使用反转录实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 对培养细胞进行基因表达分析的完整工作流程

Cells-to-CT products, including 4 vials, 2 buffer bottles, and the kit box

Cells-to-CT试剂盒使您不需进行RNA纯化就能直接从细胞中得到实时定量RT—PCR结果。 这些试剂盒提供了无与伦比的基因表达和microRNA分析性能，包括siRNA诱导的mRNA敲除检测。Cells-to-CT试剂盒适用于TaqMan方法和SYBR Green方法。

  • 极其简单且快速——一般在10分钟内完成96个样本的制备用于RT-qPCR
  • 无需繁琐的RNA纯化——无需使用分离柱、加热、离心或样本转移
  • 出众的性能——可以从10–100，000个细胞中获得一致的准确性、可重复性和灵敏度
  • 已经过验证的优质试剂盒工作流程——已经过预先优化的全套高效试剂，即取即用

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本页内容

Cells-to-CT 试剂盒的优势

  • 非凡的易用性和速度—10  分钟内即可获得 96 个用于 RT-qPCR 的样品
  • 跳过 RNA 纯化——不需要纯化柱、加热或离心
  • 优异的性能——经过精心设计能够以一致的准确性、重现性和高灵敏度分析 1–100,000 个细胞
  • 经过分析验证的工作流程——经过预先优化的全套高效试剂，开箱即用

Cells-to-CT试剂盒选择指南

 提供检测化学方法获得结果的时间（从细胞裂解到生成 qPCR 结果)工作范围基因表达灵敏度
Cells-to-CT两步法试剂盒SYBR Green* 和 TaqMan** 形式2 小时10-100,000 个细胞中至高等水平定量
Cells-to-CT一步法试剂盒SYBR Green* 和 TaqMan** 形式35-85 分钟10-100,000 个细胞中等水平定量
Fast Advanced Cells-to-CT 两步法试剂盒SYBR Green* 和 TaqMan** 形式80-95 分钟10-100,000 个细胞中至高等水平定量
Express Cells-to-CT 两步法只有 TaqMan** 形式70-85 分钟10-100,000 个细胞中至高等水平定量
CellsDirect 试剂盒只有 TaqMan** 形式40-60 分钟1-10,000 个细胞高等水平定量
Single Cell-to-CT试剂盒只有 TaqMan** 形式3小时1-10 个细胞高等水平定量
* 基于 SYBR Green 的检测使用 SYBR Green 染料（dsDNA 结合染料）来检测 PCR 过程中积聚的 PCR 产物。基于 SYBR Green 的检测分析需要设计并验证引物，以确保特异性。特异性和重现性取决于模板质量、引物设计和优化。
** 基于 TaqMan 的检测使用靶基因特异性的荧光探针来检测 PCR 过程中积聚的目标片段。基于 TaqMan 的检测灵敏度通常比基于 SYBR Green 的检测高。


一步法与两步法 Cells-to-CT 试剂盒的比较

以下情况，您可以选择一步法试剂盒：

  • 您的样本量较多，有一个或多个靶点
  • 不保存 cDNA
  • 使用液体工作站

以下情况，您可以选择两步法试剂盒：

  • 从 cDNA 中定量多个靶标
  • 需要更高的灵敏度检测稀有转录本
  • 保存 cDNA
  • 使用液体工作站

了解更多关于选择一步法或两步法 qPCR 试剂盒的信息


TaqMan 形式与 SYBR Green 形式的比较

选择 TaqMan 形式：

  • 提高时间效率
  • 更高的特异性和灵敏度
  • 进行多重检测

选择 SYBR Green 形式：

  • 节省成本
  • 使用定制引物时 

进一步了解如何选择检测方法


CellsDirect、Fast Advanced Cells-to-CT、Cells-to-CT Express 试剂盒与传统 Cells-to-CT 试剂盒的对比

