NGS文库制备，如何更方便、更快速、更准确？

自第二代测序技术（NGS）一面世，便吸引了众多目光。而如今，NGS已经广泛应用于多个领域，从基础科学研究，到遗传疾病、生殖健康及癌症研究等，这些都离不开二代测序技术。

并且为了获得准确的测序结果，高质量的文库至关重要。但测序文库的制备，实则是一个繁琐且耗时的过程，只要过程中稍有失误，便会影响文库质量，最终影响测序结果。

回想一下，你在进行文库制备过程中，是否也曾遇到这些情况：

加样时，一个小走神，额，这个孔我加了还是没加？
混匀试剂时，总是怀疑是否真的混匀了~
文库制备的过程太长了，总是等啊等……
辛辛苦苦做完整个文库制备流程，文库质量却差的没法用，只好收拾河山，从头再来.. TT

而现在，为了让 NGS 文库制备更方便、更快速、更准确，赛默飞世尔科技基于领先的酶学技术及多年的酶学研究经验，全新推出一系列 NGS 文库制备新产品，帮助您提高 NGS 文库制备成功率。

以全转录组 RNA-Seq 文库构建为例，其文库构建流程主要为：RNA 片段化、接头杂交、接头连接、反转录和 PCR 扩增引入 index。

△ Collibri™ Stranded RNA Library Prep Kit 建库技术图示

△ Collibri™ Stranded RNA Library Prep Kit 详细实验流程

多色示踪染料有助于避免错误

借助示踪染料技术，可以实时纠正文库制备中加样及混合错误。在如下示例中，96 孔板中有一个孔没有充分混匀或没有加入相应的试剂。该孔呈现出不同的颜色，可及时发现并纠正失误，之后才继续进行文库制备，以确保最高的文库制备成功率。

△ 试剂未完全混匀

△ 试剂未添加

新上市 Invitrogen NGS 文库制备产品可用于以下应用：

• 全转录组文库制备
• 文库定量
• 文库扩增

一、全转录组文库制备

Invitrogen Collibri 链特异性 RNA文库制备试剂盒（用于Illumina平台）

Invitrogen Collibri链特异性RNA文库制备试剂盒可在6.5小时之内快速制备去除rRNA的总RNA-Seq文库（用于Illumina平台），可在4.5小时内快速制备用于Illumina平台的mRNA-Seq文库，且链特异性 > 98%，甚至可从降解的样品（如FFPE组织）中进行制备。

• 方便快速 -- 可在6.5 h内获得全转录组链特异性文库（含rRNA去除步骤）
• 可提供H/R/M rRNA去除试剂盒 -- 从100-1000 ng人、小鼠或大鼠总RNA中高效去除rRNA
• 颜色视觉提示 -- 可提示是否加入了试剂，或者试剂是否完全混匀

二、文库定量

Invitrogen Collibri文库定量试剂盒

基于qPCR的Invitrogen Collibri文库定量试剂盒可用于大批量样品的定量，是对文库有效浓度进行准确定量的理想方法。

• 准确定量文库 -- 可以定量从各种样品类型（包括降解的样品）制备的文库
• 易于使用 -- 所有组分均为即用型，无需制备试剂
• 颜色视觉提示 -- 降低反应配制期间移液错误的风险
• Platinum热启动技术 -- 提供卓越的特异性、灵敏度，便于室温下配制反应体系

三、文库扩增

Invitrogen Platinum SuperFi 文库扩增预混液

Invitrogen Platinum SuperFi文库扩增预混液是一种即用型溶液，专为NGS文库扩增而设计。预混液包括Invitrogen Platinum SuperFi DNA聚合酶以及含有所有必需成分的专用反应缓冲液，以获得均一的转录覆盖度。

• 高保真度 -- 将错误率降至最低
• 均一扩增 -- 偏好较小（不受GC含量影响）
• 预混液 -- 即用型形式增强易用性
• 颜色视觉提示 -- 有助于降低反应配制期间移液错误的风险

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