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化学发光底物(ECL)
赛默飞化学发光底物(ECL)为蛋白免疫印迹实验提供多种底物选择。ECL底物的正确选择取决于所需检测限（灵敏度）、靶蛋白的丰度、样品丰度和抗体可用性。根据您的实验需要，使用下表找到合适的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）底物。
热销化学发光(ECL)底物推荐
 |  |  | |
| SuperSignal West Pico PLUS | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
|---|---|---|---|
| 何时选择 | 日常WB实验首选，想减轻实验体系优化的工作量，兼顾性能与性价比 | 靶蛋白丰度较低 | 靶标蛋白丰度极低，样品极为珍贵，或抗体量有限 |
| 性能优势 | 宽动态范围，信号持久 | 高灵敏度检测经典之选 | 卓越的灵敏度 |
| 检测灵敏度 | 低皮克至高飞克 | 中至低飞克级 | 低飞克级至高阿克 |
| 信号持续时间 | 优化后可达 24 小时 | 优化后可达 8 小时 | 6 小时 |
| 推荐抗体稀释度 (1 mg/ml 储存液) | 一抗: 1:1,000 二抗: 1:20,000-1:100,000 | 一抗: 1:5,000 二抗: 1:100,000-1:500,000 | 一抗: 1:5,000 二抗: 1:100,000-1:250,000 |
| 货号 | 34579 (20 mL) 34577 (200 mL) 34580 (500 mL) 34578 (1 L) | 34094 (20 mL) 34098CN (5*100 mL) | A38554 (20 mL) A38555 (100 mL) A38556 (200 mL) |
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HRP 底物的相关产品
辣根过氧化物酶（HRP）化学发光底物
HRP（40 kDa）已成为化学发光蛋白质印迹检测的常规酶。其稳定性和较小的分子量使其应用逐渐普及，通过使每个 IgG 标记更多的分子，可实现更高的检测灵敏度。此外，HRP 化学发光底物的改良和发展使其相较AP底物具有更高的蛋白质印迹检测灵敏度。
用于辣根过氧化物酶（HRP）的化学发光底物多为双组分系统，由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。如果要制备工作液，需要将两种组分混合在一起。当与结合有 HRP 标记抗体（或其他探针）的印迹一起孵育时，化学反应生成的发射光可在 425nm 下，通过 X 光胶片、 CCD 成像系统和用于检测化学发光的磷光成像仪进行采集。发射光仅在酶 - 底物反应期间发生；因此，一旦酶周围的底物耗尽，信号输出将停止。
虽然 X-光胶片能够提供定性和半定量的数据，并可以用来确认靶蛋白的存在，但冷 CCD 成像装置能够提供定性分析、即时图像处理，具有更高灵敏度、更高分辨率和比胶片更大的动态范围等优点。
我们提供五种用于辣根过氧化物酶酶（HRP）蛋白质印迹检测的化学发光底物类型。使用 HRP 化学发光底物 一页中的表格，根据靶蛋白的丰度、包含靶蛋白的样品丰度、灵敏度水平和可用检测仪器类型，选择最适合的 HRP 化学发光底物。
不知道哪种底物适合您？使用化学发光底物选择指南根据您的研究需求选择适合的底物。
了解关于每种 SuperSignal 底物的更多信息
技术讲座
讲座标题：低丰度蛋白的Western Blot检测策略
在这个讲座中，针对低丰度蛋白检测常见的难点，我们介绍了从样品制备到印迹检测的优化策略，以提高结果的信噪比，获得理想的Western Blot数据。
AP 底物
Novex AP 化学发光底物
| 信号持续时间长 |
|---|
| 灵敏度：低皮克级 |
| 持续时间：超过 24 小时 |
| 推荐抗体稀释比（1 mg/ml 储备液）： 1°: 1:500-5,000 2°: 1:2,000-1:10,000 |
| 何时使用：对于PVDF 膜，使用单一底物 对于硝酸纤维素膜，需要将 Nitro Block II（单独出售）添加至底物 |
AP 底物的相关产品
| Thermo Fisher Scientific 产品 | 描述 | 订购 |
|---|---|---|
| Novex AP 化学发光底物增强剂（Nitro Block II） | Nitro-Block-II 的 20X 溶液需与 Novex AP 化学发光底物配合使用，在硝酸纤维素膜上探测印迹时，用于增加化学发光信号的强度 | WP20003 |
| WesternBreeze 显色试剂盒，抗兔 | 用于检测使用小鼠一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7104 |
