Dynabeads™ M-450 Tosylactivated
Invitrogen17万+抗体限时买二赠一,靶点广,灵活用!
Dynabeads™ M-450 Tosylactivated
Invitrogen™

Dynabeads™ M-450 Tosylactivated

Dynabeads™ M-450 Tosylactivated 为 4.5 µm 超顺磁性微珠,含有表面 Tosyl 基团。微珠与抗体中的伯胺和巯基基团共价结合,将其定位在适合细胞表面蛋白结合的较佳方位了解更多信息
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Dynabeads™ M-450 Tosylactivated 为 4.5 µm 超顺磁性微珠,含有表面 Tosyl 基团。微珠与抗体中的伯胺和巯基基团共价结合,将其定位在适合细胞表面蛋白结合的较佳方位。当不需要从磁珠上下游释放时,抗体的低背景和共价结合使微珠成为细胞分离应用的极佳之选。

•快速去除细胞或阳性分离靶细胞用于下游分子分析
•非常适合使用您自己的独特抗体进行细胞分离程序
•多种抗体可以偶联在同一微珠上,用于非细胞应用(例如细胞活化)

偶联程序
通过与 Dynabeads™ M-450 Tosylactivated 微珠一起孵育首选抗体,可在一夜之间完成共价偶联。较佳偶联发生在高 pH 值(8.5–9.5)和 37°C 条件下。对于 pH 不稳定抗体,可在 pH 7.4 的替代缓冲液中进行偶联。

不推荐用于免疫沉淀(IP)
不推荐用于 IP,因为与 1 µm 和 2.8 µm Tosylactivate 和环氧树脂 Dynabeads™ 相比,这些 4.5µ m Tosylactivate 微珠的每单位质量表面容量更低。

了解关于 Dynabeads™ 产品的更多信息
•查找适用于多种应用的 Dynabeads™ 产品。
• 获取 磁力架进行 Dynabeads™ 分离。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细胞类型所有种属的所有细胞
分离技术用于分子应用的去除、阳性分离
池数量处理总计 ∼2 x 10^9 个细胞
输出可行性>95%
产品线DYNAL,Dynabeads
纯度或质量等级研究级
数量5 mL
反应性所有种属
样品类型PBMC,组织消化产物,血液
运输条件室温
原始材料细胞数量1 x 10^7 个细胞/分离
目标种属所有物种
直径(公制)4.5 μm
产品类型Tosylactivated 微珠
Unit SizeEach
内容与储存
包含:5 mL 微珠蒸馏水,浓度为 4 × 10^8 个微珠/mL。
储存:2°C 至 8°C。

常见问题解答 (FAQ)

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上,对此你们有什么建议吗?

请查看以下可能原因:

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议:
•延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。
•向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

我想要分离较长的双链DNA片段,你们有什么产品可以推荐?

对于小于1 kb的生物素标记DNA,我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子,我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液,可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html),查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。

我能否使用Dynabeads磁珠分离单链DNA模板?

可以,Dynabeads磁珠可用于分离单链DNA。链霉亲和素Dynabeads磁珠能够以生物素化的DNA片段为靶标,通过使双链DNA变性,从而去除非生物素化链。链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠不会抑制任何酶活性。因此,可以在固相上直接对磁珠结合的DNA进行下一步处理。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/preparing-single-stranded-dna-templates.html),查看关于单链DNA捕获的更多信息。

什么是磁化率?

磁化率能够衡量磁珠向磁力架迁移的速度,其大小取决于铁含量和氧化铁的特性。Dynabeads磁珠的磁化率是指质量磁化率,单位可以是cgs单位/g或m^3/kg(国际单位制)。对于亚铁磁性和铁磁性物质,质量磁化率取决于磁场强度(H),这些物质的磁化强度与H不是线性关系,而是随着场强增加而趋于饱和。因此, Dynabeads磁珠的质量磁化率是在固定条件下由标准操作程序而测定的。我们产品目录中给出的质量磁化率是国际单位制。磁化率由从高斯(cgs、emu)单位向国际单位的转换,是通过“高斯系数(emu/g或cgs/g)x 4π x 10^-3”而实现的。所得单位也被称为合理化质量磁化率,与(国际单位制)无量纲磁化率单位有所区别。通常,质量磁化率可用来衡量在非均匀磁场中影响物体的力(Fz)。测定Dynabeads磁珠的质量磁化率时,首先对样本称重,然后将样本放置于已知强度的磁场中。随后,再次称重得到样本重量(F1),并与关闭磁场时样本的重量(F0)进行对比。使用下述公式计算磁化率:K x 10^–3 = [(F1-F0) x m x 0.335 x 10^6],K表示质量为m的样本的质量磁化率。最后,将磁化率转换为国际单位制。

我如何确定Dynabeads磁珠的偶联效率?

