WB闭眼入组合：少一点“玄学”，多一点“可控”

WB全流程解析：产品怎么选

1）样品制备：裂解 + 蛋白酶抑制

样品质量是WB成功的起点，裂解不充分、目标蛋白降解或去磷酸化都会放大后续差异。建议将裂解试剂与蛋白酶抑制剂作为基础标配，减少“上游就变了”的不可控因素。
M-PER™ 哺乳动物蛋白提取试剂 #78501
- 专为贴壁和悬浮哺乳动物细胞设计，一步裂解、即用型配方，稳定、高效地获得高质量总蛋白样品。
Halt™ 蛋白酶抑制剂混合物（无EDTA，100X）#87785
- 含有六种优化的广谱抑制剂，专为兼容等电聚焦及各类去污剂裂解缓冲液而设计，能便捷高效地保护蛋白提取物免受内源性蛋白酶降解。
Pierce 蛋白酶抑制剂微型片剂 #A32953
- 该制剂具有改良的速溶配方，每片可配制 10 mL 溶液，不仅经济高效，还能直接兼容 Pierce BCA 检测及大多数基于去污剂的细胞裂解试剂。

图1. M-PER #78501试剂适用于多种哺乳动物细胞类型，包括常见的永生化细胞系（如 HeLa、CHO），较难处理的原代细胞（如神经元、心肌细胞）仍可提供客观的蛋白回收量。

2）定量：先定量，再上样

上样量不一致是“看起来有差异”的常见原因。用BCA体系先定量、再按统一质量上样，有利于让条带差异更真实地反映生物学变化，而非操作偏差。

Pierce™ BCA 蛋白检测试剂盒 #23227 / #23225
- 凭借其对去污剂的高度兼容性和卓越的灵敏度，能够准确、稳定地测定复杂裂解液中的总蛋白浓度，是蛋白定量分析的金标准方法。
Dilution-Free™ Rapid Gold BCA（免稀释，提升通量）#A55861 / #A55860

图2. Pierce Rapid Gold BCA 蛋白定量试剂兼具经典BCA法的准确性与Bradford法的速度。

3）电泳：预染Marker用于分子量与转印追踪

预染Marker能在电泳与转印过程中直观看到迁移与转印进度，帮助快速发现“跑偏/转偏/气泡”等问题。

PageRuler™ 预染蛋白分子量标准（10–180 kDa）#26617
蛋白分子量标准品以即用型规格提供，用于直接上样至凝胶；使用前无需加热、还原或添加上样缓冲液。是蛋白实验中可靠的多用途工具。

4）转印：选对膜孔径，降低穿膜或转印不足风险

蛋白从SDS-PAGE凝胶转到膜是WB关键步骤, 为后续化学发光检测提供低背景、高结合力的载体。一般孔径0.45 μm适配多数目标蛋白；小分子量蛋白或担心穿膜时可考虑0.2 μm。Pierce PVDF 转移膜 (0.45 μm) 由高质量的聚偏二氟乙烯制成，对蛋白质和核酸具有很高的结合能力。

PVDF 膜 0.45 μm #88518
PVDF 膜 0.2 μm #88520

5）检测：底物灵敏度分级，按靶标丰度“对号入座”

化学发光检测常见且易上手，覆盖从常规到超低丰度蛋白的检测需求，在 Marker 参照下实现不同曝光条件的可比性；从过去的Pierce到现在的赛默飞，SuperSignal系列化学发光底物一直被研究人员所信赖，在过去三年已经被主要学术期刊中的7,000多篇参考献引用过。建议按靶标丰度与抗体强弱选择底物：常规检测用Pico PLUS，低丰度或弱信号用Femto，减少重复曝光与反复优化。

SuperSignal™ West Pico PLUS #34580
SuperSignal™ West Femto（超敏）#34098CN

图3. 四种不同化学发光底物在相同实验条件下的性能对比，SuperSignal West Femto 在长时间内维持最强、最稳定的信号！

6）归一化：总蛋白染色让定量更稳

相比仅依赖单一内参蛋白，总蛋白归一化可降低内参随处理条件变化造成的误差，尤其适用于批间比较、多处理组对照或复杂信号通路研究。瞄准总蛋白归一化金标准，从源头避免内参变量烦恼。

No-Stain™ 免染型蛋白标记试剂 #A44449
- 10分钟共价标记，免脱色，胶和膜都能染，灵敏度达20 ng/条带，让每一次WB归一化都可靠、符合顶级发表要求。