Cells-to-CT Express 试剂盒：直接从培养细胞裂解物进行反转录 (RT) 和 qPCR 反应，无需分离 RNA

使用 Express 技术，Cells-to-CT 已经变得更加简单，只需一步即可完成细胞裂解，无需添加终止液。在该工作流程中，使用 Express 裂解液裂解 10–100,000 个培养细胞（贴壁细胞或悬浮细胞)。在 Express 裂解液中可选择添加 Invitrogen ezDNAse，以便在细胞裂解过程中去除基因组 DNA。在室温下孵育 5 分钟后，裂解物可直接使用 Invitrogen SuperScript IV VILO 进行反转录。反转录 (RT) 反应完成后，使用 TaqMan Fast Advanced 预混液和 TaqMan 基因表达检测试剂盒进行 qPCR 分析。

表达范围广泛的各种基因均能实现一致的结果

C2CT Express 与柱法纯化 RNA 的比较

图 1.使用 TaqMan 阵列卡的 96 次检测数据，比较 TaqMan Cells-to-CT Express 试剂盒与使用纯化 RNA 的传统方法的性能。从 10,000 个 HeLa 细胞中获得的裂解物。

灵敏度和准确性均高于传统离心柱纯化 RNA，细胞样本量较低时优势尤为明显

C2CT Express CT 值较低

图 2.10-100,000 个 HeLa 细胞的裂解物样本显示，其 CT 值低于传统离心柱 RNA 纯化方法。使用细胞直接裂解法不会造成 RNA 的损失。

Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒：直接从细胞获得实时 qPCR 结果

使用 Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒无需进行 RNA 纯化——使用反转录实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 直接从培养细胞样本中获得相对基因表达结果。该试剂盒采用独特的方法裂解培养细胞，同时去除基因组 DNA (gDNA) 并保持 RNA 的完整性，其包含反转录 (RT) 试剂用于 cDNA 合成，以及 TaqMan 或 SYBR Green 预混液用于实时荧光定量 PCR 分析。

Fast Advanced Cells-to-CT 两步法试剂盒较传统 RNA 纯化方法更快速、更方便，且不影响灵敏度（图 3）。由于工作流程以细胞裂解为基础，因此使用 Cells-to-CT试剂盒不会造成任何 RNA 损失。使用传统的 RNA 纯化方法时，由于过滤器或磁珠洗脱不充分，始终会损失少量的 RNA。因此，当使用Cells-to-CT试剂盒处理样本时，与使用 RNA 纯化流程处理相同样本的结果相比，在检测少量细胞样本 (10–1,000 个细胞）中稀有 RNA 的能力更加出色（图 4）。这一点，结合终止液的优点，使 Cells-to-CT工作流程比竞争对手试剂盒的灵敏度更高，可用于检测高丰度及低拷贝数的转录本。

图 3.TaqMan Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒与其他试剂盒的灵敏度比较。遵照各试剂盒的实验方案裂解 104 个细胞。在每种试剂盒的反转录试剂 (RT) 中加入最高量的裂解液（Cells-to CT 和 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒为45%；其他供应商的产品为 10%）。然后将 25% 的 转录试剂 (RT) 加入磷酸二酯酶 TaqMan Array 的 qPCR 反应中，使用各试剂盒中的 qPCR 预混液。Fast Advanced Cells-to CT试剂盒较早期的 Cells-to-CT 试剂盒平均低 0.5 Ct，较其他供应商的试剂盒低 3.6 Ct（灵敏度较其他供应商的试剂盒高 11 倍）。

Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒对 HepG2 细胞中基因表达结果与传统 Cells-to-CT 试剂盒和竞争供应商的试剂盒的柱状比较图

