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Phire 热启动 II DNA聚合酶用于快速 PCR |
快速 PCR 是一种与传统 PCR 相比缩短了循环时间的 PCR 技术。Thermo Scientific Phusion Flash 高保真 PCR 预混液和 Thermo Scientific Phire 热启动 II DNA 聚合酶有助于实现快速 PCR，因为与传统聚合酶相比，它们在每次结合事件中能够掺入更多的核苷酸。这种高持续合成能力带来了快速的延伸速率和更短的 PCR 循环时间。
快速循环 PCR 酶形式
* 含有绿色缓冲液，该缓冲液包含密度试剂和两种示踪染料，可将聚合酶链式反应（PCR）产物直接上样至凝胶。
用于快速 PCR 的 Phire 热启动 II DNA 聚合酶
Phire 热启动 II DNA 聚合酶是一种由亲合体介导的热启动 PCR 酶，具有更快的反应速度、更高的产量以及更长的扩增产物长度。它与双链 DNA（dsDNA）结合结构域相融合，这增加了酶的持续合成能力，能够实现较短的延伸时间（10-15 s/kb），并且与标准的热启动 Taq DNA 聚合酶相比，有助于提高产量。
Phire 热启动 II DNA 聚合酶的特点
- 具备快速热启动功能的快速酶（无需单独的激活步骤）
- 对抑制剂具有高耐受性
- 与热启动 Taq DNA 聚合酶相比，产量更高，扩增产物更长
- 可使用绿色反应缓冲液形式，PCR 产物可直接上样至凝胶
快速循环 PCR
Phire 热启动 II DNA 聚合酶的延伸时间为10 s/kb，无需单独的激活步骤，并且允许将 PCR 产物直接加载到凝胶上。由于这些特性，使用 Phire 热启动 II DNA 聚合酶的 PCR 实验方案比使用 Taq DNA 聚合酶的方案要快得多（图 1）。
图1. 使用 Phire Hot Start II DNA 聚合酶的短循环时间。从人类基因组 DNA 中扩增600 bp 片段时，使用五种不同的热启动 DNA 聚合酶进行对比。使用Phire Hot Start II DNA 聚合酶的 PCR 流程，其完成速度比采用化学或抗体热启动技术的 Taq DNA 聚合酶（供应商A至D）快四倍。绿色缓冲液通过减少移液步骤和直接凝胶上样进一步缩短实验时间。
绿色反应缓冲液实现直接凝胶上样
Phire 绿色热启动 II DNA聚合酶及PCR预混液随附5倍浓缩的绿色反应缓冲液，该缓冲液含有密度试剂和两种追踪染料，可支持 PCR 产物直接进行凝胶上样（图2）。
图2. 含绿色反应缓冲液的扩增体系。 (A) 电泳前的情况。(B) 电泳后的蓝色和黄色示踪染料情况。
短时间内实现超高产量
Phire 热启动 II DNA 聚合酶整合了一个双链 DNA（dsDNA）结合结构域，这使得循环时间缩短，并提高了扩增产物的产量。无论是使用 Phire 热启动 II 单酶（图 3）还是 PCR 预混液形式（图 4），都能实现高产量。
图 3. Phire 热启动 II DNA 聚合酶实现高靶标产量。使用不同的热启动 DNA 聚合酶对人类组织蛋白酶 K 基因的一个 1.5 kb 片段进行扩增。Phire 热启动 II DNA 聚合酶仅在 29 分钟内就扩增出了大量的特异性 PCR 产物。相比之下，热启动 Taq DNA 聚合酶的 PCR 实验方案耗时要长得多，并且产物产量更低。
图 4. Phire 热启动 II PCR 预混液实现出色的靶标产量。使用不同的热启动 PCR 预混液对人类 β- 珠蛋白基因的一个 2 kb 片段进行扩增。Phire 绿色热启动 II PCR 预混液在 41 分钟内就产生了高产量的特异性产物，而其他预混液产量较低，并且在大多数情况下，需要更长时间的实验方案。
与热启动 Taq DNA 聚合酶相比可扩增更长片段
使用 Phire 热启动 II 单酶和 PCR 预混液形式，可分别扩增长达 7.5 kb 的基因组 DNA（gDNA）和 20 kb 的噬菌体 DNA。Phire 热启动 II DNA 聚合酶能够扩增出比标准热启动 Taq DNA 聚合酶更长的靶标片段。
图 5. Phire 热启动 II DNA 聚合酶可获得更长的扩增产物。使用三种不同的热启动 DNA 聚合酶对五个不同长度的基因组 DNA 片段进行扩增。Phire 热启动 II DNA 聚合酶能高产扩增出全部五个片段的产物，而其他热启动 Taq DNA 聚合酶的产量明显较低，且无法扩增出 7.5 kb 的片段。1：0.6 kb，2：1.0 kb，3：1.5 kb，4：2.7 kb，5：7.5 kb
