Image-iT™ 固定液

Image-iT 固定液是即用型固定液，有各种规格可供选择，以满足各种研究需求。它们非常适合与荧光蛋白（如 GFP 和 RFP）和其他小分子染料荧光基团配合使用。无需再混合有毒的固定剂粉末或稀释 pH 值不理想的浓缩溶液。 只需将这些固定液加入细胞/组织并在室温下孵育 10-15 分钟。它们非常适合用于基于抗体的任何检测方法，包括免疫细胞化学 (ICC)、免疫荧光 (IF) 和免疫组织化学 (IHC)。

Image-iT 固定液的特点包括：
•即用型
• 高纯度、成像级固定剂，背景信号伪影极少
• 不含甲醇
• 针对二抗标记、固定细胞染料染色和比色 IHC 进行优化

4% 甲醛或多聚甲醛固定液
4% 甲醛和多聚甲醛是免疫细胞化学 (ICC)、免疫荧光 (IF) 和免疫组织化学 (IHC) 中较常用的固定剂。 溶于 pH 7.4 的 0.1M 磷酸盐缓冲液的 Image-IT™ 4% 多聚甲醛（货号：I28800），以一包十瓶的包装形式提供，每瓶 10 mL。溶于 PBS 中的 Image-iT™ 4% 甲醛以 20 mL 规格（货号：FB002）或 5 x 20 mL 规格（货号：R37814）形式提供。溶于 0.1 M 磷酸盐缓冲液时，4% 多聚甲醛/甲醛的渗透压比溶于 PBS 时低 ∼300 mOsm，这有助于在固定剂有机会固定内细胞区室前维持细胞形态。使用溶于 PBS 或磷酸盐缓冲液中的多聚甲醛/甲醛时，只需将固定剂加入细胞，并在室温下孵育 5-10 分钟。孵育完成后，在 PBS 中洗涤细胞，然后进行封闭步骤。

3% 多聚甲醛、0.35% 戊二醛固定液
含 0.35% 戊二醛的 3% 多聚甲醛是一种即用型溶液，以不含甲醇的 0.1 M 二甲胂酸钠缓冲液形式提供。Yuan Qin 等人(1) 发现使用两者的混合物能更好地保持线粒体形态（与单独使用多聚甲醛或戊二醛相比）。

多聚甲醛是一种小分子，可快速渗透细胞/组织，将蛋白和其它分子固定到位。戊二醛是一种大分子，具有两个反应性醛基，可提高固定能力，有助于产生戊二醛长链，从而生成基质。这种能力有助于在线粒体等复杂环境中保留蛋白定位。

如需固定细胞/组织，建议在室温下孵育 5–10 分钟。使用戊二醛时，由于反应性醛基增加，可观察到自发荧光增加。为了帮助减少这种自发荧光，建议在固定后、封闭前使用 0.1M 甘氨酸或新配制的 0.1% (w/v) 硼氢化钠孵育七分钟左右。

3% 乙二醛固定液
乙二醛是一种比甲醛或戊二醛更小的分子。它可快速渗透细胞/组织，固定蛋白，比甲醛更好地保持细胞形态 (2)。3% 乙二醛固定液是一种即用型固定液，分装于两个瓶中提供：组分 A (92 mL)和组分 B (8 mL)，含有无水乙醇、乙二醛溶液、乙酸和水。在空瓶中加入溶液 A 和溶液 B，将两种溶液旋晃在一起，然后加入 1M NaOH 使 pH 值为4.5。一旦混合，必须立即使用该溶液。要固定细胞/组织，请将细胞/组织在室温下孵育约10分钟。

参考文献
1：Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. The Combination of Paraformaldehyde and Glutaraldehyde Is a Potential Fixative for Mitochondria.Biomolecules.2021 May 10;11(5):711.
2: Richter KN, et al.Glyoxal as an alternative fixative to formaldehyde in immunostaining and super-resolution microscopy.EMBO J. 2018 Jan 4;37(1):139-159.