有多种不同的方法可以检测配体与磁珠结合,包括光密度(OD)检测、荧光标记和放射性标记。

对于OD检测,应在配体固定到磁珠上之前检测配体的OD值,并将其与包被后上清液中剩余的配体浓度进行比较。这样可以粗略检测有多少蛋白与磁珠结合。 实验方案: 1.将分光光度计设置到正确的波长。使用偶联缓冲液作为空白组。 2.检测偶联前溶液的吸光值。根据配体的加入量,可能需要进一步稀释以读取吸光值。 3.检测偶联后溶液的吸光值。也可能需要进一步稀释以读取吸光值。 4.计算偶联效率,以“蛋白质摄取量%”表示,如下所示:[(偶联前溶液的吸光值x D) – (偶联后溶液的吸光值x D)] x 100/(偶联前溶液的吸光值 x D),D = 稀释倍数。 对于荧光标记,我们建议对配体结合量进行反向定量,即检测偶联上清液中剩余的配体量(与原始样本对比),而不是直接检测磁珠上的配体量。将标记的配体加入到磁珠中,并检测上清液中剩余多少配体(而不是结合到磁珠上的配体)。通过与开始时加入的总配体量相比,可以计算出结合到磁珠上的配体量。由于Dynabeads磁珠具有自发荧光,因此,我们不推荐直接检测与磁珠结合的配体的荧光,而是推荐这种间接方法。标记物可以是FITC/PE等。有些研究人员也成功使用了直接检测方法(采用流式细胞仪)。 在3种方法中,放射标记的灵敏度最高,但难度最大。该方法涉及到对配体的一部分进行放射性标记。在偶联前,使用示踪剂量的放射性标记的I-125,将其以一定比例与“冷”配体混合。使用闪烁(γ)计数器对磁珠进行检测,并将磁珠的cpm值与标准品对比,得到磁珠上配体的绝对量。 实验方案: 1.取出适量磁珠,并使用1 mL结合缓冲液清洗。 2.吸取适量人IgG,置于一个单独的管子中。 3.将人IgG与I-125标记的人IgG(30,000–100,000 cpm)混合。 4.使用结合缓冲液将人IgG与I-125标记的人IgG混合物稀释至100mL。 5.室温下孵育30分钟,使用闪烁计数器检测cpm值。 6.清洗磁珠(和包被层)4次,再次检测cpm值。 使用下述方程计算结合率%:(清洗后cpm值/清洗前cpm值)x100%。

引用和文献 (6)

引用和文献
Abstract
Relation of the size and intracellular sorting of apoB to the formation of VLDL 1 and VLDL 2.
Authors:Stillemark-Billton P, Beck C, Borén J, Olofsson SO,
Journal:J Lipid Res
PubMed ID:15520448
'In this study, we tested the hypothesis that two separate pathways, the two-step process and an apolipoprotein B (apoB) size-dependent lipidation process, give rise to different lipoproteins. Expression of apoB-100 and C-terminally truncated forms of apoB-100 in McA-RH7777 cells demonstrated that VLDL particles can be assembled by apoB size-dependent linear ... More
Cell stiffness and receptors: evidence for cytoskeletal subnetworks.
Authors:Huang H, Sylvan J, Jonas M, Barresi R, So PT, Campbell KP, Lee RT,
Journal:Am J Physiol Cell Physiol
PubMed ID:15385268
'Viscoelastic models of cells often treat cells as homogeneous objects. However, studies have demonstrated that cellular properties are local and can change dramatically on the basis of the location probed. Because membrane receptors are linked in various ways to the intracellular space, with some receptors linking to the cytoskeleton and ... More
Isolation and characterization of microvessel endothelial cells from human mammary adipose tissue.
Authors:Hewett PW, Murray JC, Price EA, Watts ME, Woodcock M,
Journal:In Vitro Cell Dev Biol Anim
PubMed ID:7686548
A method for the isolation and long-term culture of human microvessel endothelial cells from mammary adipose tissue (HuMMEC) obtained at breast reduction surgery has been developed. Pure cultures of HuMMEC were isolated by sequential digestion of the fat with collagenase and trypsin followed by specific selection of microvessel fragments with ... More
Human lung microvessel endothelial cells: isolation, culture, and characterization.
Authors:Hewett PW, Murray JC,
Journal:Microvasc Res
PubMed ID:8412855
The pulmonary vasculature is of great physiological/pathological significance. We have isolated and cultured microvessel endothelial cells (HuLEC) from lung tissue obtained from lung transplant recipients by modification of published methods. Pure cultures of HuLEC were isolated by mechanical disaggregation of the tissue prior to sequential dispase and trypsin digestion to ... More
Expansion of functional endogenous antigen-specific CD4+CD25+ regulatory T cells from nonobese diabetic mice.
Authors:Masteller EL, Warner MR, Tang Q, Tarbell KV, McDevitt H, Bluestone JA,
Journal:J Immunol
PubMed ID:16116193
CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (T(reg)) are critical for controlling autoimmunity. Evidence suggests that T(reg) development, peripheral maintenance, and suppressive function are dependent on Ag specificity. However, there is little direct evidence that the T(reg) responsible for controlling autoimmunity in NOD mice or other natural settings are Ag specific. In fact, ... More