图 4.检测比较。遵照各试剂盒的实验方案裂解 104 个 HepG2 细胞。在每种试剂盒的反转录试剂 (RT) 中加入最高量的裂解液（Cells-to CT 和 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒为45%；其他供应商的产品为 10%）。然后在其他供应商试剂盒的 qPCR 反应中加入 25% 的反转录试剂 (RT)；在 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒的 qPCR 反应中加入 30%，在 Power SYBR 试剂盒中加入 45%。分析 10 种不同的基因。大多数基因在该细胞系中未检测到。在检测到的基因中，对于大多数基因，Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒的 Ct值低于其他试剂盒。

查看 Huh7 细胞的比较数据

CellsDirect: 直接从细胞中获得实时 qPCR 结果

  • 提高灵敏度—无 RNA 分离步骤，防止出现样本损失和 PCR 抑制；使用 SSIII 可在低至一个细胞或一次反应中实现出色的灵敏度
  • 节省大量成本—手动操作时间要低于 RNA 纯化试剂盒，而且还缩减了成本
  • 稳定的 qPCR 结果—实时检测 1-10,000 个细胞的靶标
  • 多功能性—与多种细胞系和激光捕获显微切割 (LCM) 技术制备的样本兼容

CellsDirect qPCR 试剂盒可直接从细胞获得高灵敏度、高特异性的实时 qPCR 结果，无需进行 RNA 纯化步骤，每次反应只需不到 10,000 个细胞，最少只需要一个细胞。CellsDirect 技术使用少量的样本实现最高的灵敏度（图 5）。

 

图 5.CellsDirect qPCR 试剂盒最少可对一个细胞样本进行高灵敏度检测。根据 CellsDirect 实验方案裂解并重悬 HeLa 细胞。10倍连续稀释细胞裂解液，从 10,000 个细胞到 1 个细胞。在 ABI PRISM 7700 仪器上，使用 TaqMan 探针和含 ROX 的 CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒检测低丰度靶标 RRKCA。根据标准曲线 (未显示) 得出的效率为 97%，R² =0.998。

CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒集高灵敏度、出色的便捷性和高通量等优势为一体。使用 CellsDirect 一步法试剂盒，只需将细胞裂解物直接加入您的 qPCR 反应混合物中，将其放入实时定量仪器中，即可开始使用。这些试剂盒可用于 LCM 技术采集的样本的基因表达检测（图 6)。

图 6.CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒为 LCM 样品提供灵敏的结果。LCM 样本的 CellsDirect RNA 纯化表明，一步法试剂盒足够灵敏，可以获得样本量少于 100 个细胞的结果。

订购 CellsDirect 重悬和裂解缓冲液

Cells-to-CT试剂盒：直接从细胞获得实时 qPCR 结果

Cells-to-CT 试剂盒提供完整的工作流程，可以直接从培养细胞进行反转录实时荧光定量PCR (RT-qPCR) 分析，无需 RNA 纯化。该试剂盒采用独特的方法裂解培养细胞，同时去除基因组 DNA (gDNA) 并保持 RNA 的完整性，其包含反转录 (RT) 试剂用于 cDNA 合成，以及 TaqMan 或 SYBR Green 预混液用于实时荧光定量 PCR 分析。

Cells-to-CT 试剂盒的所有组分都经过了优化，用于获得一致且稳定的实验结果。这样可以尽可能减少组装单独的样品制备和反转录实时荧光定量 PCR (RT-PCR) 预混液过程中可能出现的不确定性。

为了增加质量保证，Cells-to-CT 1-Step TaqMan 试剂盒已通过 TaqMan 基因表达试验验证，Cells-to-CT 1-Step Power SYBR Green 试剂盒已通过一组常见基因靶标引物验证。两者均表现出与纯化 RNA 相当的性能（图 7）。

