Bac-to-Bac™ 杆状病毒表达系统
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Bac-to-Bac™ 杆状病毒表达系统
Gibco™

Bac-to-Bac™ 杆状病毒表达系统

Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性:•节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体表达盒与 DH10Bac 大肠杆菌感受态细胞中的亲本杆状病毒质粒重组,以形成表达杆状病毒质粒。然后,杆状病毒质粒转染到昆虫细胞中以生成重组杆状病毒颗粒了解更多信息
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Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性:

节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体表达盒与 DH10Bac 大肠杆菌感受态细胞中的亲本杆状病毒质粒重组,以形成表达杆状病毒质粒。然后,杆状病毒质粒转染到昆虫细胞中以生成重组杆状病毒颗粒。

简单的菌落筛选—DH10Bac 大肠杆菌中的亲本杆状病毒质粒包含 lacZa 基因片段。lacZa 基因在将表达盒转位为杆状病毒质粒的过程中被破坏,以实现重组体的蓝白斑筛选,从而容易识别重组菌落。

ExpiFectamine Sf 转染试剂提供高转染效率—Bac-to-Bac TOPO 表达试剂盒现在提供有新一代 ExpiFectamine Sf 转染试剂,可使用快速且灵活的实验方案对昆虫细胞进行高效的 DNA 转染。了解有关该试剂的更多信息›

灵活性—Bac-to-Bac 系统附带包含一个大型多克隆位点 (MCS) 的 pFastBac 载体,可简化克隆。其他两种载体形式单独提供:pFastBac HT 载体用于生成组氨酸标记的重组蛋白,pFastBac Dual 载体用于使用 p10 和多角体蛋白启动子同时表达两种蛋白。

高蛋白表达—pFastBac 载体使用强多角体蛋白启动子在各种昆虫细胞系(如 Sf9、Sf21 和 High Five 细胞)中生成高表达水平。

仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
产品类型杆状病毒表达系统
数量1 kit
载体pFastBac
克隆方法限制性内切酶/MCS
产品线Bac-to-Bac
促进剂多角体蛋白
蛋白标记未标记
Unit SizeEach
内容与储存
每个 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统包含:
• pFastBac1 载体 (10 μg),在 -20°C 下储存
• pFastBac 1-Gus 对照载体 (4 ng),在 -20°C 下储存
• MAX Efficiency DH10Bac 化学感受态大肠杆菌(1 个试剂盒含 5 x 0.1 mL),在 -80°C 下储存
• ExpiFectamine Sf 转染试剂 (1 mL),在 4°C 下储存,请勿冷冻

常见问题解答 (FAQ)

白色菌落不能在液体培养基中生长。我该怎么办?

庆大霉素浓度可能过高。尝试降低庆大霉素的浓度至5 µg/mL,并在培养基中加入更多菌落。

为什么会出现蓝色菌落?为什么会出现中心为蓝色而边缘为白色的菌落?

若出现蓝色菌落,则大肠杆菌含有杆粒和质粒,使细胞能在筛选过程中存活。但是,由于未发生转座,所以LacZ基因未被破坏。靶心菌落表示在菌落生长时发生转座。将从混合克隆白色部分中分离得到的克隆重新划线,应该能够得到发生过转座的菌落。

我得到的主要是白色/野生型空斑,而不是蓝色/重组型空斑。哪里出错了?

这是同源性重组较差的典型标志。应检查使用的质粒/线性DNA比例。但是,如果存在一些蓝色空斑,则对那些病毒进行扩增并检测它们的蛋白。根据我们的经验,它们应该是正确的,即使其丰度相对较低。

感染细胞后,我在一个细胞中看到较大的多角体,而在相邻细胞中看到较小的多角体(数量更多)。这正常吗?

是的,细胞被单个野生型病毒感染后,会以不同速度生成多角体,直到培养瓶中所有的细胞都被感染。细胞中多角体的形成需要3-4天左右,其大小和数量各不相同,直至达到最大能力并发生细胞破裂,从而将微小的病毒颗粒释放到培养基中。

我担心得不到空斑。出现空斑需要几天?空斑通常为多大?

正常情况下,约5-7天会出现很小的白点,约10天出现1 mm空斑。空斑的大小范围为1 mm至4 mm。

引用和文献 (66)

引用和文献
Abstract
The vomeronasal receptor V2R2 does not require escort molecules for expression in heterologous systems.
Authors:Silvotti L, Giannini G, Tirindelli R,
Journal:Chem Senses
PubMed ID:15647459
'In rodents, many behavioural responses are triggered by pheromones. These molecules are believed to bind and activate two families of G-protein coupled receptors, namely V1Rs and V2Rs, which are specifically expressed in the chemosensory neurons of the vomeronasal organ. V2Rs are homologous with Group 3 of G-protein-coupled receptors, which includes ... More
Identification of Novel SH3 Domain Ligands for the Src Family Kinase Hck. WISKOTT-ALDRICH SYNDROME PROTEIN (WASP), WASP-INTERACTING PROTEIN (WIP), AND ELMO1.
Authors: Scott Margaret Porter; Zappacosta Francesca; Kim Eun Young; Annan Roland S; Miller W Todd;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12029088
'The importance of the SH3 domain of Hck in kinase regulation, substrate phosphorylation, and ligand binding has been established. However, few in vivo ligands are known for the SH3 domain of Hck. In this study, we used mass spectrometry to identify approximately 25 potential binding partners for the SH3 domain ... More
Allocation of helper T-cell epitope immunodominance according to three-dimensional structure in the human immunodeficiency virus type I envelope glycoprotein gp120.
Authors: Dai G; Steede N K; Landry S J;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11551929
'The specificity and intensity of CD4(+) helper T-cell responses determine the effectiveness of immune effector functions. Promiscuously immunodominant helper T-cell epitopes in the human immunodeficiency virus (HIV) envelope glycoprotein gp120 could be important in the development of broadly protective immunity, but the underlying mechanisms of immunodominance and promiscuity remain poorly ... More
Expression, purification, and characterization of an activated cytokine-suppressive anti-inflammatory drug-binding protein 2 (CSBP2) kinase from baculovirus-infected insect cells.
Authors: Cai X Y; Shanahan M; Miller K; Gommoll C; Lundell D; Zavodny P; Dalie B;
Journal:Protein Expr Purif
PubMed ID:9226723
'An activated form of the human cytokine-suppressive anti-inflammatory drug-binding protein 2 (CSBP2) kinase was expressed in Spodoptera frugiperda (SF9) cells from a baculovirus vector. To maximize expression and to facilitate purification of the recombinant protein, CSBP2 kinase was expressed as a carboxy-terminal fusion protein to glutathione S-transferase (GST). Under optimal ... More
Kinesin Superfamily Motor Protein KIF17 and mLin-10 in NMDA Receptor-Containing Vesicle Transport
Authors:Mitsutoshi Setou, Terunaga Nakagawa, Dae-Hyun Seog, Nobutaka Hirokawa *
Journal:Science
PubMed ID:10846156
'Experiments with vesicles containing N-methyl-D-aspartate (NMDA)receptor 2B (NR2B subunit) show that they are transported alongmicrotubules by KIF17, a neuron-specific molecular motor in neuronaldendrites. Selective transport is accomplished by direct interaction of theKIF17 tail with a PDZ domain of mLin-10 (Mint1/X11), which is aconstituent of a large protein complex including mLin-2 ... More