L-光反应-甲硫氨酸
L-光反应-甲硫氨酸
Thermo Scientific™

L-光反应-甲硫氨酸

Thermo Scientific Pierce L-光反应-蛋氨酸是 L-蛋氨酸的类似物,可在合成过程中掺入蛋白,然后光活化即可与细胞中的相互作用蛋白共价交联。L-光反应-蛋氨酸的特点:•体内标记—利用活细胞的正常细胞机制将光反应性基团掺入蛋白•体内交联—发现自然细胞环境中的相互作用蛋白•特异性提高—将相互作用蛋白质间的交联正确定位于它们蛋白质相互作用结构域的界面•高效回收—交联后细胞裂解物中的蛋白回收率达到 90%•兼容—可交联在多种细胞系(包括 HeLa、293T了解更多信息
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Thermo Scientific Pierce L-光反应-蛋氨酸是 L-蛋氨酸的类似物,可在合成过程中掺入蛋白,然后光活化即可与细胞中的相互作用蛋白共价交联。

L-光反应-蛋氨酸的特点:

体内标记—利用活细胞的正常细胞机制将光反应性基团掺入蛋白
体内交联—发现自然细胞环境中的相互作用蛋白
特异性提高—将相互作用蛋白质间的交联正确定位于它们蛋白质相互作用结构域的界面
高效回收—交联后细胞裂解物中的蛋白回收率达到 90%
兼容—可交联在多种细胞系(包括 HeLa、293T、COS7、U2OS、A549、A431、HepG2、NIH 3T3 和 C6)中表达的蛋白
易于使用—试剂在正常实验室光照下具有光稳定性,无需在暗处工作

Thermo Scientific L-光反应-蛋氨酸是 L-蛋氨酸的类似物,可在合成过程中内源性掺入蛋白的一级序列,然后紫外光 (UV) 活化即可与细胞自然环境中蛋白-蛋白相互作用结构域内的蛋白共价交联。该有力的方法能够在研究和表征的细胞中进行稳定和瞬时蛋白相互作用,无需在相互作用实验中使用完全外源的化学交联剂和相关试剂溶剂,这些试剂可能对所研究的细胞生物学产生不利影响。

当与不含蛋氨酸的特殊配方限制培养基联合使用时,光活化衍生物被细胞中的蛋白合成机制视为自然存在的氨基酸。因此,它可以在分解代谢和生长过程中取代蛋白一级序列中的蛋氨酸。光-蛋氨酸衍生物含有双吖丙啶环,当暴露于紫外光时激活,成为反应性中间体,可与邻近蛋白侧链和骨架形成共价键。培养细胞中含双吖丙啶的蛋白光活化可即时捕获细胞内自然相关的结合配偶体。在 SDS-PAGE 上,利用较低的迁移率检测交联蛋白复合物,然后进行 Western 印迹检测、体积排阻色谱、蔗糖密度梯度沉降或质谱分析。

资源:

光反应性氨基酸 FAQ

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仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细胞渗透性
描述L-光反应-甲硫氨酸
形式实心
标记方法化学标记、代谢标记
分子量157.17
聚乙二醇化
产品线Pierce™
数量100 mg
反应一部分双吖丙啶
运输条件环境
溶解度
间隔臂长0.0 Å
水溶性
化学反应性非选择性-NA (代谢标记)
可裂解
交联剂类型异型双功能团试剂
产品规格标准
产品类型交联剂
间隔子短 (<10 Å)
Unit SizeEach
内容与储存
接收后,在 4°C 下避光储存。

常见问题解答 (FAQ)

Apart from proteins, will the Photoreactive Amino Acids crosslink to other molecules?

Photoreactive amino acids are incorporated into proteins during synthesis; but upon UV activation, they can crosslink to other biomolecules within proximity.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

How stable are the Photoreactive Amino Acids in DMEM-LM?

Long-term stability of the photoreactive amino acids in media has not been determined but should be comparable to their natural analogs, if protected from light. For best results, store the photoreactive amino acids at -20°C as a dry compound. Just before use, add the photoreactive amino acids to the minimal volume of DMEM-LM supplemented with dialyzed serum.

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How long do I need to incubate the Photoreactive Amino Acids with my cells?

Incubate the photoreactive amino acids in DMEM-LM with cells for 24 hours. For proteins with high turnover, a minimum incubation of 8 hours is needed for detectable crosslinking levels. Incubation for longer than 24 hours might significantly affect cell growth or viability.

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My cells will not grow in DMEM, what other type of culture media can be used with the Photoreactive Amino Acids?

Some cells types can be adapted to grow in DMEM before using the DMEM-LM supplemented with the photoreactive amino acids. Currently we do not offer any other leucine- and methionine-depleted culture medium.

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Can I use the Photoreactive Amino Acids to crosslink peptides?

Peptides can be synthesized using the N-termini-protected (Boc or Fmoc) photoreactive amino acid derivatives.

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