protocols

简介

Transwell迁移实验是研究内皮细胞对血管生成诱导剂或抑制剂迁移反应的常用检测。Transwell实验也称为 Boyden 试验或改良的 Boyden 小室试验。

Transwell小室是什么？

Transwell小室是一种常用于细胞迁移和侵袭实验的经典工具，由上下两室组成，中间通过聚碳酸酯膜（多孔滤膜）隔开。上室接种待测细胞，下室加入化学引诱剂（如血清或特定趋化因子），通过细胞穿过膜孔的数量来评估其迁移或侵袭能力。若在膜上涂覆基质胶（如Matrigel），可模拟细胞外基质环境，进一步研究侵袭特性。该装置广泛应用于肿瘤转移、免疫细胞趋化、屏障穿透（如血脑屏障）等研究，具有操作简便、定量性强的特点，是体外模拟细胞运动行为的核心方法之一。

Transwell细胞培养板是什么？

Transwell细胞培养板是一种用于细胞共培养、迁移和侵袭实验的常用工具，其核心设计为带有可穿透性聚碳酸酯膜（孔径通常为0.1-12μm）的插入式培养小室。该装置通过将膜分隔为上下两室，允许研究细胞跨膜迁移、物质转运或细胞间相互作用（如肿瘤侵袭、免疫细胞迁移等）。膜下层可预铺基质胶模拟体内环境，上室细胞穿过膜孔进入下室的过程可通过染色定量分析。其透明材质兼容显微镜观察，且与多孔板匹配便于高通量实验，广泛应用于肿瘤学、免疫学及屏障功能（如血脑屏障）研究领域。

Transwell实验步骤

Transwell实验步骤简要介绍：

  1. 准备细胞与Transwell小室：将Transwell小室放入培养板中，上室加入无血清培养基预孵育30分钟（减少气泡干扰）。
  2. 接种细胞：消化并重悬细胞后，将细胞悬液（含适量血清或无血清）加入上室，下室加入含趋化因子或血清的培养基。
  3. 培养：在37℃、5% CO₂培养箱中孵育（时间依细胞类型而定，如12-48小时）。
  4. 固定与染色：用棉签擦去上室未迁移细胞，4%多聚甲醛固定30分钟，0.1%结晶紫染色20分钟。
  5. 观察计数：显微镜下随机选取视野拍照，统计下室膜背面迁移的细胞数。

测定描述

在该测定中，将内皮细胞置于带渗透膜的细胞培养插入式培养基的上层，并将含有试验药物的溶液置于细胞渗透膜下方。培养期（3-18 小时）后，对迁移穿过膜的细胞进行染色和计数。膜通常涂有一些促进粘附和迁移的细胞外基质成分（例如胶原蛋白）。¹
    

该测定的主要优点是其检测灵敏度。极低水平的血管生成诱导剂可通过渗透性滤器迁移。长时间的研究是困难的，因为受试物浓度将在膜下方室和膜上方室之间迅速达到平衡。另一个缺点是设置 Transwell 相对困难。市售细胞培养插管减轻了这一负担。

材料

其他产品

参考资料

  1. Senger D, Perrazzi C, Streit M et al. (2002)。α(1)β(1) 和 α(2)β(1) 整合素为血管内皮生长因子信号转导、内皮细胞迁移和肿瘤血管生成提供关键支持。Am J Pathol.160(1):195-204.

LT169 于 2011 年 10 月 6 日更新
 

仅供科研使用，不可用于诊断目的。