使用Cells-to-C_T试剂盒的
生物制药药物发现工作流程

反转录定量 PCR（RT-qPCR）凭借其精确性、灵敏度和定量能力，已成为生物制药行业不可或缺的技术手段，助力确保产品安全、有效且高质量。RT-qPCR 是生物制药研发的重要支柱。从生物标志物发现到候选药物筛选，这一高灵敏度、高可靠性的工具可实现定量基因组分析，应用范围广泛。

在 RT-qPCR 过程中，Invitrogen Cells-to-CT 技术可直接利用细胞裂解物进行反转录和后续 qPCR 分析，无需在扩增前进行 RNA 纯化。这一技术显著优化了基因表达分析流程，最终大幅提升工作效率。

• 减少操作步骤——无需传统 RNA 提取步骤，降低实验流程中的步骤数与复杂度
• 时间效率——通过省去 RNA 纯化步骤提升效率，快速进入 RT-qPCR 阶段
• 尽可能减少样本损失——直接将细胞处理为 cDNA，减少在 RNA 提取过程中可能发生的样本损失
• 易用性——即使缺乏 RNA 处理经验的研究人员也能轻松掌握的简化方案

TaqMan Cells-to-C_T Express 工作流程概述。样本制备（细胞裂解）时间仅需 5 分钟。从样本到得出结果耗时不到 90 分钟。完整工作流程步骤包括：

1. 清洗细胞并加入裂解液
2. 将裂解物转移至反转录反应板
3. 反转录
4. 将 cDNA 转移至 qPCR 反应板
5. qPCR

• 减少试剂与塑料使用量——降低对 RNA 提取试剂和塑料耗材的需求，有助于减少整体实验成本并减少塑料废弃物。
• 减少有害废弃物——无需使用乙醇、2-巯基乙醇、硫氰酸胍、盐酸胍或其他离液盐进行 RNA 制备。

产生的塑料废弃物对比。使用（A）Cells-to-CT Express 试剂盒与（B）传统柱式 RNA 提取方法所产生的塑料废弃物对比。

• 可扩展性——易于扩展，适应从小型研究到大型临床试验的不同样本规模。
• 高通量处理能力——支持多样本的高通量处理，满足大规模研究需求。
• 快速处理——细胞裂解液的快速处理有助于保持 RNA 的完整性，降低降解风险。

手动方法与自动化方法所得平均 C_T 值对比。柱形图代表 192 次重复实验的平均值 ± 标准差。对于 ACTV 基因和 CDK4 基因，自动化方法与手动方法得出的 CT 值几乎完全一致。

了解更多关于 RT-qPCR 工作流程自动化的信息。

应用说明：TaqMan Cells-to-C_T Express 试剂盒：适用于高通量基因表达分析的自动化友好型产品

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Use 使用 Cells-to-C_T 选择工具

鉴于 RT-qPCR 操作简便且结果可靠，其优势可应用于几乎所有生物制药研究模式的开发流程中。具体应用示例包括：

• 基因表达分析——分析与药物靶点、通路及作用机制相关的基因表达情况，助力理解药物对生物系统的影响。
• 拷贝数变异（CNV）分析——评估用于生物制剂生产的细胞系中的基因拷贝数变异，以确保遗传稳定性与一致性。
• 单核苷酸多态性（SNP）基因分型——能够检测并定量 DNA 序列中特定的单核苷酸多态性。研究人员可通过该分析识别特定遗传变异 —— 这些变异可能使人易患某种疾病，或影响药物靶点、药物代谢通路及药物转运机制。
• 病毒滴度与载体定量——对基因治疗中使用的病毒载体进行定量，确保生产过程中剂量准确且产品一致性达标。
• 残留 DNA 检测——检测并定量生物制剂中的宿主细胞残留 DNA，保障产品安全性并符合监管标准。
• 病原体检测与外源因子检测——对细胞培养物、原材料及最终产品中的微生物污染进行筛查，这对维持生物制药产品的无菌状态与安全性至关重要。
• 生物标志物识别与验证——识别并验证可预测药物反应、疗效及安全性的遗传生物标志物，为个体化医疗的研发提供支持。
• 药代动力学与药效动力学（PK/PD）研究——在药物开发测试研究中，随时间监测药物浓度及其生物效应，以理解新药的药代动力学与药效动力学特征。研究通常会重点关注吸收、分布、代谢、排泄（ADME）相关分析。这些研究可提供药物在体内行为的关键信息，对理解药物疗效与安全性至关重要。
• 稳定性研究——长期监测细胞库及最终产品的遗传稳定性，确保产品长期的一致性与可靠性。