SYPRO™ Ruby 蛋白凝胶染色剂

不会。染料浓度高于1X不会带来更好的检测结果。相反，随着染料浓度的增加，背景荧光会增强，染料会发生自淬灭，从而降低信号。

经过SYPRO染料染色的凝胶可放置在玻璃纸之间进行干燥，但有时会轻微降低灵敏度。如果在纸上干燥凝胶，光会散射且灵敏度会降低。不推荐使用其他塑料，因为通常使用的塑料是不可透过紫外光的。

可以，您可使用SYPRO Orange蛋白质凝胶染料对Invitrogen凝胶进行染色，但需要更改实验方案。该染料主要是与0.05% SDS电泳缓冲液一起使用，但我们所有的缓冲液均含有0.1% SDS。这会产生较高的背景，因为SDS会与染料紧密结合。以下是获得最佳Invitrogen凝胶染色结果的推荐方案：

洗涤液：7.5% (v/v) 乙酸

染色液：在洗涤液中按1:5000稀释SYPRO Orange
1.凝胶电泳完毕后，在100 ml洗涤液中清洗10分钟。
2.将凝胶置于染色液中，在暗处放置长达24小时。
3.从染色液中取出凝胶，在100 ml洗涤液中短暂清洗。
4.随后，可对凝胶进行拍照。

不能。上样溶液含有很多SDS，因此，SYPRO Ruby、SYPRO Orange和SYPRO Red染料会只与游离的SDS结合，而极少与蛋白质结合。在电泳前，可预先使用ATTO-TAG CBQCA（货号A2333）、DDAO琥珀酰亚胺酯（货号C34553）或TAMRA-琥珀酰亚胺酯（货号C2211）染料或TC-FLAsH表达分析检测试剂盒（货号A10067为橙黄色荧光，货号A10068为红色荧光）对蛋白质进行共价标记，不会影响蛋白质在凝胶中的迁移。

电泳期间，可将SYPRO Orange或SYPRO Red蛋白质凝胶染料稀释5000倍并加入到阴极（上层）缓冲液槽中，对蛋白质进行染色而不影响迁移。这样做可能引起的问题是，染料与SDS的相互作用可能导致凝胶产生背景荧光。在电泳后使用7.5%乙酸脱色15–60分钟，可降低这种背景荧光。这种染色方法还会导致蛋白质灵敏度低于标准的后染色方法、在凝胶成像前需要相同的时间以及污染电泳装置。

No. Dye concentrations higher than 1X do not give better detection. Instead, background fluorescence increases and, as the dye concentration increases, the dye becomes self-quenching and the signal actually decreases.

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