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Thermo Scientific Phusion DNA 聚合酶是高保真聚合酶，通过将双链 DNA（dsDNA）结合结构域与类似 Pyrococcus 聚合酶的具有校正功能的酶相融合而制成。Phusion DNA 聚合酶的校正能力使其具有极低的错误率、快速的延伸时间以及对抑制剂的耐受性。
Phusion DNA 聚合酶有多种形式，特别适合需要高精度的应用，如克隆、测序和诱变。Thermo Scientific Phusion Plus DNA 聚合酶是 Phusion 高保真 DNA 聚合酶家族的最新成员，与 Phusion 家族的其他产品相比，它具有更高的保真度，并且其通用退火特性简化了引物退火步骤，有助于您省去计算引物退火温度的步骤。
Phusion DNA 聚合酶：选择指南
Phusion 高保真 DNA 聚合酶有多种形式可供选择。下表对 Phusion DNA 聚合酶的各种形式进行了比较。
Phusion Plus DNA 聚合酶 |
Phusion 高保真 DNA 聚合酶 |
Phusion 热启动 II DNA 聚合酶 |
Phusion Flash 高保真 PCR 预混液 |
Phusion U 热启动 DNA 聚合酶 |
Phusion U 多重 PCR 预混液 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 保真度 (vs. Taq 酶) | >100x | 52x | 52x | 25x | 25x | 25x |
| 需要计算Tm | 否 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 增强特异性 (热启动版本) | 是 | 否 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 扩增长度 | 长达20 kb | 长达20 kb | 长达20 kb | 长达20 kb | 长达20 kb | 长达2.5 kb |
| 速度 | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb | <15 sec/kb | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb |
| 高 GC 含量体系 | 是 | 是 | 是 | 否 | 是 | 否 |
| dUTP 掺入 | 否 | 否 | 否 | 否 | 是 | 是 |
| 专为多重 PCR 设计 | 否 | 否 | 否 | 否 | 否 | 是, 高达20个靶标 |
| 单酶形式* | 无色 | 无色 | 无色 | N/A | N/A | |
| 2x预混液形式* | 无色 绿色** | 无色，包括 HF 缓冲液 | 无色 | 无色 | N/A | 无色 |
* 所有单酶都随附其反应缓冲液。2 x预混液形式包含了除模板和引物之外的所有必要的 PCR 成分。
** 含有绿色上样染料和一种密度试剂，可将 PCR 产物直接上样到凝胶中。
Phusion Plus DNA 聚合酶
Phusion Plus DNA 聚合酶是 Phusion DNA 聚合酶的最新一代产品，该系列产品久负盛名，在很多文献中被广泛引用。作为一种热启动、具有校正功能的 PCR 酶，Phusion Plus DNA 聚合酶能够生成具有高序列准确性、灵敏度和特异性的 PCR 扩增产物。它还凭借通用退火特性简化了引物退火步骤，使您无需计算引物退火温度，并且对于许多引物可使用 60 °C的退火温度。
Phusion Plus DNA 聚合酶的优点
- 高序列准确性—PCR 保真度是 Taq 酶的 100 倍以上
- 简化反应设置—由于独特的缓冲液配方，无需计算引物退火温度
- 更高特异性和室温稳定性—热启动修饰提高了 PCR 的特异性以及已配置反应体系在室温下的稳定性
- 强劲 PCR 扩增—以 15-30 s/kb 的速度快速延伸；能有效扩增富含 GC 的序列和含有抑制剂的 DNA
- 移液步骤更少—提供包含或不包含上样染料的预混液形式
Phusion Plus DNA 聚合酶的支持数据
作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶，使用Phusion Plus DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低，让您对PCR序列准确性充满信心。
图 1.不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度。通过二代测序分子标签法确定错误率，随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。
由于其反应缓冲液的独特配方，使用Phusion Plus DNA聚合酶无需通过退火温度（Tm）计算器来确定退火温度。无需考虑引物的Tm值，所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。此外，如果您希望沿用原本的Phusion方案，这种酶也可以在计算的退火温度下使用。