| WesternBreeze 化学发光试剂盒，抗兔 | 用于检测使用兔一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7106 |
| WesternBreeze 化学发光试剂盒，抗山羊 | 用于检测使用山羊一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7108 |
碱性磷酸酶（AP）化学发光底物
对于基于碱性磷酸酶（AP，86 kDa）的蛋白质印迹检测，我们提供 CDP-Star 底物，其设计用于提供皮克级灵敏度并且与传统的 X-光胶片和基于 CCD 的成像系统相容。通过 AP 将 CDP-Star 去磷酸化，以产生亚稳定的二氧杂环丁烷酚盐阴离子中间体，该中间体在 475 nm 波长下分解并发射具有最大强度的光。发射光仅在酶 - 底物反应期间发生；因此，一旦酶周围的底物耗尽，信号输出将停止。 发射光可在 24-96 小时内保持稳定，允许多次曝光。
从单独的底物、Novex AP 化学发光底物或 WesternBreeze 化学发光免疫检测试剂盒中选择，该试剂盒包含分析应用所需的所有溶液，包括封闭溶液、一抗稀释剂、即用型二抗溶液、即用型化学发光底物、清洗溶液、培养盘、预切滤纸、聚酯片，以便在膜上形成均匀的底物显影。Novex AP 化学发光底物应与 Nitro Block II 结合用于硝酸纤维素膜。
CDP-Star 底物的发光机制。
硝酸纤维素膜为 1,2-二氧杂环丁烷底物的化学发光提供了低效环境，产生非常低的信号强度。Nitro-Block-II 膜增强剂增加了硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上的信号强度。Nitro-Block-II 增强剂在膜表面形成疏水环境，增加了化学发光强度。显示了 NitroBlock 增强剂处理对硝酸纤维素和 PVDF 膜的影响。若不使用 Nitro-Block 增强剂，则硝酸纤维素膜上的信号很弱，使检测无效或需要极长的曝光时间。使用 Nitro-Block 增强剂，可实现 10 至 45 分钟的短时间曝光。虽然 PVDF 膜不需要使用 Nitro-Block 增强剂，但使用 Nitro-Block 增强剂可使曝光时间缩短十倍。其使 PVDF 膜上的曝光时间非常短，蛋白质印迹检测的曝光时间为 15 秒至 15 分钟。
在硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上，通过 Nitro-Block 增强剂的短曝光时间增强化学发光信号。
产品说明书
应用指南和技术手册
从我们的套装试剂盒开始体验
SuperSignal West 底物套装试剂盒
| 套装 A |
|---|
Pico PLUS (500mL) + 尝鲜装 Atto (20mL) 该套装试剂盒包括：
|
| 套装 B |
|---|
Femto (100 mL) + 尝鲜装 Atto (20 mL) 该套装试剂盒包括：
|
化学发光Western Blot的图像捕获与分析
通常通过X光胶片或CCD数字成像系统来捕获化学发光Western Blot结果。X光胶片只能提供定性和半定量数据，是用于确认靶蛋白存在的传统手段。而CCD成像系统相较于胶片具有显著优势，包括可定量分析、即时捕获与分析图像、灵敏度和分辨率更高、并且具有更广的线性动态范围，已逐渐成为更多科研人员的可视化平台选择。
iBright 智能成像系统
使用iBright智能成像系统进行拍摄和分析，获取发表级Western Blot结果。这款高性能成像系统通过强大的硬件配置，先进的自动化技术，流畅简单的操作界面，为您带来全新成像体验 。
种类齐全且经过高级验证*的Western Blot抗体
我们针对蛋白质免疫印迹应用提供种类齐全的高品质Invitrogen™抗体，多种靶点和宿主类型可选。选择可靠的一抗和二抗，让印迹检测更有信心。
Invitrogen抗体
我们从10万种抗体库逐一进行高级验证，现在可以提供数千种适用于Western Blot的Invitrogen高级验证一抗，并将不断增加更多经过高级验证的抗体，以丰富蛋白免疫印迹一抗产品种类。我们的交叉吸附HRP二抗可帮助降低物种交叉反应性，并最大限度地降低背景。
*“验证”一词或其任何变形的使用仅指用于功能测试的研究用途抗体，旨在确认该抗体是否可用于指定研究技术。其不能确保产品已经过临床或诊断用途验证。
热销化学发光(ECL)底物推荐
| | | |
| SuperSignal West Pico PLUS | SuperSignal West Femto | SuperSignal West Atto | |
|---|---|---|---|
| 何时选择 | 日常WB实验首选，想减轻实验体系优化的工作量，兼顾性能与性价比 | 靶蛋白丰度较低 | 靶标蛋白丰度极低，样品极为珍贵，或抗体量有限 |