图 6. Phire 热启动 II PCR 预混液可获得更长的扩增产物。使用热启动 PCR 预混液对五个不同长度的基因组 DNA 片段进行扩增。Phire 绿色热启动 II PCR 预混液能高产扩增出全部五个片段的产物。其他热启动 PCR 预混液的产量较低或无产物生成，有些还会扩增出非特异性产物。1：0.47 kb，2：1.1 kb，3：1.7 kb，4：3.5 kb，5：7.5 kb
快速循环 PCR
Phire 热启动 II DNA 聚合酶的延伸时间为10 s/kb，无需单独的激活步骤，并且允许将 PCR 产物直接加载到凝胶上。由于这些特性，使用 Phire 热启动 II DNA 聚合酶的 PCR 实验方案比使用 Taq DNA 聚合酶的方案要快得多（图 1）。
图1. 使用 Phire Hot Start II DNA 聚合酶的短循环时间。从人类基因组 DNA 中扩增600 bp 片段时，使用五种不同的热启动 DNA 聚合酶进行对比。使用Phire Hot Start II DNA 聚合酶的 PCR 流程，其完成速度比采用化学或抗体热启动技术的 Taq DNA 聚合酶（供应商A至D）快四倍。绿色缓冲液通过减少移液步骤和直接凝胶上样进一步缩短实验时间。
绿色反应缓冲液实现直接凝胶上样
Phire 绿色热启动 II DNA聚合酶及PCR预混液随附5倍浓缩的绿色反应缓冲液，该缓冲液含有密度试剂和两种追踪染料，可支持 PCR 产物直接进行凝胶上样（图2）。
图2. 含绿色反应缓冲液的扩增体系。 (A) 电泳前的情况。(B) 电泳后的蓝色和黄色示踪染料情况。
短时间内实现超高产量
Phire 热启动 II DNA 聚合酶整合了一个双链 DNA（dsDNA）结合结构域，这使得循环时间缩短，并提高了扩增产物的产量。无论是使用 Phire 热启动 II 单酶（图 3）还是 PCR 预混液形式（图 4），都能实现高产量。
图 3. Phire 热启动 II DNA 聚合酶实现高靶标产量。使用不同的热启动 DNA 聚合酶对人类组织蛋白酶 K 基因的一个 1.5 kb 片段进行扩增。Phire 热启动 II DNA 聚合酶仅在 29 分钟内就扩增出了大量的特异性 PCR 产物。相比之下，热启动 Taq DNA 聚合酶的 PCR 实验方案耗时要长得多，并且产物产量更低。
图 4. Phire 热启动 II PCR 预混液实现出色的靶标产量。使用不同的热启动 PCR 预混液对人类 β- 珠蛋白基因的一个 2 kb 片段进行扩增。Phire 绿色热启动 II PCR 预混液在 41 分钟内就产生了高产量的特异性产物，而其他预混液产量较低，并且在大多数情况下，需要更长时间的实验方案。
与热启动 Taq DNA 聚合酶相比可扩增更长片段
使用 Phire 热启动 II 单酶和 PCR 预混液形式，可分别扩增长达 7.5 kb 的基因组 DNA（gDNA）和 20 kb 的噬菌体 DNA。Phire 热启动 II DNA 聚合酶能够扩增出比标准热启动 Taq DNA 聚合酶更长的靶标片段。
图 5. Phire 热启动 II DNA 聚合酶可获得更长的扩增产物。使用三种不同的热启动 DNA 聚合酶对五个不同长度的基因组 DNA 片段进行扩增。Phire 热启动 II DNA 聚合酶能高产扩增出全部五个片段的产物，而其他热启动 Taq DNA 聚合酶的产量明显较低，且无法扩增出 7.5 kb 的片段。1：0.6 kb，2：1.0 kb，3：1.5 kb，4：2.7 kb，5：7.5 kb
图 6. Phire 热启动 II PCR 预混液可获得更长的扩增产物。使用热启动 PCR 预混液对五个不同长度的基因组 DNA 片段进行扩增。Phire 绿色热启动 II PCR 预混液能高产扩增出全部五个片段的产物。其他热启动 PCR 预混液的产量较低或无产物生成，有些还会扩增出非特异性产物。1：0.47 kb，2：1.1 kb，3：1.7 kb，4：3.5 kb，5：7.5 kb
用于快速 PCR 的其他酶
Phusion Plus DNA 聚合酶是一种具有通用退火特性的高保真 DNA 聚合酶。这一创新特性允许在同一实验方案中同时循环扩增多个 DNA 靶标。
Phire 热启动 II DNA 聚合酶使用手册
其他资源
学习资源
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。