配有 Hoechst 33342、YO-PRO™-1 和 PI 染料的染色质聚集 & 膜通透性死细胞凋亡试剂盒（用于流式细胞分析）

见本文(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/en/filelibrary/support/bioprobes/bioprobes-65.par.61751.file.dat/bioprobes-65-cellevent.pdf)的表1，在0-4小时的期间，用10 µM喜树碱诱导Jurkat细胞。值得注意的是，这些结果是通过使用单细胞类型和诱导体系研究得到的；对于其他实验体系结果可能不同。凋亡细胞的细胞膜通透性增加，使用YO-PRO-1染料结合碘化丙啶或SYTOX死细胞指示剂能将其与死细胞区分开。其他中期凋亡事件是细胞ROS产物增多（用CellROX reagents，H2DCFDA试剂检测），细胞的pH变化（BCECF, SNARF-1）和钙离子释放（Fluo-4, Fura-2, Indo-1）。任何条件下，没有单个参数能够定义凋亡，因此研究凋亡时最好采用多种参数的方法

可以通过流式细胞仪完成以下细胞健康和活力检测：

细胞凋亡检测：

细胞膜不对称性：膜联蛋白V是结构相关蛋白家族一员，其可以在Ca2+存在的情况下结合磷脂。膜联蛋白V可结合多种磷脂，但是对磷脂酰丝氨酸表现出高度的亲和性。磷脂酰丝氨酸主要存在于细胞膜的内部小叶上；然而，在细胞凋亡早期，观测到磷脂酰丝氨酸转移到外部小叶。这个转移使得在含有Ca2+孵育缓冲液存在的情况下，磷脂酰丝氨酸可与膜联蛋白V结合。凋亡中的细胞可以用膜联蛋白V染色，而正常细胞不会被染色。多种偶联不同荧光基团的膜联蛋白V可供选择。

线粒体健康：细胞凋亡早期的典型特征是线粒体紊乱，同时伴随膜和氧化还原电位改变。我们独家提供了大量可通过流式细胞术分析活细胞内的线粒体活性，同时可最大限度避免细胞功能损伤的荧光探针。

线粒体染色的MitoProbe系列染料（MitoProbe DiOC2(3) 检测试剂盒，货号 M34150；MitoProbe JC-1检测试剂盒，货号M34152；MitoProbe DiIC1(5) 检测试剂盒，货号M34151）为检测细胞凋亡过程出现的线粒体膜电位损失提供了快速、简单和可靠的流式细胞术检测手段。

半胱天冬酶活性： CellEvent Caspase-3/7 Green 流式细胞检测试剂盒（货号C10427）支持对凋亡细胞中活化的caspase-3和 caspase-7进行流式细胞术检测。该试剂盒包含新型荧光底物CellEvent Caspase-3/7 Green检测试剂和SYTOX AADvanced死细胞染色剂，可靶向识别活化的caspase-3和caspase-7的序列。

DNA片段化：细胞凋亡后期的特征是核形态改变，包括DNA片段化、染色质凝缩、核膜降解，核起泡以及DNA链断裂。凋亡过程中DNA片段出现DNA链断裂，可以通过TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记）检测进行分析。APO-BrdU TUNEL检测（货号A23210）是一种双色检测方法，可通过成像或流式细胞术标记DNA断裂和细胞总DNA，检测细胞凋亡情况。

核染色质凝缩：细胞凋亡后期的特征是核形态改变，包括DNA片段化，染色质凝缩，核膜降解，核起泡以及DNA链断裂。凋亡的细胞表现出核染色质凝结增加。由于核染色质凝结，细胞透过性核酸染色剂发出较高的荧光，从而能够结合传统死细胞染色剂来区分凋亡细胞。

Vybrant细胞凋亡检测试剂盒#5，Hoechst 33342/Propidium Iodide（货号V13244）基于凋亡细胞染色质的压缩状态的荧光检测，为凋亡提供了一个快速和方便的检测手段。染色质凝结&膜渗透死细胞凋亡试剂盒包含Hoechst 33342、YO-PRO-1以及PI染料, 用于流式细胞仪（货号V23201）检测凋亡细胞中核染色质凝结和质膜通透性的变化。

细胞周期分析：

活细胞检测： Vybrant DyeCycle系列染料为活细胞周期分析提供了稳定的低毒性荧光染料，提供405 nm（货号V35003）、488 nm （货号V35004）、532 nm（货号V35005）或 633 nm（货号V10309和V10273）三种激发峰选择。染料毒性低，染色的细胞可储存和培养，或进行功能分析。

固定细胞检测：用FxCycle Violet染色剂（货号F10347）、SYTOX AADvanced 死细胞染色试剂盒（货号S10349）或FxCycle Far Red染色剂（货号F10348）分析细胞周期，为简单固定的细胞周期分析提供了多色选择。