图4. 总蛋白归一化是更可靠的金标准：使用No-Stain™试剂对 10-50 µg 的HeLa裂解液进行总蛋白归一化，其信号与上样量呈近乎完美的线性关系 (R² = 0.999)，远优于β-actin、GAPDH等传统内参（R²均低于0.95）。

查看WB闭眼入套餐详情

裂解及保护 → 蛋白定量 → 电泳与分子量判读 → 转膜 → 化学发光检测 → 归一化分析。确保每一步提供稳定、可靠的实验基础，让结果从“看得见”到“站得住”。

货号	产品名称	规格	数量	目录价	套装价
26617	PageRuler™ 预染蛋白分子量标准，10 至 180 kDa	10 x 250 µL	必选	3428元	1988元
87785	Halt™ 蛋白酶抑制剂混合物，无 EDTA (100X)	1 mL	5选1	1524元
A44449	No-Stain™ 免染型蛋白标记试剂	40反应		1505元
A55861	Pierce™ Dilution-Free™ Rapid Gold BCA Protein Assay	250 mL		1474元
23227	Pierce™ BCA 蛋白检测试剂盒	500 mL		1919元
34580	SuperSignal™ West Pico PLUS 化学发光底物	500 mL		3730元

货号	产品名称	规格	数量	目录价	套装价
26617	PageRuler™ 预染蛋白分子量标准，10 至 180 kDa	10 x 250 µL	必选	3428元	2666元
88518	PVDF 转印膜，0.45 µm，26.5 cm x 3.75 m	1 roll	7选1	7329元
88520	PVDF 转印膜，0.2 µm，26.5 cm x 3.75 m	1 roll		8331元
78501	M-PER™ 哺乳动物蛋白抽提试剂	250 mL		2886元
A32953	Pierce 蛋白酶抑制剂微型片剂	30 tablets		2208元
A55860	Pierce™ Dilution-Free™ Rapid Gold BCA Protein Assay	500 mL		2232元
23225	Pierce™ BCA 蛋白定量试剂盒	1 L		3088元
34098CN	SuperSignal™ West Femto 超敏化学发光底物	Each		3332元

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WB常见问题解答

Q1: 为什么“闭眼入”组合套装更适合高频WB实验室？

减少变量：关键耗材统一到同一套成熟产品链路，降低材料差异导致的信号波动与背景差异。
提升效率：减少临时补货、跨平台比价、替代品试错与重复优化，把时间用在实验设计与数据解读上。
增强复现：更容易形成标准操作（SOP）与可追溯记录，批间对比更可靠。按流程备货更清晰。

Q2：Pico PLUS 和 Femto 怎么选？选错的代价是什么？

建议按靶标丰度与抗体强弱选择：常规检测用 Pico PLUS，低丰度或弱信号用 Femto，可减少重复曝光与反复优化。选错常见后果就是“怎么都很淡/怎么都很脏”，时间耗在无效试错上。

Q3：Western blot 中应该选择 PVDF 膜还是硝酸纤维素膜？

PVDF 膜通常具有更高的蛋白结合能力和更好的机械强度，适合多次检测或高灵敏度实验；硝酸纤维素膜则背景较低，适合常规 Western blot 检测。Thermo Fisher 提供多种 Invitrolon™ PVDF Membranes 可满足不同实验需求。

Q4：为什么越来越多研究人员推荐使用总蛋白归一化？

单一内参蛋白（如 β-actin 或 GAPDH）的表达在某些实验条件下可能发生变化，从而影响定量准确性。使用 Pierce™ Total Protein Stain 进行总蛋白归一化，可以减少这种变量带来的影响，特别适用于多处理组或批次比较实验。

Q5：为什么 Western blot 没有检测到目标条带？

弱信号或无信号可能与样品蛋白含量不足、抗体浓度不合适、抗体活性降低或检测时间不足等因素有关。适当优化样品浓度和抗体条件通常可以改善信号检测。

Q6：Western blot 中出现多个条带是什么原因？

出现多个条带可能是由于蛋白降解、蛋白修饰、同源蛋白存在或抗体特异性不足造成的。优化样品制备条件、使用蛋白酶抑制剂或更换抗体可以帮助减少非特异条带。

Q7：Pico PLUS 和 Femto 怎么选？选错的代价是什么？