图 7.Cells-to- T 试剂盒的灵敏度和有限靶序列的检测。(A) 使用裂解液和纯化的 RNA 进行基因表达检测的灵敏度对比。使用 Cells-to-CT 1-Step TaqMan 试剂盒处理 HeLa 细胞 （10–100,000 个细胞），或者使用 RNA 离心柱法纯化 RNA，重复进行三次。每组样本在 7900HT 实时荧光定量 PCR 系统上进行实时 RT-PCR 分析，检测 Cells-to-CT 对照试剂盒中的 XENO 和 ACTB。(B) 有限靶序列的检测。向 10,000 个 HeLa 细胞中加入越来越多的 NIH3T3 细胞（小鼠）。使用 TaqMan 基因表达 Cells-to-CT 试剂盒（两步法流程）或 RNA 离心柱法纯化试剂对细胞进行处理，重复进行三次。所有样本在 7900HT Fast 实时荧光定量 PCR 系统上进行小鼠特异性基因 (B2M) 和人类特异性基因 (TKT) 反转录，重复三次。

TaqMan Cells-to-CT 基因表达试剂盒与市售其他裂解试剂盒和纯化 RNA 的性能对比。每次裂解反应使用 100–100,000 个细胞进行检测。TaqMan Cells-to-CT 试剂盒方案的灵敏度与使用纯化 RNA 方案的灵敏度相当，并且超过了其他供应商的产品（图 8）。

图 8.使用 Cells-to-CT 试剂盒获得的裂解液在 TaqMan 基因表达检测中获得了较高的灵敏度。使用传统 RNA 纯化方法、Taqman 基因表达 Cells-to-CT 试剂盒或其他供应商 Q 和 S 的裂解方法处理 Hela 细胞（100-100,000 个细胞）。每个试剂盒使用最大推荐样本量进行反转录反应，使用 PPIA TaqMan 基因表达检测试剂盒进行实时荧光定量 PCR 反应，重复进行三次。

Express

Cells-to-CT Express 试剂盒：直接从培养细胞裂解物进行反转录 (RT) 和 qPCR 反应，无需分离 RNA

使用 Express 技术，Cells-to-CT 已经变得更加简单，只需一步即可完成细胞裂解，无需添加终止液。在该工作流程中，使用 Express 裂解液裂解 10–100,000 个培养细胞（贴壁细胞或悬浮细胞)。在 Express 裂解液中可选择添加 Invitrogen ezDNAse，以便在细胞裂解过程中去除基因组 DNA。在室温下孵育 5 分钟后，裂解物可直接使用 Invitrogen SuperScript IV VILO 进行反转录。反转录 (RT) 反应完成后，使用 TaqMan Fast Advanced 预混液和 TaqMan 基因表达检测试剂盒进行 qPCR 分析。

表达范围广泛的各种基因均能实现一致的结果

C2CT Express 与柱法纯化 RNA 的比较

图 1.使用 TaqMan 阵列卡的 96 次检测数据，比较 TaqMan Cells-to-CT Express 试剂盒与使用纯化 RNA 的传统方法的性能。从 10,000 个 HeLa 细胞中获得的裂解物。

灵敏度和准确性均高于传统离心柱纯化 RNA，细胞样本量较低时优势尤为明显

C2CT Express CT 值较低

图 2.10-100,000 个 HeLa 细胞的裂解物样本显示，其 CT 值低于传统离心柱 RNA 纯化方法。使用细胞直接裂解法不会造成 RNA 的损失。

Fast Advanced

Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒：直接从细胞获得实时 qPCR 结果

使用 Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒无需进行 RNA 纯化——使用反转录实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 直接从培养细胞样本中获得相对基因表达结果。该试剂盒采用独特的方法裂解培养细胞，同时去除基因组 DNA (gDNA) 并保持 RNA 的完整性，其包含反转录 (RT) 试剂用于 cDNA 合成，以及 TaqMan 或 SYBR Green 预混液用于实时荧光定量 PCR 分析。

