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用凝集素荧光偶联物成像
荧光凝集素已用于定位和检测胞表面或胞内糖复合物，从而使这些凝集素成为用于显微术或流式细胞术的通用主要检测试剂。凝集素可用于偶联至种类广泛的荧光染料，包括明亮、光稳定的 Alexa Fluor 染料，从而提高了设计多色实验用于成像和流式细胞术的灵活性。专用偶联程序用于优化与凝集素结合的染料分子的数目，保持明亮信号，同时保留独立凝集素的结合特异性。还通过移除未偶联的荧光物质和无活性凝集素维持高信噪比。
凝集素介绍
凝集素是对 寡糖或与其他分子接合的糖基团高度特异的糖类结合蛋白。它们可以引起特定细胞凝集或糖复合物沉淀。凝集素参与调节细胞黏附、糖蛋白合成和血液蛋白质水平，同时在免疫系统中发挥作用。
寡糖存在遍及细胞表面，但也可能发现其在细胞内部呈结合。特定的寡糖及它们的分布可能因细胞类型和细胞器而异。因对自身靶标的特异性，凝集素结合各种标记方法使用时，可以起到鉴定细胞类型或细胞组分的作用。荧光衍生物或偶联的凝集素已用于定位和检测胞表面或胞内糖复合物，从而使它们成为用于显微术或流式细胞术的通用主要检测试剂。 此外，往往依据癌细胞表面糖蛋白的组成确定各类型癌细胞的细胞分化，这使凝集素成为检测这些不同细胞表型的有用标志物。
凝集素及其特性选择指南
| 凝集素 | 偶联物 | 来源 | 首选的糖特异性 | 血型特异性 | 有丝分裂活性 |
|---|---|---|---|---|---|
| 落花生（花生）凝集素 (PNA) | Alexa Fluor 488 | 花生 | T 抗原 (M, N) | ß-gal(1->3)galNAc | 否 |
| Alexa Fluor 568 | |||||
| Alexa Fluor 594 | |||||
| Alexa Fluor 647 | |||||
| 伴刀豆球蛋白 A (Con A) | Alexa Fluor 350 | 直生刀豆（刀豆） | 神经氨酸酶处理后非特异性 | α-man, α-glc | 是 |
| Alexa Fluor 488 | |||||
| Alexa Fluor 594 | |||||
| Alexa Fluor 633 | |||||
| Alexa Fluor 647 | |||||
| Texas-Red | |||||
| 四甲基罗丹明 (TRITC) | |||||
| 伴刀豆球蛋白 A (ConA)，琥珀酰化 | Alexa Fluor 488 | 直生刀豆（刀豆） | 神经氨酸酶处理后非特异性 | α-man, α-glc | 是 |
| 双花扁豆凝集素 (DBA) | 荧光素 (FITC) | 硬皮豆 | A1 | α-GalNAc | 否 |
| 大豆 (大豆) 凝集素 (SBA) | Alexa Fluor 594 | 大豆 | A>O>B | α>ßGalNAc | 是 |
| Alexa Fluor 647 | |||||
| 凝丝豆 凝集素 (GSL-II) | Alexa Fluor 488 | 非洲灌木豆科植物 | b A1>> | α 或 ß GalNAc | 否 |
| Alexa Fluor 594 | |||||
| Alexa Fluor 647 | |||||
| 凝丝豆 含 B 亚基的同工凝集素 GS-IB4（GS-IB4、GSL-IB4） | Alexa Fluor 488 | 非洲灌木豆科植物 | B | αGal | 否 |
| Alexa Fluor 568 | |||||
| Alexa Fluor 594 | |||||
| DyLight 594 | |||||
| Alexa Fluor 647 | |||||
| 生物素-XX 偶联物 | |||||
| 盖罩大蜗牛凝集素 (HPA) | Alexa Fluor 488 | 食用蜗牛 | A | galNAc | 否 |
| Alexa Fluor 647 | |||||
| 兵豆凝集素 (LCA) | 荧光素 (FITC) | 扁豆 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | αMan, αGlc | 是 |
| 翅荚百脉根凝集素 (LTL) | 荧光素 (FITC) | 四棱豆 | O
| αFuc | 是 |
| 番茄凝集素（LEL、LEA、TL） | DyLight 488 | 西红柿 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | (glcNAc)3. | 是 |