| 性能优势 | 宽动态范围，信号持久 | 高灵敏度检测经典之选 | 卓越的灵敏度 |
| 检测灵敏度 | 低皮克至高飞克 | 中至低飞克级 | 低飞克级至高阿克 |
| 信号持续时间 | 优化后可达 24 小时 | 优化后可达 8 小时 | 6 小时 |
| 推荐抗体稀释度 (1 mg/ml 储存液) | 一抗: 1:1,000 二抗: 1:20,000-1:100,000 | 一抗: 1:5,000 二抗: 1:100,000-1:500,000 | 一抗: 1:5,000 二抗: 1:100,000-1:250,000 |
| 货号 | 34579 (20 mL) 34577 (200 mL) 34580 (500 mL) 34578 (1 L) | 34094 (20 mL) 34098CN (5*100 mL) | A38554 (20 mL) A38555 (100 mL) A38556 (200 mL) |
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HRP 底物的相关产品
辣根过氧化物酶（HRP）化学发光底物
HRP（40 kDa）已成为化学发光蛋白质印迹检测的常规酶。其稳定性和较小的分子量使其应用逐渐普及，通过使每个 IgG 标记更多的分子，可实现更高的检测灵敏度。此外，HRP 化学发光底物的改良和发展使其相较AP底物具有更高的蛋白质印迹检测灵敏度。
用于辣根过氧化物酶（HRP）的化学发光底物多为双组分系统，由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。如果要制备工作液，需要将两种组分混合在一起。当与结合有 HRP 标记抗体（或其他探针）的印迹一起孵育时，化学反应生成的发射光可在 425nm 下，通过 X 光胶片、 CCD 成像系统和用于检测化学发光的磷光成像仪进行采集。发射光仅在酶 - 底物反应期间发生；因此，一旦酶周围的底物耗尽，信号输出将停止。
虽然 X-光胶片能够提供定性和半定量的数据，并可以用来确认靶蛋白的存在，但冷 CCD 成像装置能够提供定性分析、即时图像处理，具有更高灵敏度、更高分辨率和比胶片更大的动态范围等优点。
我们提供五种用于辣根过氧化物酶酶（HRP）蛋白质印迹检测的化学发光底物类型。使用 HRP 化学发光底物 一页中的表格，根据靶蛋白的丰度、包含靶蛋白的样品丰度、灵敏度水平和可用检测仪器类型，选择最适合的 HRP 化学发光底物。
不知道哪种底物适合您？使用化学发光底物选择指南根据您的研究需求选择适合的底物。
了解关于每种 SuperSignal 底物的更多信息
技术讲座
讲座标题：低丰度蛋白的Western Blot检测策略
在这个讲座中，针对低丰度蛋白检测常见的难点，我们介绍了从样品制备到印迹检测的优化策略，以提高结果的信噪比，获得理想的Western Blot数据。
AP 底物
Novex AP 化学发光底物
| 信号持续时间长 |
|---|
| 灵敏度：低皮克级 |
| 持续时间：超过 24 小时 |
| 推荐抗体稀释比（1 mg/ml 储备液）： 1°: 1:500-5,000 2°: 1:2,000-1:10,000 |
| 何时使用：对于PVDF 膜，使用单一底物 对于硝酸纤维素膜，需要将 Nitro Block II（单独出售）添加至底物 |
AP 底物的相关产品
| Thermo Fisher Scientific 产品 | 描述 | 订购 |
|---|---|---|
| Novex AP 化学发光底物增强剂（Nitro Block II） | Nitro-Block-II 的 20X 溶液需与 Novex AP 化学发光底物配合使用，在硝酸纤维素膜上探测印迹时，用于增加化学发光信号的强度 | WP20003 |
| WesternBreeze 显色试剂盒，抗兔 | 用于检测使用小鼠一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7104 |
| WesternBreeze 化学发光试剂盒，抗兔 | 用于检测使用兔一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7106 |
| WesternBreeze 化学发光试剂盒，抗山羊 | 用于检测使用山羊一抗转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上的蛋白质的完整试剂盒 | WB7108 |
碱性磷酸酶（AP）化学发光底物
对于基于碱性磷酸酶（AP，86 kDa）的蛋白质印迹检测，我们提供 CDP-Star 底物，其设计用于提供皮克级灵敏度并且与传统的 X-光胶片和基于 CCD 的成像系统相容。通过 AP 将 CDP-Star 去磷酸化，以产生亚稳定的二氧杂环丁烷酚盐阴离子中间体，该中间体在 475 nm 波长下分解并发射具有最大强度的光。发射光仅在酶 - 底物反应期间发生；因此，一旦酶周围的底物耗尽，信号输出将停止。 发射光可在 24-96 小时内保持稳定，允许多次曝光。
