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如果使用我们的FluoVolt 膜电势试剂盒(货号F10488),该试剂盒包含一种背景抑制剂,可改善这一问题。对于其他指标剂,可以考虑使用BackDrop 背景抑制剂(货号R37603、B10511和B10512)。
由于这些染料插入脂质膜,任何对膜的破坏都将导致染料流失。这包括用Triton X-100之类的去垢剂或是甲醇之类的有机溶剂通透。通透是胞内抗体标记所必需的,但它会导致染料流失。相反,CFDA SE之类活性染料能够共价连接到细胞组分,因此可以在固定和通透之后更好的保留。
在周围电场的作用下结构变化的分子可用作检测瞬时(毫秒级)电位变化的快反应探针。慢反应染料则会进入去极化细胞,结合蛋白或膜。增强去极化会造成额外的染料流入,增强荧光强度;过极化的特征则是荧光强度下降。快反应探针通常用于完整心脏组织的电位活动成像,或测量药理刺激引起的膜电位变化。慢反应探针常用于探索线粒体功能和细胞活力。
膜电位指示剂选择指南请见此处(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cell-viability-and-regulation/ion-indicators/membrane-potential-indicators.html)。
转运过程相当缓慢:在活体组织中大约6 mm/天,在固定组织中更慢。亲脂性羰花青示踪剂从开始给样处扩散到神经元末端,可能需要数天甚至数周的时间。FAST DIO和DiI类似物(具有不饱和烷基尾)可以提高50%左右的转运速度。