EZ-Link™ 胺-PEG4-脱硫生物素，No-Weigh™ 规格

Thermo Scientific EZ-Link 胺-PEG4-脱硫生物素是一种聚乙二醇化胺化合物，其生物素样基团可从链霉素亲和素中洗脱，因此适用于碳二亚胺 (EDC) 与羧酸盐偶联进行标记和纯化。

EZ-Link 胺-PEG4-脱硫生物素 No-Weigh 规格的特点：

•脱硫生物素—生物素类似物可以很容易地从链霉素亲和素中洗脱，这是亲和纯化应用的理想特点
•胺活化—可使用 EDC 和其他交联剂使伯胺与蛋白和材料表面交联
•聚乙二醇化—间隔臂中聚乙二醇 (PEG) 基团可增强生物素化分子的水溶性

该脱硫生物素化合物是生物素的胺修饰类似物，含 4 单元聚乙二醇 (PEG) 间隔臂。采用碳二亚胺交联剂 EDC（产品编号 22980）将伯胺与表面材料、肽类或蛋白上的羧基基团偶联，实现脱硫生物素化。EDC 可激活羧基基团，结合至氨基-生物素的 –NH2 基团，形成酰胺键。脱硫生物素标签与链霉素亲和素和其他生物素结合蛋白结合，具有高特异性但容易在温和的条件下洗脱（即，方式为被常规的游离生物素竞争性置换）。因此，该试剂是用于亲和素-生物素技术的胺-PEG3-生物素（产品编号 21347）的一种有用替代品，在该技术中需要对标记蛋白进行非变性洗脱。No-Weigh 规格（5 x 1 mg 可重复密封小瓶）消除了称取少量试剂的困难，并尽可能地保护未使用试剂免于发生降解。

脱硫生物素与生物素
脱硫生物素是一种单环、无硫的生物素类似物，与链霉素亲和素结合的特异性与生物素几乎相同，但亲和力低于生物素（分别为 1/Kd = 10^11 vs. 10^15M）[1-2]。因此，基于与游离生物素的竞争性置换，可以使用温和的条件，从链霉素亲和素亲和树脂中很容易且具有特异性地将脱硫生物素化诱饵蛋白及其相互作用配偶体洗脱出来。对于使用生物样品进行的沉降检测实验，脱硫生物素的这种软释放特点也有助于尽可能减少内源性生物素化分子的共纯化，在洗脱靶蛋白复合物与游离生物素时这些分子仍与链霉素亲和素结合。通过经修饰亲和素-生物素亲和系统，也无需使用可能分离复合物和/或破坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件。脱硫生物素技术是使用不表达融合标签的天然或重组蛋白或在天然条件下分离捕获蛋白的理想选择，例如靶向完整细胞或细胞表面蛋白时。

使用胺化合物标记
胺-化合物可以通过多种方式与蛋白和其他分子的官能团偶联。较常用的方法是使用 将末端伯胺交联至羧基基团。羧基基团 (-COOH) 存在于天冬氨酸或谷氨酸残基和多肽的羧基末端。当用 EDC（产品编号 22980）活化时，羧酸盐与氨基 (–NH2) 基团反应形成酰胺键。可使用 EDC 和 Sulfo-NHS（产品编号 24510）对羧酸盐分子和表面材料进行预活化，以与伯胺进行后续反应（参见 NHS-酯化学试剂）。