从单独的底物、Novex AP 化学发光底物或 WesternBreeze 化学发光免疫检测试剂盒中选择，该试剂盒包含分析应用所需的所有溶液，包括封闭溶液、一抗稀释剂、即用型二抗溶液、即用型化学发光底物、清洗溶液、培养盘、预切滤纸、聚酯片，以便在膜上形成均匀的底物显影。Novex AP 化学发光底物应与 Nitro Block II 结合用于硝酸纤维素膜。
CDP-Star 底物的发光机制。
硝酸纤维素膜为 1,2-二氧杂环丁烷底物的化学发光提供了低效环境，产生非常低的信号强度。Nitro-Block-II 膜增强剂增加了硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上的信号强度。Nitro-Block-II 增强剂在膜表面形成疏水环境，增加了化学发光强度。显示了 NitroBlock 增强剂处理对硝酸纤维素和 PVDF 膜的影响。若不使用 Nitro-Block 增强剂，则硝酸纤维素膜上的信号很弱，使检测无效或需要极长的曝光时间。使用 Nitro-Block 增强剂，可实现 10 至 45 分钟的短时间曝光。虽然 PVDF 膜不需要使用 Nitro-Block 增强剂，但使用 Nitro-Block 增强剂可使曝光时间缩短十倍。其使 PVDF 膜上的曝光时间非常短，蛋白质印迹检测的曝光时间为 15 秒至 15 分钟。
在硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上，通过 Nitro-Block 增强剂的短曝光时间增强化学发光信号。
产品说明书
应用指南和技术手册
从我们的套装试剂盒开始体验
SuperSignal West 底物套装试剂盒
| 套装 A |
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Pico PLUS (500mL) + 尝鲜装 Atto (20mL) 该套装试剂盒包括：
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| 套装 B |
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Femto (100 mL) + 尝鲜装 Atto (20 mL) 该套装试剂盒包括：
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化学发光Western Blot的图像捕获与分析
通常通过X光胶片或CCD数字成像系统来捕获化学发光Western Blot结果。X光胶片只能提供定性和半定量数据，是用于确认靶蛋白存在的传统手段。而CCD成像系统相较于胶片具有显著优势，包括可定量分析、即时捕获与分析图像、灵敏度和分辨率更高、并且具有更广的线性动态范围，已逐渐成为更多科研人员的可视化平台选择。
iBright 智能成像系统
使用iBright智能成像系统进行拍摄和分析，获取发表级Western Blot结果。这款高性能成像系统通过强大的硬件配置，先进的自动化技术，流畅简单的操作界面，为您带来全新成像体验 。
种类齐全且经过高级验证*的Western Blot抗体
我们针对蛋白质免疫印迹应用提供种类齐全的高品质Invitrogen™抗体，多种靶点和宿主类型可选。选择可靠的一抗和二抗，让印迹检测更有信心。
Invitrogen抗体
我们从10万种抗体库逐一进行高级验证，现在可以提供数千种适用于Western Blot的Invitrogen高级验证一抗，并将不断增加更多经过高级验证的抗体，以丰富蛋白免疫印迹一抗产品种类。我们的交叉吸附HRP二抗可帮助降低物种交叉反应性，并最大限度地降低背景。
*“验证”一词或其任何变形的使用仅指用于功能测试的研究用途抗体，旨在确认该抗体是否可用于指定研究技术。其不能确保产品已经过临床或诊断用途验证。
化学发光检测
当化学反应以光的形式释放时，可进行化学发光检测。催化化学发光反应生成可捕获信号的两种最常用标记酶是辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
| HRP 底物（辣根过氧化物酶） | AP 底物（碱性磷酸酶） | |
|---|---|---|
| 灵敏度 |
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| 信号生成 | 即时 | 信号逐渐增加，约30-60 分钟时最大 |
| 信号持续时间 | 长达 24 小时 | 24-96 小时 |
| 注意事项 | 与常用缓冲液相容，如 TBS 和 PBS | 与磷酸盐缓冲液不相容 |
| 何时使用 | 与HRP标记抗体或探针一起使用 | 与AP标记抗体或探针一起使用 |
仅供科研使用，不可用于诊断目的。