Fast Advanced Cells-to-CT 两步法试剂盒较传统 RNA 纯化方法更快速、更方便，且不影响灵敏度（图 3）。由于工作流程以细胞裂解为基础，因此使用 Cells-to-CT试剂盒不会造成任何 RNA 损失。使用传统的 RNA 纯化方法时，由于过滤器或磁珠洗脱不充分，始终会损失少量的 RNA。因此，当使用Cells-to-CT试剂盒处理样本时，与使用 RNA 纯化流程处理相同样本的结果相比，在检测少量细胞样本 (10–1,000 个细胞）中稀有 RNA 的能力更加出色（图 4）。这一点，结合终止液的优点，使 Cells-to-CT工作流程比竞争对手试剂盒的灵敏度更高，可用于检测高丰度及低拷贝数的转录本。

图 3.TaqMan Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒与其他试剂盒的灵敏度比较。遵照各试剂盒的实验方案裂解 104 个细胞。在每种试剂盒的反转录试剂 (RT) 中加入最高量的裂解液（Cells-to CT 和 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒为45%；其他供应商的产品为 10%）。然后将 25% 的 转录试剂 (RT) 加入磷酸二酯酶 TaqMan Array 的 qPCR 反应中，使用各试剂盒中的 qPCR 预混液。Fast Advanced Cells-to CT试剂盒较早期的 Cells-to-CT 试剂盒平均低 0.5 Ct，较其他供应商的试剂盒低 3.6 Ct（灵敏度较其他供应商的试剂盒高 11 倍）。

Fast Advanced Cells-to-CT 试剂盒对 HepG2 细胞中基因表达结果与传统 Cells-to-CT 试剂盒和竞争供应商的试剂盒的柱状比较图

图 4.检测比较。遵照各试剂盒的实验方案裂解 104 个 HepG2 细胞。在每种试剂盒的反转录试剂 (RT) 中加入最高量的裂解液（Cells-to CT 和 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒为45%；其他供应商的产品为 10%）。然后在其他供应商试剂盒的 qPCR 反应中加入 25% 的反转录试剂 (RT)；在 Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒的 qPCR 反应中加入 30%，在 Power SYBR 试剂盒中加入 45%。分析 10 种不同的基因。大多数基因在该细胞系中未检测到。在检测到的基因中，对于大多数基因，Fast Advanced Cells-to CT 试剂盒的 Ct值低于其他试剂盒。

查看 Huh7 细胞的比较数据

CellsDirect

CellsDirect: 直接从细胞中获得实时 qPCR 结果

  • 提高灵敏度—无 RNA 分离步骤，防止出现样本损失和 PCR 抑制；使用 SSIII 可在低至一个细胞或一次反应中实现出色的灵敏度
  • 节省大量成本—手动操作时间要低于 RNA 纯化试剂盒，而且还缩减了成本
  • 稳定的 qPCR 结果—实时检测 1-10,000 个细胞的靶标
  • 多功能性—与多种细胞系和激光捕获显微切割 (LCM) 技术制备的样本兼容

CellsDirect qPCR 试剂盒可直接从细胞获得高灵敏度、高特异性的实时 qPCR 结果，无需进行 RNA 纯化步骤，每次反应只需不到 10,000 个细胞，最少只需要一个细胞。CellsDirect 技术使用少量的样本实现最高的灵敏度（图 5）。

 

图 5.CellsDirect qPCR 试剂盒最少可对一个细胞样本进行高灵敏度检测。根据 CellsDirect 实验方案裂解并重悬 HeLa 细胞。10倍连续稀释细胞裂解液，从 10,000 个细胞到 1 个细胞。在 ABI PRISM 7700 仪器上，使用 TaqMan 探针和含 ROX 的 CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒检测低丰度靶标 RRKCA。根据标准曲线 (未显示) 得出的效率为 97%，R² =0.998。

CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒集高灵敏度、出色的便捷性和高通量等优势为一体。使用 CellsDirect 一步法试剂盒，只需将细胞裂解物直接加入您的 qPCR 反应混合物中，将其放入实时定量仪器中，即可开始使用。这些试剂盒可用于 LCM 技术采集的样本的基因表达检测（图 6)。