细胞增殖：

染料稀释检测细胞增殖：染料稀释检测细胞增殖依赖细胞膜透过性荧光分子。染料进入到细胞后，共价结合蛋白质的氨基基团，导致染料长期保留在细胞中。通过随后的细胞分裂，每个子代细胞大约会分到亲代一半的荧光。采用流式细胞仪对细胞群的荧光强度进行分析，可以某个细胞或细胞群自标记之后的增殖情况，判定其传代次数。CellTrace荧光染色剂可在不影响细胞形态和生理功能的条件下，在体内或体外追踪传代情况。目前尚未发现该染色剂对细胞增殖活性或细胞生物学功能有影响。染色后，染料可在细胞内稳定保留若干天。可用于流式细胞仪的试剂盒包括CellTrace CFSE细胞增殖试剂盒（货号No. C34554）CellTrace Violet细胞增殖试剂盒（货号 C34557）和CellTrace Far Red细胞增殖试剂盒（货号 C34564）。

DNA合成检测：测定新合成的DNA是准确分析某个细胞或细胞群细胞增殖情况的方法。基于DNA合成的细胞增殖检测可根据掺入的修饰核苷，测定DNA合成速率。Click-iT Plus EdU细胞增殖检测利用了click化学试剂和修饰的核苷EdU，为BrdU染色提供了出色的替代方法，可用于检测和定量新合成的DNA数量。Pacific Blue（货号C10636）、Alexa Fluor 488（货号C10632和C10633）和Alexa Fluor 647（货号C10634和C10635）可用于Click-iT Plus EdU细胞增殖检测。

活力检测：

死细胞很容易与很多试剂非特异性结合，从而给出假阳性结果。因此，从流式细胞仪数据中排除死细胞，是有助于确保结果和分析准确性的关键步骤。

不能固定膜通透染色剂：SYTOX死细胞染色剂（货号S34857、S34860、S34861、S34859和S34862）不能穿过完整的细胞膜，与dsDNA结合后发出更强的荧光，从而成为我们最明亮的几种死细胞染色剂之一。非细胞通透性的经典DNA结合染料包括碘化丙啶（货号P21493）和7-AAD（货号A1310）。这两种染料已经被广泛用于流式细胞仪活性分析。CellTrace钙黄绿素AM染料可被动运输进入到贴壁和非贴壁细胞。这些细胞通透性酯酶底物可作为测定酶活性（激发荧光的必要条件）和细胞膜完整性的（在胞内保留荧光产物的必要条件）的活力探针。目前供应的蓝色（货号 C34853）、紫色（货号C34858）和绿色（货号C34852）荧光染料是活细胞短时染色的理想染料，且可用于多重流式细胞术试验。

可固定细胞活性染色剂：LIVE/DEAD可固定死细胞染色剂是可固定的细胞活性染料，有助于准确评估固定和/或通透后样品中细胞活性。LIVE/DEAD固定死细胞染色试剂盒基于荧光活性染料与细胞蛋白（胺基）的反应。这些染料不能透过活细胞膜，因此仅仅细胞表面蛋白可和染料反应，导致染色暗淡。活性染料可以透过死细胞损毁的细胞膜，将内部和外部的胺基染色，导致更加强烈的染色效果。LIVE/DEAD固定死细胞染色试剂盒可提供八单通道颜色，适用于三种包装规格的UV、405、488、532、561或633 nm激光，可满足您的试验需要。

DAPI是一种非常普通的蓝色核复染荧光染料，能对固定和通透的细胞和组织的细胞核进行非常明亮的标记。遗憾的是，人们普遍认为它是介于半通透性到非通透性之间的染色剂，对活细胞的染色效果也不一致。Hoechst 33342染料是细胞通透性染料，与DAPI染色有相似的染色结合机制和荧光颜色；它是活细胞成像的首选，且对固定细胞的标记效果和DAPI一样好。

Hoechst 33342: 350/461 nm, bound to DNA
YO-PRO-1: 491/509 nm
Propidium iodide: 535/617 nm, bound to DNA

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See Table 1 in this article (http://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/en/filelibrary/support/bioprobes/bioprobes-65.par.61751.file.dat/bioprobes-65-cellevent.pdf) where a Jurkat model system was induced with 10 µM camptothecin for time periods of 0 to 4 hours. It is important to note that these results were studied using a single cell type and induction system; results may differ for other experimental systems. Increased membrane permeability in apoptotic cells can be discriminated from dead cells using YO-PRO-1 dye in combination with propidium iodide or the SYTOX dead cell indicators. Other mid-apoptotic events are increased ROS production (detected with CellROX reagents, H2DCFDA), changes in cellular pH (BCECF, SNARF-1) and calcium release (Fluo-4, Fura-2, Indo-1). No single parameter defines apoptosis under any condition, so it is best to employ a multi-parametric approach when studying apoptosis.

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