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测序用 GeneRacer™ 试剂盒（含 SuperScript™ III RT）和 TOPO TA Cloning™ 试剂盒
GeneRacer™ 试剂盒提供了一种使用来自表达序列标签 (EST)、消减 cDNA、差异显示或文库筛选的已知 cDNA 序列获得 cDNA 全长了解更多信息
| 货号 | 数量 |
|---|---|
| L150201 | 1 个试剂盒 |
货号 L150201
价格（CNY)
-
数量:
1 个试剂盒
GeneRacer™ 试剂盒提供了一种使用来自表达序列标签 (EST)、消减 cDNA、差异显示或文库筛选的已知 cDNA 序列获得 cDNA 全长 5' 和 3' 末端的方法。该试剂盒通过在扩增过程中消除截短信息确保仅扩增全长转录本。使用测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒（平末端 PCR 产物）或测序用 TOPO TA Cloning™ 试剂盒（3' A 突出端 PCR 产物）可快速轻松地克隆 RACE PCR 产物。使用提供的方案，可使用 1 µg 总 RNA 扩增稀有（30 个拷贝/细胞）和长 (9 kb) 转录本的 cDNA 末端并对该末端进行测序。使用 GeneRacer™ 试剂盒，您可以：
•由长度至少 10 kb 的转录本生成 cDNA
• 获得稀有转录本（少于 30 个拷贝/细胞）的全长 5´ 末端
• 克隆全长 5´ 和 3´ 末端以构建完整 cDNA 序列SuperScript™ III RT
GeneRacer™ 试剂盒包含 SuperScript™ III 逆转录酶 (RT)，用于改进来自长且复杂 mRNA 的全长 5´ 末端扩增。SuperScript™ III RT 的 RNase H 部分已发生突变，可避免在 cDNA 合成期间切割 mRNA。这样可增加 cDNA 的大小和得率。SuperScript™ III RT 比野生型 RT 更耐热。可以在较高温度下进行逆转录，解开复杂模板的二级结构，并能够完成 cDNA 合成。GeneRacer™ 试剂盒的工作原理
GeneRacer™ 试剂盒确保仅扩增包含全长 cDNA 末端的转录本（如图所示）。高级方案从 RNA 水平开始，仅专门靶向 5´ 加帽 mRNA。在后续步骤中，移除帽并用 GeneRacer™ RNA 寡核苷酸替换。在逆转录过程中，GeneRacer™ RNA 寡核苷酸序列被整合到 cDNA 中。只有完全逆转录的 cDNA 将包含该已知序列。然后使用 GeneRacer™ RNA 寡核苷酸序列特异性 GeneRacer™ 5´ 引物和基因特异性引物进行 5´ RACE PCR。得到含有全长 5´ cDNA 序列的扩增 DNA。灵敏度和长度
为证明 GeneRacer™ 试剂盒捕获全长 5´ cDNA 末端的能力，扩增了转录起始位点已知的基因的 5´ 末端。从总 RNA 开始，按照 GeneRacer™ 方案，扩增长转录本 (10 kb) 和稀有信息（0.01% 或 30 拷贝/细胞）（如图所示）。
•由长度至少 10 kb 的转录本生成 cDNA
• 获得稀有转录本（少于 30 个拷贝/细胞）的全长 5´ 末端
• 克隆全长 5´ 和 3´ 末端以构建完整 cDNA 序列SuperScript™ III RT
GeneRacer™ 试剂盒包含 SuperScript™ III 逆转录酶 (RT)，用于改进来自长且复杂 mRNA 的全长 5´ 末端扩增。SuperScript™ III RT 的 RNase H 部分已发生突变，可避免在 cDNA 合成期间切割 mRNA。这样可增加 cDNA 的大小和得率。SuperScript™ III RT 比野生型 RT 更耐热。可以在较高温度下进行逆转录，解开复杂模板的二级结构，并能够完成 cDNA 合成。GeneRacer™ 试剂盒的工作原理
GeneRacer™ 试剂盒确保仅扩增包含全长 cDNA 末端的转录本（如图所示）。高级方案从 RNA 水平开始，仅专门靶向 5´ 加帽 mRNA。在后续步骤中，移除帽并用 GeneRacer™ RNA 寡核苷酸替换。在逆转录过程中，GeneRacer™ RNA 寡核苷酸序列被整合到 cDNA 中。只有完全逆转录的 cDNA 将包含该已知序列。然后使用 GeneRacer™ RNA 寡核苷酸序列特异性 GeneRacer™ 5´ 引物和基因特异性引物进行 5´ RACE PCR。得到含有全长 5´ cDNA 序列的扩增 DNA。灵敏度和长度
为证明 GeneRacer™ 试剂盒捕获全长 5´ cDNA 末端的能力，扩增了转录起始位点已知的基因的 5´ 末端。从总 RNA 开始，按照 GeneRacer™ 方案，扩增长转录本 (10 kb) 和稀有信息（0.01% 或 30 拷贝/细胞）（如图所示）。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株TOP10
克隆方法TOPO TA
适用于（应用）反转录