图 6.CellsDirect 一步法 qPCR 试剂盒为 LCM 样品提供灵敏的结果。LCM 样本的 CellsDirect RNA 纯化表明，一步法试剂盒足够灵敏，可以获得样本量少于 100 个细胞的结果。

订购 CellsDirect 重悬和裂解缓冲液

传统

Cells-to-CT试剂盒：直接从细胞获得实时 qPCR 结果

Cells-to-CT 试剂盒提供完整的工作流程，可以直接从培养细胞进行反转录实时荧光定量PCR (RT-qPCR) 分析，无需 RNA 纯化。该试剂盒采用独特的方法裂解培养细胞，同时去除基因组 DNA (gDNA) 并保持 RNA 的完整性，其包含反转录 (RT) 试剂用于 cDNA 合成，以及 TaqMan 或 SYBR Green 预混液用于实时荧光定量 PCR 分析。

Cells-to-CT 试剂盒的所有组分都经过了优化，用于获得一致且稳定的实验结果。这样可以尽可能减少组装单独的样品制备和反转录实时荧光定量 PCR (RT-PCR) 预混液过程中可能出现的不确定性。

为了增加质量保证，Cells-to-CT 1-Step TaqMan 试剂盒已通过 TaqMan 基因表达试验验证，Cells-to-CT 1-Step Power SYBR Green 试剂盒已通过一组常见基因靶标引物验证。两者均表现出与纯化 RNA 相当的性能（图 7）。

图 7.Cells-to- T 试剂盒的灵敏度和有限靶序列的检测。(A) 使用裂解液和纯化的 RNA 进行基因表达检测的灵敏度对比。使用 Cells-to-CT 1-Step TaqMan 试剂盒处理 HeLa 细胞 （10–100,000 个细胞），或者使用 RNA 离心柱法纯化 RNA，重复进行三次。每组样本在 7900HT 实时荧光定量 PCR 系统上进行实时 RT-PCR 分析，检测 Cells-to-CT 对照试剂盒中的 XENO 和 ACTB。(B) 有限靶序列的检测。向 10,000 个 HeLa 细胞中加入越来越多的 NIH3T3 细胞（小鼠）。使用 TaqMan 基因表达 Cells-to-CT 试剂盒（两步法流程）或 RNA 离心柱法纯化试剂对细胞进行处理，重复进行三次。所有样本在 7900HT Fast 实时荧光定量 PCR 系统上进行小鼠特异性基因 (B2M) 和人类特异性基因 (TKT) 反转录，重复三次。

TaqMan Cells-to-CT 基因表达试剂盒与市售其他裂解试剂盒和纯化 RNA 的性能对比。每次裂解反应使用 100–100,000 个细胞进行检测。TaqMan Cells-to-CT 试剂盒方案的灵敏度与使用纯化 RNA 方案的灵敏度相当，并且超过了其他供应商的产品（图 8）。

图 8.使用 Cells-to-CT 试剂盒获得的裂解液在 TaqMan 基因表达检测中获得了较高的灵敏度。使用传统 RNA 纯化方法、Taqman 基因表达 Cells-to-CT 试剂盒或其他供应商 Q 和 S 的裂解方法处理 Hela 细胞（100-100,000 个细胞）。每个试剂盒使用最大推荐样本量进行反转录反应，使用 PPIA TaqMan 基因表达检测试剂盒进行实时荧光定量 PCR 反应，重复进行三次。

Single Cell-to-CT 试剂盒

单细胞分析在候选药物筛选、细胞分化和干细胞研究以及检测单个细胞对特定刺激的反应等应用中至关重要。由于组织由异质细胞混合物组成，因此基于均质群体的基因表达检测不能解释单个细胞中发生的微小但关键的变化。

