底物特异性 CellROX™ Deep Red 试剂是一种新型细胞可透过性染料,最大吸收/发射波长 ∼644/665 nm。CellROX™ Deep Red 试剂在还原状态时不发出荧光,经活性氧簇氧化后发出荧光,最大发射波长 ∼665 nm,可通过荧光成像、高内涵成像、荧光微孔板读数仪或流式细胞分析进行测量。
使用 CellROX™ Deep Red 试剂进行氧化应激检测 由于活性氧簇 (ROS) 的生成和细胞清除活性氧簇的能力之间的失衡而造成氧化应激。ROS 在多种疾病(包括炎症、动脉粥样硬化、衰老和年龄相关退行性疾病)的进展中发挥重要作用。CellROX™ Deep Red 试剂可通过与 ROS 反应发出明亮的荧光来检测细胞中的氧化应激。
简单而可靠方案 使用该试剂的方案简单,且明亮的深红色荧光信号与其他活细胞染料和 GFP 兼容,这使其可以用于多通路荧光检测,以测定多种细胞现象,包括与细胞毒性和细胞死亡相关的参数(下方图 4)。此外,与许多其他 ROS 传感器(如 H2DCFDA)不同,与基于经典染料的 ROS 检测相比,可在甲醛固定后保留来自 CellROX™ Deep Red 的信号,以便使检测具有灵活性,并改进了工作流程。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
颜色远红外
最大浓度2.5 mM stabilized solution in DMSO
适用于(设备)Imaging, HCS, Cytometer
产品规格液体
数量250 μL
检测方法Live Cell Imaging
激发/发射644/665 nm
指示器Oxidative stress
产品线CellROX™
Unit SizeEach
内容与储存
Store at ≤–20°C. Protect from light and desiccate.
常见问题解答 (FAQ)
哪些染料可以用来检测细菌内的活性氧(ROS)?
许多对哺乳动物细胞使用的染料也可以用于细菌。例如,CellROX Deep Red试剂经证实可以用于检测B. subtilis的活性氧(见参考文献http://www-brs.ub.ruhr-uni-bochum.de/netahtml/HSS/Diss/RaatschenNadja/diss.pdf)。如果您对某一特定染料有兴趣但不知道它对您的细菌是否有效,最佳途径是通过文献检索的方式查看它是否已经过试验。如果没有,则可能需要您亲自测试。
我试着用活性氧(ROS)指示染料标记我的细胞,但没有观察到信号的明显差异。这是怎么回事?
首先,确保您同时拥有一个阴性(未处理)和一个阳性(ROS诱导)样本进行比较。100 µM甲萘醌1小时或是50 µM奈法唑酮24小时可以作为很好的阳性对照。H2O2 虽然不能很好地与CellROX染料兼容,但也可以用于阳性对照。某些如H2DCFDA的染料需要酯酶切割,所以不能在血清(血清中包含的酯酶可过早切割染料)存在的情况下进行培养。如果您的阳性对照相对于阴性对照没有明显变化,尝试着增加染料浓度和标记时间。我们的实验指南给出了启动建议。进行活细胞成像时尽可能得快。只有两种染料(CellROX Green和CellROX Deep Red)经甲醛固定处理后能保留在样品中。最后,确保您使用的滤光片和仪器设置与染料的激发和发射光谱相匹配。
I want to assay cells for reactive oxygen species using carboxy-H2DCFDA, but I want to do so with a plate reader instead of microscope. Will it work?
It has been done. The problem is that plate readers are less sensitive than microscopes, with far less signal-to-background difference. It is worth trying, but first optimize concentrations and loading times with control cells, use a plate with little to no autofluorescence, and possibly optimize the gain setting in order to get the best signal possible. But don't expect the same sensitivity, even with optimization.
I have GFP-transfected cells and need to label for reactive oxygen species. Can I use H2DCFDA?
This is not recommended as the two dyes overlap in the emission wavelength. There are other ROS reagents available in different wavelengths, such as CellROX Deep Red, which emits in the far-red range (665 nm), or dihydroethidium, which is emits in the visible red range (620 nm).
I need a formaldehyde-fixable reactive oxygen species detection assay. Is H2 DCFDA fixable?
H2DCFDA and similar derivatives are not fixable. The same goes for dihydroethidium and dihydrorhodamine. However, CellROX Deep Red and CellROX Green are retained for a limited time upon fixation with formaldehyde. CellROX Green may be retained upon subsequent Triton X-100 permeabilization. Avoid the use of any acetone or alcohol-based fixatives or fixatives that include alcohol, such as formalin.