，是通过“高斯系数（emu/g或cgs/g）x 4π x 10^-3”而实现的。所得单位也被称为合理化质量磁化率，与（国际单位制）无量纲磁化率单位有所区别。通常，质量磁化率可用来衡量在非均匀磁场中影响物体的力（Fz）。测定Dynabeads磁珠的质量磁化率时，首先对样本称重，然后将样本放置于已知强度的磁场中。随后，再次称重得到样本重量（F1），并与关闭磁场时样本的重量（F0）进行对比。使用下述公式计算磁化率：K x 10^–3 = [(F1-F0) x m x 0.335 x 10^6]，K表示质量为m的样本的质量磁化率。最后，将磁化率转换为国际单位制。

我如何确定Dynabeads磁珠的偶联效率？

有多种不同的方法可以检测配体与磁珠结合，包括光密度（OD）检测、荧光标记和放射性标记。

对于OD检测，应在配体固定到磁珠上之前检测配体的OD值，并将其与包被后上清液中剩余的配体浓度进行比较。这样可以粗略检测有多少蛋白与磁珠结合。 实验方案： 1.将分光光度计设置到正确的波长。使用偶联缓冲液作为空白组。 2.检测偶联前溶液的吸光值。根据配体的加入量，可能需要进一步稀释以读取吸光值。 3.检测偶联后溶液的吸光值。也可能需要进一步稀释以读取吸光值。 4.计算偶联效率，以“蛋白质摄取量%”表示，如下所示：[(偶联前溶液的吸光值x D) – (偶联后溶液的吸光值x D)] x 100/(偶联前溶液的吸光值 x D)，D = 稀释倍数。 对于荧光标记，我们建议对配体结合量进行反向定量，即检测偶联上清液中剩余的配体量（与原始样本对比），而不是直接检测磁珠上的配体量。将标记的配体加入到磁珠中，并检测上清液中剩余多少配体（而不是结合到磁珠上的配体）。通过与开始时加入的总配体量相比，可以计算出结合到磁珠上的配体量。由于Dynabeads磁珠具有自发荧光，因此，我们不推荐直接检测与磁珠结合的配体的荧光，而是推荐这种间接方法。标记物可以是FITC/PE等。有些研究人员也成功使用了直接检测方法（采用流式细胞仪）。 在3种方法中，放射标记的灵敏度最高，但难度最大。该方法涉及到对配体的一部分进行放射性标记。在偶联前，使用示踪剂量的放射性标记的I-125，将其以一定比例与“冷”配体混合。使用闪烁（γ）计数器对磁珠进行检测，并将磁珠的cpm值与标准品对比，得到磁珠上配体的绝对量。 实验方案： 1.取出适量磁珠，并使用1 mL结合缓冲液清洗。 2.吸取适量人IgG，置于一个单独的管子中。 3.将人IgG与I-125标记的人IgG（30,000–100,000 cpm）混合。 4.使用结合缓冲液将人IgG与I-125标记的人IgG混合物稀释至100mL。 5.室温下孵育30分钟，使用闪烁计数器检测cpm值。 6.清洗磁珠（和包被层）4次，再次检测cpm值。 使用下述方程计算结合率%：（清洗后cpm值/清洗前cpm值）x100%。

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引用和文献 (10)

引用和文献
Abstract
Nuclear tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 in lymphoid cells negatively regulates c-Myb-mediated transactivation through small ubiquitin-related modifier-1 modification.
Authors:Pham LV, Zhou HJ, Lin-Lee YC, Tamayo AT, Yoshimura LC, Fu L, Darnay BG, Ford RJ,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:18093978
'Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6) is an adaptor/scaffold protein that mediates several important signaling pathways, including the tumor necrosis factor-R:NF-kappaB pathway, involved in immune surveillance, inflammation, etc. Because most studies of TRAF6 function have focused primarily on its role as an adaptor molecule in signaling pathways in the ... More
The barrier-to-autointegration factor is a component of functional human immunodeficiency virus type 1 preintegration complexes.
Authors:Lin CW, Engelman A,
Journal:J Virol
PubMed ID:12663813
'Retroviral integration in vivo is mediated by preintegration complexes (PICs) derived from infectious virions. In addition to the integrase enzyme and cDNA substrate, PICs contain a variety of viral and host cell proteins. Whereas two different cell proteins, high-mobility group protein A1 (HMGA1) and the barrier-to-autointegration factor (BAF), were identified ... More
Constitutive expression of functionally active cyclin-dependent kinases and their binding partners suggests noncanonical functions of cell cycle regulators in differentiated neurons.
Authors:Schmetsdorf S, Gärtner U, Arendt T,
Journal:Cereb Cortex
PubMed ID:17050646
'Neurodegeneration in Alzheimer''s disease and various experimental lesion paradigms are associated with an unscheduled upregulation of cell cycle-related proteins, indicating a link between cell cycle reactivation and neuronal death. Recent evidence, however, suggests that at least some of the canonical cell cycle regulators are constitutively expressed in differentiated neurons of ... More
A DOUBLETIME kinase binding domain on the Drosophila PERIOD protein is essential for its hyperphosphorylation, transcriptional repression, and circadian clock function.
Authors:Kim EY, Ko HW, Yu W, Hardin PE, Edery I,
Journal:Mol Cell Biol
PubMed ID:17452449
'A common feature of animal circadian clocks is the progressive phosphorylation of PERIOD (PER) proteins from hypo- to hyperphosphorylated species, events that are highly dependent on casein kinase 1 epsilon (termed DOUBLETIME [DBT] in Drosophila melanogaster) and necessary for normal clock progression. Drosophila PER (dPER) functions in the negative limb ... More
Parallel activation of phosphatidylinositol 4-kinase and phospholipase C by the extracellular calcium-sensing receptor.
Authors:Huang C, Handlogten ME, Miller RT,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11907035
'The calcium-sensing receptor (CaR) is a G protein-coupled receptor that regulates physiological processes including Ca(2+) metabolism, Na(+), Cl(-), K(+), and H(2)0 balance, and the growth of some epithelial cells through diverse signaling pathways. Although many effects of CaR are mediated by the heterotrimeric G proteins Galpha(q) and Galpha(i), not all ... More
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