该试剂盒为基因表达分析提供了经验证的工作流程，并为单细胞研究提供了标准化平台。 

单细胞基因表达应用

稀有细胞或事件

  • 循环转移细胞
  • 母体血液中的胎儿细胞
  • 库中事件

罕见的珍贵样本

  • 归档组织
  • 临床样本（新鲜肿瘤）
  • 生物标记物发现

群体中的单细胞精度

  • 候选药物研究
  • 细胞分化（例如，干细胞）
  • 对刺激的随机反应

实时荧光定量 PCR 应用的完整实验工作流程解决方案

我们已经开发出功能强大的检测设计算法、经优化的预混液、直观的数据分析软件和灵活的仪器，有助于在丰富多样的应用中发挥 qPCR 的强大作用。

如需了解更多信息，请访问：thermofisher.com/quantstudioqpcrfamily

Cells-to-CT 试剂盒相关视频和网络讲座

视频与网络讲座

Cells-to-CT：完整视频

了解如何使用培养细胞制备用于基因表达分析的 RNA，而无需进行 RNA 纯化。仅需 7 分钟即可快速实现 RT-qPCR。 

Cells-to-CT：PBS 溶液

在 Cells-to-CT 方案中，先用 PBS 清洗细胞，然后吸出 PBS。

Cells-to-CT 裂解液

在 Cells-to-CT 方案中，将裂解液加入到含有细胞的孔中，上下吹打混匀，在室温下放置 5 分钟。

Cells-to-CT 终止液

在 Cells-to-CT 方案中，将终止液加入在裂解液中的细胞，在室温下等待两分钟。

Cells-to-CT RT 预混液

观看在 Cells-to-CT 方案中 RT 预混液的制备过程。

Cells-to-CT 试剂盒：一种快速杀死细胞用于基因表达分析的方法

本次 ASCB 演讲的内容为 Cells-to-CT 试剂盒如何帮助您利用 qPCR 测量相对基因表达，无需在扩增前纯化 RNA。

如何使用培养细胞分析基因表达

了解如何在 7 分钟内使用培养细胞制备用于基因表达分析的 RNA。 

使用 Cells-to-CT  试剂盒可以缩短实时荧光定量 PCR 所需的时间

使用 Cells-to-CT 试剂盒，您可以在更短的时间内获得实时荧光定量 PCR 结果。他们快速、简单且功能强大。更少处理步骤有助于确保缩短实验时间，提高一致性，将样本损失降至最低，以及减少污染风险。

应用文档

Cells-to-CT 试剂盒的常见问题解答 (FAQ)

Cells-to-CT 试剂盒的常见问题解答

Cells-to-CT 试剂盒如何工作？

Cells-to-CT 试剂盒提供完整的工作流程，可以直接使用培养细胞进行反转录实时荧光定量 PCR (qRT-PCR) 分析，无需 RNA 纯化。反转录和 qPCR 在一个孔中进行。该试剂盒使用反转录 (RT) 试剂进行 cDNA 合成，并提供基于染料（SYBR Green 染料）或基于探针（TaqMan 探针）的预混液用于实时荧光定量 PCR 分析。

一步法和两步法试剂的区别在于，一步法试剂盒将反转录和实时荧光定量 PCR 融到一个步骤中，缩短了实验所需的整体时间。

Cells-to-CT 试剂盒为何比标准 RNA 纯化更为“绿色环保”？

根据以下 10 个样本的实验，Cells-to-CT 试剂盒在 7 分钟内产生 6g 塑料废弃物和 0 mL 有害废弃物，相比而言，采用 RNEasy 进行标准 RNA 纯化，则会产生 140 g 塑料废弃物和 18 mL 有害废弃物。

RNeasy
35分钟
140 g 塑料废弃物
18 mL 有害废弃物		RNeasy reduces waste and hazardous materialsCells-to-CT
7 分钟
6.6 g 塑料废弃物
0 mL 有害废弃物
如何从 Cells-to-CT 反应中分离基因组 DNA？
  1. 请确保从孔中移除所有培养基
  2. 移除培养基后，用等体积的室温 1X PBS 溶液进行洗涤
  3. 请确保在室温下进行反应（如果放置在冰上的孔板被快速移动至工作台，或添加的是冷裂解溶液，则裂解反应可能达不到室温）
  4. 在加入细胞之前，请将裂解溶液加热至室温
  5. 让裂解反应进行 8 分钟
  6. 在 25°C 下进行长达 8 分钟的裂解反应
是否可以使用 Cells-to-CT 试剂盒进行多重反应？