| DyLight 594 | |||||
| DyLight 649 | |||||
| 荧光素 (FITC) | |||||
| Texas Red | |||||
| 菜豆凝集素 (PHA-L) | Alexa Fluor 488 | 红腰豆 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | Galß4GlcNAcß6(GlcNAc ß2Manα3)Manα3 | 是 |
| Alexa Fluor 594 | |||||
| 蓖麻凝集素 I（RCA I、RCA 120） | 荧光素 (FITC) | 蓖麻子 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | Gal | 否 |
| 西洋接骨木凝集素（SNA、EBL） | 荧光素 (FITC) | 接骨木 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | Neu5Acα6Gal/GalNAc | 否 |
| 荆豆凝集素 I (UEA I) | 荧光素 (FITC) | 荆豆 | o>A2 | αFuc | 否 |
| 麦胚凝集素 (WGA) | Alexa Fluor 350 | 麦胚 | A, B, O | GlcNAc | 是 |
| Alexa Fluor 488 | |||||
| Alexa Fluor 555 | |||||
| Alexa Fluor 594 | |||||
| Alexa Fluor 633 | |||||
| Alexa Fluor 647 | |||||
| Alexa Fluor 680 | |||||
| Oregon Green 488 | |||||
| 四甲基罗丹明 | |||||
| Texas Red-X | |||||
| 荧光素 | |||||
| 采样器套件 | |||||
| 多花紫藤凝集素（WFA、WFL） | 荧光素 (FITC) | 日本紫藤 | 神经氨酸酶处理后非特异性 | GlcNAc | 否 |
荧光凝集素成像示例
伴刀豆球蛋白 A 偶联物
伴刀豆球蛋白 A (Con A) 是细胞生物学中广泛使用的荧光凝集素标志物，选择性结合于 α‑α 吡喃甘露糖基残余物和 α‑葡糖基残余物 （图 1）。存在 Con A 的几种荧光标志物，并且它们用于各种应用，包括定位癌基因产物 、胞内酶、病毒蛋白和细胞骨架组分。
图 1. 经 Alexa Fluor® 488 伴刀豆球蛋白 A、Alexa Fluor® 594 麦胚凝集素和 Hoechst 3334 核酸染液染色的骨肉瘤细胞。固定并透化的骨肉瘤细胞，经荧光凝集素 Alexa Fluor® 488 伴刀豆球蛋白 A (Con A) 货号 C11252）和 Alexa Fluor® 594 麦胚凝集素 (WGA) （货号 W11262）同时染色。Con A 选择性结合 α-吡喃葡萄糖基残余物，而 WGA 选择性结合唾液酸和 N-乙酰乙酰葡糖胺基残余物。用蓝色荧光 Hoechst 33342 核酸染液复染胞核。使用适用于 Texas Red® 染料、荧光素与 DAPI 的带通滤光片组采集像。
麦胚凝集素偶联物
小麦胚芽凝集素 (WGA) 是细胞生物学中另一种广泛使用的荧光凝集素标志物，选择性结合于 N‑乙酰葡糖胺残余物和 N‑乙酰神经氨酸（唾液酸）残余物（图 2）。类似于伴刀豆球蛋白 A，WGA 用于定位癌基因产物、特定 胞内酶、病毒蛋白和细胞骨架组分。
WGA 偶联物也可以用作细菌细胞壁肽聚糖、几丁质和软骨糖胺聚糖的凝集素标志物。已证明 WGA 偶联物着染革兰氏阳性菌，不着染非革兰氏阴性细菌。
图 2. 小鼠肠横截面的多色荧光图像。用 Alexa Fluor 568 鬼笔环肽可视化刷状缘中普遍存在的丝状肌动蛋白。用蓝色荧光 Alexa Fluor 350 麦胚凝集素偶联物检测 杯状细胞黏液。用 SYTOX Green 核酸染液着染胞核。
落花生（花生）偶联物
从花生分离的落花生凝集素特异性结合糖蛋白的末端 β-半乳糖残基 （图 3）。神经氨酸酶处理后，已证明 PNA 结合人红细胞。由于 PNA 结合位点泛在于人组织中，因此染色样式会因组织类型而异。
图 3. 小鼠睾丸横截面的多色荧光图像。使用凝集素 PNA 的绿色荧光 Alexa Fluor 488 偶联物检测世界精子。肌动蛋白丝用红色荧光 Alexa Fluor 568 鬼笔环肽可视化。用蓝色荧光 DAPI 着染胞核。
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。