包括GeneRacer 模块：2 x 1.5 mL 无菌水、24 μL RNaseOut、各 6μL 小牛肠磷酸酶 (CIP)、CIP 缓冲液、烟草酸焦磷酸酶 (TAP)、10X TAP 缓冲液、T4 RNA 连接酶、10X T4 RNA 连接酶缓冲液和 10 mM ATP、6 x 250 ng GeneRacer RNA 寡核苷酸、2 x 1 mL 苯酚/氯仿、36 μL 贻贝糖原、200 μL 醋酸钠 (3 M)、各 225 μL GeneRacer 5' 引物、5' 巢式引物、3' 引物和 3' 巢式引物、20μL 对照 HeLa 总 RNA (500 ng/μL)、各 15μL 对照引物 A 和对照引物 B.1；SuperScript III RT 模块：6 μL SuperScript III 逆转录酶 (200 U/μL)、24 μL 5X 第一链缓冲液、15 μL DTT (0.1 M)、6 μL RNaseH (2 U/μL)、6 μL 随机引物 (100 ng/μL)、6 μL GeneRacer Oligo dT 引物 (900 ng/μL)、6 μL dNTP 混合物（各 10 mM）、10 个 S.N.A.P.柱、测序用 TOPO TA Cloning 试剂盒 (-20°C)、足够试剂和 One Shot TOP10 化学感受态大肠杆菌
产品线GeneRacer™、SuperScript™、TA Cloning™、TOPO™
产品类型克隆试剂盒
数量1 个试剂盒
载体pCR4-TOPO TA
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
按照指示储存每个模块：
GeneRacer™ 模块 (-20°C)：
•2 × 1.5 mL 无菌水
• 24 µL RNaseOut™
• 各 6 µL 小牛肠磷酸酶 (CIP)、CIP 缓冲液、烟草酸焦磷酸酶 (TAP)、10X TAP 缓冲液、T4 RNA 连接酶、10X T4 RNA 连接酶缓冲液和 10 mM ATP
• 6 × 250 ng GeneRacer™ RNA 寡核苷酸
• 2 × 1 mL 苯酚/氯仿
• 36 µL 贻贝糖原
• 200 µL 醋酸钠 (3 M)
• 各 225 µL GeneRacer™ 5′ 引物、5′ 巢式引物、3′ 引物和 3′ 巢式引物
• 20 µL 对照 HeLa 总 RNA (500 ng/µL)
• 各 15 µL 对照引物 A 和对照引物 B.1
SuperScript™ III RT 模块 (-20°C)
• 6 µL SuperScript™ III 逆转录酶 (200 U/µL)
• 24 µL 5X 第一链缓冲液
• 15 µL DTT (0.1 M)
• 6 µL RNaseH (2 U/µL)
• 6 µL 随机引物 (100 ng/µL)
• 6 µL GeneRacer™ Oligo dT 引物 (900 ng/µL)
• 6 µL dNTP 混合物（各 10 mM）
10 S.N.A.P.™柱（室温）
测序用 TOPO TA Cloning™ 试剂盒 (-20°C)
• 足量试剂和 One Shot™ TOP10 化学感受态大肠杆菌（在 -80°C 下储存），克隆 10 GeneRacer™ PCR 产物；GeneRacer 模块 (-20°C)、SuperScript III RT 模块 (-20°C)、感受态大肠杆菌（在 -80°C 下储存）、S.N.A.P.柱（室温）、测序用 TOPO TA Cloning 试剂盒 (-20°C)
GeneRacer™ 模块 (-20°C)：
•2 × 1.5 mL 无菌水
• 24 µL RNaseOut™
• 各 6 µL 小牛肠磷酸酶 (CIP)、CIP 缓冲液、烟草酸焦磷酸酶 (TAP)、10X TAP 缓冲液、T4 RNA 连接酶、10X T4 RNA 连接酶缓冲液和 10 mM ATP
• 6 × 250 ng GeneRacer™ RNA 寡核苷酸
• 2 × 1 mL 苯酚/氯仿
• 36 µL 贻贝糖原
• 200 µL 醋酸钠 (3 M)
• 各 225 µL GeneRacer™ 5′ 引物、5′ 巢式引物、3′ 引物和 3′ 巢式引物
• 20 µL 对照 HeLa 总 RNA (500 ng/µL)
• 各 15 µL 对照引物 A 和对照引物 B.1
SuperScript™ III RT 模块 (-20°C)
• 6 µL SuperScript™ III 逆转录酶 (200 U/µL)
• 24 µL 5X 第一链缓冲液
• 15 µL DTT (0.1 M)
• 6 µL RNaseH (2 U/µL)
• 6 µL 随机引物 (100 ng/µL)
• 6 µL GeneRacer™ Oligo dT 引物 (900 ng/µL)
• 6 µL dNTP 混合物（各 10 mM）
10 S.N.A.P.™柱（室温）
测序用 TOPO TA Cloning™ 试剂盒 (-20°C)
• 足量试剂和 One Shot™ TOP10 化学感受态大肠杆菌（在 -80°C 下储存），克隆 10 GeneRacer™ PCR 产物；GeneRacer 模块 (-20°C)、SuperScript III RT 模块 (-20°C)、感受态大肠杆菌（在 -80°C 下储存）、S.N.A.P.柱（室温）、测序用 TOPO TA Cloning 试剂盒 (-20°C)