可以。Cells to CT 试剂盒与多重 qPCR 检测试剂盒兼容。如果要检测多个靶标，我们建议使用 TaqMan 形式。

当使用 Cells-to-CT 试剂盒时，会出现 gDNA 污染问题吗？

Cells-to-CT 技术采用独特的方法裂解培养细胞，同时去除基因组 DNA (gDNA) 并保持 RNA 的完整性。因此，通过按照方案中的裂解/DNase 处理步骤，qPCR 反应过程中将不会出现 gDNA 污染问题。

了解 Cells-to-CT 试剂盒的更多信息


Single Cell-to-CT 试剂盒的常见问题解答

Single Cell-to-CT 试剂盒是否能制备充足的材料以便使用基因芯片分析而不是 RT-PCR进行单细胞检测分析？

是的，这款试剂盒可以制备充足的材料用于基因芯片分析。预扩增后的样本体积为 26.5 µL，1:20 稀释后的总体积为 530 µL，这足以用于大量 TaqMan qPCR 检测、TLDA 卡或用在 QuantStudio OpenArray 中。

激光显微切割 FFPE 单细胞可以与 Single Cell-to-CT 试剂盒一起使用吗？

虽然我们还没有在内部尝试过，但有理由相信这种方法应该是可行的。然而， 可能需要围绕反转录 (RT) 步骤优化方案，因为 FFPE 样品具有许多可能会影响反转录酶效率的 RNA 交联。在添加 RT 之前将样品在 80°C 下加热 10 分钟，以获得良好的 cDNA 转化，这应该会改善反转录。

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与 Cells-to-CT 试剂盒兼容的细胞系

细胞系生长类型来源物种来源组织
A549贴壁智人肺癌
BJ贴壁智人包皮
CHO-K1贴壁中国地鼠（仓鼠）卵巢
COS-7贴壁埃塞俄比亚绿猴（猴）肾脏
DU-145贴壁智人前列腺
HEK-293贴壁智人肾脏
HeLa贴壁智人宫颈腺癌
HepG2贴壁智人肝癌
Huh-7贴壁智人肝
Jurkat悬浮智人急性 T 细胞白血病
K562悬浮智人骨髓
ME-180贴壁智人宫颈表皮样癌
NCI-H460贴壁智人肺
Neuro 2A贴壁小家鼠脑
NIH/3T3贴壁小家鼠（小鼠）胚胎成纤维细胞
PC-12贴壁褐家鼠（大鼠）肾上腺嗜铬细胞瘤
PT-K75贴壁野猪（猪）鼻甲粘膜
Raji悬浮智人B 淋巴细胞
SK-N-AS贴壁智人脑神经母细胞
SK-N-SH贴壁智人脑成纤维细胞
U-2 OS贴壁智人骨骼
U-87 MG贴壁智人脑胶质母细胞瘤 

注释：由于细胞大小和组成的差异，对于不同的细胞系，每次裂解反应的最大细胞数可能略有不同。通过使用 TaqMan Cells-to-CT 对照试剂盒对抑制效果和最小样本量进行测试。

Cells-to-CT 试剂盒订购信息
Cells-to-CT 试剂盒
Cells-to-CT 试剂
Fast Advanced 试剂盒
CellsDirect 试剂盒
Single Cell-to-CT 试剂盒
Express 试剂盒

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Cells-to-CT 试剂盒的相关资源

产品资料

实验方案

实验提示与技巧

研究论文

应用文档

仅供科研使用，不可用于诊断目的。