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我们推荐在进行β-半乳糖苷酶染色前观察GFP荧光。这是因为β-半乳糖苷酶染色过程会产生非常高的自发荧光,从而干扰GFP荧光的检测。
EmGFP,YFP,CFP和BFP均可通过标准的FITC滤光片组和参数设定来进行检测。不过,如需获得荧光信号的最佳检测结果,我们推荐用户针对每一种荧光蛋白的激发与发射波长范围来优化滤光片组。推荐的滤光片组如下所述: EmGFP:Omega滤光片组XF100 YFP:Omega滤光片组XF1042 Chroma滤光片组41028 CFP:Omega滤光片组XF114 Chroma滤光片组31044 BFP:Omega滤光片组XF10 Chroma滤光片组31021 如需索取滤光片组的相关信息,请直接联系Omega Optical公司(www.omegafilters.com)或Chroma 技术公司(www.chroma.com)。
我们所提供荧光蛋白的激发/发射最大波长如下所述: EmGFP:激发:487 nm;发射:509 nm YFP:激发:514 nm;发射:527 nm BFP:激发:308-383 nm;发射:440-447 nm CFP:激发:452 nm;发射:505 nm Cycle 3 GFP:第一激发波长:395 nm;第二激发波长:478 nm;发射:507 nm
是的,我们所提供的所有荧光蛋白(EmGFP,YFP,CFP,BFP和Cycle 3 GFP)均经过人源基因密码子优化以适合哺乳动物表达系统。
EmGFP是EGFP的下一代变体,在哺乳动物体内表达效果更优。EmGFP和EGFP均可通过相同的滤光片组(FITC)和参数设定来实现可视化操作。在使用了推荐的滤光片组和参数设定的条件下,Cycle 3 GFP与EGFP或EmGFP一样明亮。不过,当使用FITC滤光片组及相关设定时,Cycle 3 GFP不如EmGFP或EGFP明亮。 EGFP的激发/发射最大波长:488 nm/507–509 nm EmGFP的激发/发射最大波长:487 nm/509 nm Cycle 3 GFP的激发/发射最大波长:395 nm (第一)和478 nm(第二)/507 nm