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PrestoBlue 检测细胞活力
PrestoBlue HS和PrestoBlue细胞活力检测试剂是一种无毒的即用型试剂，基于刃天青，可作为细胞健康指标、定量检测细胞活力。PrestoBlue利用活细胞的还原能力将刃天青转化为荧光试卤灵。PrestoBlue HS（高灵敏度）细胞活力检测试剂是PrestoBlue 的升级版，不仅保留了PrestoBlue作为良好细胞活力检测试剂的所有关键特性，而且提高了灵敏度。
在进行细胞活力快速测定时，建议使用PrestoBlue HS和PrestoBlue检测细胞活力，仅需10分钟培养时间。
PrestoBlue选择指南
| PrestoBlue HS（高灵敏度）细胞活力检测试剂 | PrestoBlue 细胞活力检测试剂 | |
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| 用途 |
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| 检测原理 |
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| 灵敏度 |  |  |
| 试剂纯度 |
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| 背景荧光 |
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| 信噪比 |
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| 检测信号窗口 |
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| 货号 | P50200 | A13262 |
对于细胞活力快速测定（10 分钟孵育），建议使用 PrestoBlue HS 试剂，而对于连续细胞活力研究或使用高细胞密度时，建议使用 alamarBlue HS 试剂。 | ||
什么是PrestoBlue检测？
PrestoBlue检测适用于各种细胞类型，包括人类、细菌和酵母细胞，可作为细胞生物学和微生物学中细胞活力检测的替代方案 (1)。PrestoBlue 是一种细胞活力快速指示剂，利用活细胞的还原能力将刃天青转化为荧光分子——试卤灵。可在基于吸光度或荧光的酶标仪上仅需定量分析；定性分析则可通过新陈代谢活跃细胞的指示溶液的颜色变化进行视觉评估。
刃天青是一种无毒（图 1）的细胞渗透性化合物，颜色为蓝色，几乎无荧光。在细胞内，刃天青被还原为试卤灵，产生高强度红色荧光（图 2）。活细胞继续将刃天青转化为试卤灵，从而生成对细胞活力和细胞毒性的定量检测结果。
与其他基于刃天青的试剂不同，PrestoBlue HS 和 PrestoBlue 细胞活力检测试剂使用专有缓冲体系配制，制成具有最佳生理 pH 范围的试剂，用于快速测定细胞活力。
图 1.PrestoBlue HS 试剂的无毒性证明。使用 PrestoBlue HS 试剂处理 U2OS 细胞 4 小时；对照组不处理。按照说明书，向两组中加入 CyQUANT Direct 试剂。根据 CyQUANT Direct 荧光检测，该荧光检测中无显著差别，这表明 PrestoBlue HS 试剂没有显著的细胞毒性。此外，当接触不同浓度的藤黄酸时，经过 PrestoBlue HS 试剂预处理的 U2OS 细胞显示出与对照细胞类似的 IC50值。
图2.新陈代谢活跃的细胞将刃天青转化为一种发出红色荧光的试卤灵。刃天青是一种无荧光指示染料，在新陈代谢活跃的细胞中通过化学还原转化成发出亮红色荧光的试卤灵。产生的荧光量与活细胞的数量成正比。PrestoBlue HS 中的刃天青经过纯化，其性能优于标准 PrestoBlue 试剂，标准 PrestoBlue 试剂具有已知的污染问题、性能次佳。
如何使用PrestoBlue检测试剂？
PrestoBlue HS和PrestoBlue细胞活力检测试剂均为易于添加和读取的检测试剂（图 3）。只需在细胞中加入PrestoBlue HS或PrestoBlue细胞活力检测试剂，培养时间 ≥10 分钟，即可读取荧光或吸光度。荧光或吸光度与活细胞的数量成正比，与细胞的新陈代谢活动相对应。受损细胞或无活力细胞的代谢活性较低，因此产生的信号按比例低于健康细胞。
PrestoBlue HS和PrestoBlue细胞活力检测试剂与基于吸光度和荧光的酶标仪兼容。可在 570 nm 处对吸光度进行定量分析，可在 560/590 nm 处对荧光进行定量分析（激发/发射）。通过绘制荧光强度（或吸光度）与化合物浓度的关系图进行结果分析。荧光和吸光度均呈现线性和定量结果，其中荧光读数的灵敏度更高。
图 3.PrestoBlue 检测的工作原理。
PrestoBlue HS和 PrestoBlue检测细胞活力不需要细胞裂解
PrestoBlue HS和PrestoBlue易于进入活细胞中，不需要通过固定和DNA变性技术来裂解或进一步处理细胞。该染料在细胞培养基（包括含酚红的培养基）中保持性质稳定。您可利用这些特性：
- 持续监测药物在剂量反应实验中或优化药物浓度时的效果
- 在使用PrestoBlue HS或PrestoBlue完成检测细胞活力后，可进行其他功能检测
PrestoBlue HS 的表现更优
由于合成和生产过程，所有基于刃天青的试剂均含有可检出试卤灵污染。试卤灵的污染量因材料来源和生产条件的不同而具有很大差异。试卤灵的存在导致了背景荧光可检出的差异。此外，污染性试卤灵和由此导致的更高的背景信号显著降低了检测的信噪比，减小了动态范围。
为了提高基于刃天青的试剂的性能，本公司开发出一种创新工艺，并在实施中去除污染性试卤灵，生成高纯度的刃天青。PrestoBlue HS 细胞活力检测试剂的生产中使用了专有缓冲体系来配制高纯度刃天青。
PrestoBlue HS 的灵敏度高于 PrestoBlue
在PrestoBlue HS试剂中使用纯化刃天青可将背景荧光减少>50%，信噪比增加>100%（图 4 和 图 5），同时保留PrestoBlue检测细胞活力的所有关键特性。
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图 4.在多个细胞类型中均具有较低的背景荧光。在 PrestoBlue HS 配方中使用纯化刃天青可降低细胞活力检测试剂在贴壁细胞 (U2OS)、原代细胞 (HCASMC) 和悬浮细胞 (Ramos) 中的背景荧光。
图 5.在各种细胞类型中都展现出更好的性能。使用 PrestoBlue HS 细胞活力检测试剂时，HCASMC（原代细胞）, Ramos（悬浮细胞）和 U2OS（贴壁细胞）显示出细胞活力信噪比增加。
PrestoBlue HS 的检测窗口宽于 PrestoBlue
PrestoBlue HS 检测试剂可显示各种细胞系的较大细胞活力检测窗口，可增强对细胞活力的定量检测能力（图 6）
图 6.使用 PrestoBlue HS 检测试剂可增大动态范围。在 A549 细胞中加入不同浓度的藤黄酸，检测细胞活力的变化。结果表明，使用 PrestoBlue HS 检测试剂时，显著增大了检测的动态范围。
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文献列表
相关资源
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荧光光谱查看器—可绘制和比较不同染料的荧光光谱，检查多个荧光基团的光谱兼容性。
应用资料
应用指南：PFOS 对 hESCs 分化为心肌细胞毒性作用的评估
应用指南：使用 Varioskan LUX 多功能酶标仪，利用 alamarBlue 和 PrestoBlue 试剂监测细胞健康
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