图 2.在两种退火温度条件下进行PCR扩增。从50ng人类基因组DNA（gDNA）中扩增12个不同退火温度（在每一列上方已标示）的靶标。采用60°C通用退火温度（左图）或使用Tm计算器计算的退火温度（右图）。分子量标准为Thermo Scientific ZipRuler Express Ladder DNA 2。
Phusion Plus DNA聚合酶的通用退火功能允许使用通用循环方案, 帮助您同时扩增不同长度的PCR靶标并节省时间。不同长度的靶标均使用同一退火温度（60°C）和基于最长扩增子的延伸时间——即在同一模块中同时扩增多个靶标，而不会影响PCR产量和特异性。
图 3.使用Phusion Plus DNA聚合酶可同时扩增多个PCR靶标。从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标，对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间（最长7.5kb ，需3分45秒）的通用循环方案（左图），或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案（0.3 kb 9秒，0.7 kb 21秒，2 kb 60秒，3.9 kb 2分钟，7.5 kb 3分45秒）进行扩增（右图）。分子量标准为ZipRuler Express DNA Ladder 2。
使用Phusion Plus DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 该酶采用亲体分子热启动修饰，有助于抑制在PCR体系配制时酶的活性，防止非特异性扩增和引物降解。
图 4.使用Phusion Plus DNA聚合酶的高产量和特异性。使用不同品牌的DNA聚合酶，按照厂家推荐方案从100 ng人类gDNA中扩增 0.3-7.5 kb DNA靶标。分子量标准为Thermo Scientific GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
Phusion Plus DNA聚合酶通过严格的热启动修饰技术抑制其在室温下的活性，可在室温下提供长达24小时的反应体系的稳定性，适用于高通量自动化或移液系统
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图5.Phusion Plus DNA聚合酶的室温稳定性。 使用不同品牌的热启动DNA聚合酶，按照厂家推荐方案从50ng 人类基因组DNA中扩增0.5kb靶标。 。配制好的PCR反应体系立即（0小时）放入PCR仪，或在室温放置24小时后再放PCR仪运行（24 hr）。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
Phusion Plus DNA聚合酶可以检测低至0.08 ng的人基因组DNA。
图6.Phusion Plus DNA聚合酶的高灵敏性。 使用不同品牌的DNA聚合酶， 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增0.5kb的靶标。分子量标准为 GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
由于其融合蛋白技术和独特的缓冲液配方，Phusion Plus DNA聚合酶对来自植物（如木聚糖）、土壤（如腐植酸）和血液（如血红素）的抑制剂表现出更高的耐受性。
图7.Phusion Plus DNA聚合酶的高抑制剂耐受力。使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中扩增2 kb靶标。反应组分包括：1-无抑制剂；2-腐植酸（0.5 μg/mL）；3-血红素（2.5 μM）；4-木聚糖（250 μg/mL）。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
Phusion Plus DNA聚合酶包装中配有Phuson GC Enhancer，以更高效的扩增GC含量>65%的序列。
图8.使用Phusion Plus DNA聚合酶高效扩增高GC含量模板。使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增5个高GC含量（含量如图示）的靶标（0.78 kb，0.74 kb，0.72 kb，0.66 kb和0.55 kb）。分子量标准为 ZipRuler Express Ladder DNA 2。
Phusion Plus DNA聚合酶具有高持续合成能力，可扩增长片段DNA——最大10kb的人类gDNA和20 kb的lambda DNA。 延伸速度为15-30 秒/kb, 扩增时间非常短。
图 9.Phusion Plus DNA聚合酶的扩增范围。使用Phusion Plus DNA聚合酶成功扩增2个 不同浓度的靶标：9.1 kb的人类gDNA靶标（左图）和18kb的lambda DNA靶标（右图）。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
Phusion Plus DNA 聚合酶相关资源
手册/实验方案
宣传册/产品手册
技术说明
其他资源
学习资源
分子生物学工作流程解决方案
PCR在线工具
定制PCR酶
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。