Vivid Colors™ pLenti6.3/V5-GW/EmGFP Expression Control Vector - FAQs

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我使用了你们的pLenti6.3/V5-GW/EmGFP对照载体稳转我的细胞系，但所得EmGFP的表达水平很低。我该如何处理？

这可能是由于在筛选过程中应用了过量的杀稻瘟素所致。通过开展杀伤曲线分析来确定您所用细胞系的抗生素敏感性。使用能够有效杀灭未转导细胞系的最低抗生素浓度。

我使用了你们的pLenti6.3/V5-GW/EmGFP对照载体，稳定转导我的细胞系，但未发现EmGFP的表达。你们能提供一些帮助吗？

启动子被沉默或在荧光显微镜下使用了错误的滤镜组来观察细胞培养物/流式细胞仪上的检测参数错误可导致稳定转导后看不到EmGFP的表达。应筛选多个耐受抗生素的细胞克隆，并挑选其中表达水平最高的一个。请确保在倒置荧光显微镜上使用FITC或Omega XF100滤镜组或在您的流式细胞仪中准确应用FITC检测参数。

我使用了你们的pLenti6.3/V5-GW/EmGFP对照，瞬时转导我的细胞系，但发现EmGFP的表达水平很低。你们能提供一些帮助吗？

表达量低可能是由于低转导效率，MOI值过低或转导操作后过早收获了细胞。应确保在Polybrene试剂存在的条件下进行细胞转导，检查和/或使用更高的MOI值， 至少在转导后48-72小时后再收获细胞。

我使用了你们提供的pLenti6.3/V5-GW/EmGFP对照载体，但在病毒滴度测定过程中未获得EmGFP阳性细胞。可能发生了什么情况？

这里列举了一些可能的原因与解决方案：

- 在荧光显微镜下使用了错误的滤镜组来观察细胞培养物，或流式细胞仪上的检测参数错误：请确保在倒置荧光显微镜上使用FITC或Omega XF100滤镜组或在您的流式细胞仪中准确应用FITC检测参数。
- 病毒母液未正确储存：分装并将母液保存于–80°C下的冻存管中。请勿将其冻融超过3次。
- 转导过程中未加入Polybrene试剂：在Polybrene试剂存在的条件下向细胞中转导pLenti6.2-GW/EmGFP。
- EmGFP表达时间过短以致难以观察： 如需获得最佳的EmGFP表达水平，请在转导4天后进行观察。

I used your pLenti6.3/V5-GW/EmGFP Control Vector and got poor expression of EmGFP after stable transduction into my cell line. What should I do?

This can happen due to excess blasticidin used during selection. Determine the antibiotic sensitivity of your cell line by performing a kill curve. Use the minimum antibiotic concentration required to kill your untransduced cell line.

I used your pLenti6.3/V5-GW/EmGFP Control Vector and got no expression of EmGFP after stable transduction into my cell line. Can you please help?

This could happen due to promoter silencing or using the incorrect filter/detection parameters for flow cytometry. Screen multiple antibiotc-resistant clones and select the one with the highest expression level. Check the filter you are using as well as the FITC detection parameters.

I used your pLenti6.3/V5-GW/EmGFP Control Vector and got poor expression of EmGFP after transient transduction into my cell line. Can you please help?

Please check the following:

- Tranduction occurred in presence of Polybrene reagent
- Use a higher MOI
- Harvest cells at least 48-72 hrs after tranduction

I used your pLenti6.3/V5-GW/EmGFP Control Vector and got no EmGFP-positive cells after titering. What could have happened?

Possible causes include: incorrect filter set/incorrect detection parameters for flow cytometer, viral stocks stored incorrectly, Polybrene reagent not included during transduction, or it may be too soon to see EmGFP expression.