LeukoLOCK™ 总 RNA 分离系统

LeukoLOCK™ 总 RNA 分离系统是一种创新的全血细胞分馏以及从白细胞群中稳定和提取总 RNA 的方法。该试剂盒包含一个 LeukoLOCK™ 分馏 & 稳定试剂盒（也可单独购买；货号 AM1933）和一个 LeukoLOCK™ 总 RNA 分离试剂盒。

•在几分钟内从全血中分离白细胞
• 从白细胞中提取总 RNA
• 无需额外的球蛋白还原步骤
• 稳定 RNA 以保存表达谱
• 在室温下保留白细胞数天

LeukoLOCK™ 系统经过优化以与人血配合使用。血液是细胞信息的存储库；然而，使用全血制备的 RNA 中存在球蛋白 mRNA 会干扰下游表达谱分析应用。LeukoLOCK™ 系统采用基于过滤柱的白细胞去除技术，将白细胞从全血和 RNAlater™ 溶液中分离出来，以稳定过滤柱上的细胞。通过排除红细胞，从捕获的白细胞中纯化得到去除固有球蛋白 mRNA 的 RNA，可提高表达谱分析和其他应用的样品实用性（如图所示）。

白细胞捕获和稳定
将抗凝血的 9–10 mL 样品通过 LeukoLOCK™ 过滤柱，其可捕获总白细胞群，同时去除红细胞（包括网织红细胞）、血小板和血浆。用磷酸盐缓冲盐水冲洗后，用 RNAlater™ 溶液冲洗过滤柱，以稳定捕获的白细胞中的 RNA（参见方案示意图）。RNA 可立即分离，或稳定的细胞可在室温下放置数天或在 –20°C 或 –80°C 下放置更长时间（如图所示）。

RNA 分离
首先在基于–硫氰酸胍的溶液（可释放 RNA，同时使核酸酶失活）中对捕获的细胞进行破坏来纯化 RNA。收集细胞裂解物并用蛋白酶 K 进行短暂处理。然后通过以下步骤从裂解物中纯化 RNA：使用 MagMAX™ 磁珠法技术进行洗涤，随后进行 DNase 处理（使用 TURBO DNase™）和最终纯化。

表达研究
定量 RT-PCR 和微阵列表达研究均已验证了纯化 RNA 用于可靠转录组谱分析的适用性（参见图）。与使用常用的血液 RNA 分离程序处理的 RNA 相比，使用 LeukoLOCK™ 系统分离的 RNA 在扩增后产生更长的中位 aRNA，且存在更高百分比的调用，无需额外的提取后步骤去除球蛋白 mRNA（参见图）。由于球蛋白 aRNA 代表全血总 RNA 的 aRNA 峰值的 25–40%，因此，使用去除不需要的球蛋白转录本的方法时得到可以理解的较低总 RNA 得率。由于竞争的球蛋白转录本显著降低，在完成 LeukoLOCK™ 纯化后扩增的 RNA 会产生更高的阵列灵敏度。

试剂盒得率
供体之间的回收率有所差异，但通常为 10–20 µg RNA/9–10 mL 全血（如图所示）。使用 LeukoLOCK™ 系统回收的 RNA 含有低于 1/10 的网织红细胞来源的 α- 和 β-球蛋白 mRNA（存在于未分馏全血的典型 RNA 样品中）。