T-REx™-293 细胞系

可行，您可使用我们的一株T-REx细胞系作为pLenti6.3/TO/V5-DEST慢病毒载体的表达宿主。不过，请注意pLenti6.3/TO/V5-DEST载体是一款包含WPRE和cPPT元件的HiPerform慢病毒载体，能够提升病毒滴度和表达水平；而我们所提供的T-REx细胞系则不含这些遗传元件。此外，您使用这些T-REx细胞系仅能用于瞬时表达，因为 Lenti6.3/TO/V5-DEST慢病毒表达质粒和Tet抑制子质粒（pcDNA6/TR）均能够稳定整合进T-REx细胞中，而这两者又都含有杀稻瘟素筛选标志物，因此建立稳转细胞系的操作就无法实现。

几乎所有批次的FBS中都含有四环素，因为FBS通常从奶牛中获得，而它们的饮食中有四环素。如果细胞培养于含有未去除四环素的FBS的培养基中时，目的基因就会出现低水平的基底表达情况，即使用户未主动添加四环素。在这一情况下，我们推荐您购买我们的Gibco细胞培养低四环素含量的FBS。为了确保四环素的清除效果，这些批次产品中四环素的含量应低于19.7 ng/mL（这一数值应为分析检测阈值）。

注意：Tet-抑制子蛋白与四环素的结合常数为3 nM。假设培养基中含有10%的血清，而血清中四环素的浓度为19.7 ng/mL，则相当于4 nM的四环素。因此请记得，即便使用了低四环素的FBS，仍有可能存在本底水平的表达。

当执行共转染时，用户无法在稳转细胞系中同时完成功能性TetR或GeneSwitch蛋白的双重测试。另一方面，如果执行连续转染，用户就可对所生成的T-REx或GeneSwitch细胞系进行功能性测试，他们可将LacZ对照表达质粒瞬转进入细胞，并挑取那些在诱导剂缺乏条件下表达LacZ的本底水平最低，而在含诱导剂条件下LacZ表达水平最高的克隆。之后可对这一克隆进行扩增，并按需用于T-REx或GeneSwitch表达载体的转染实验。

使用GeneSwitch系统能够确保目的基因处于极低的基础表达水平，而T-REx系统可能会有少量渗漏表达，因为FBS中不可避免的存在着一些四环素。GeneSwitch系统的诱导表达水平可能甚至高于CMV启动子。GeneSwitch系统的劣势在于，尽管该系统能够在转基因条件下以优异的性能工作，但在培养系统中关闭表达的操作不是很容易实现。而另一方面，T-REx系统可通过加入和去除诱导剂来切换开关状态。

Flp-In T-REx系统将Flp-In系统的靶向整合与T-REx系统的强大诱导表达能力整合在一起。该系统能够生成同基因，可诱导的稳定表达细胞系，并能够针对这些细胞系实行多克隆筛选。一旦建立了包含整合FRT位点的Flp-In T-REx宿主细胞系，后续建立表达目的基因的Flp-In T-REx细胞系就变得迅速高效了。